肠杆菌科细菌产AmpC酶的检测及其耐药性分析

摘要

感应门制作

目的：研究肠杆菌科细菌产AmpC酶情况及其对抗生素的敏感性以期指导临床用药。方法：收集临床分离的对第三代头孢菌素耐药的肠杆菌科细菌62株，采用纸片扩散法(K-B法)进行13种抗菌药物敏感性测定及耐药菌株的初步筛选；通过酶粗提物头孢西丁三维试验检测AmpC酶，同时应用PCR 技术对产酶菌株进行ampC结构基因的PCR扩增。结果：临床分离的62株肠杆菌科细菌对亚胺培南、头孢吡肟及阿米卡星耐药率低，但对氨苄西林-舒巴坦、头孢曲松、头孢他啶等抗菌药物的耐药率较高。在喹诺酮类抗菌药物中左氧氟沙星耐药率明显较环丙沙星低。在62株肠杆菌科细菌中产AmpC 酶菌株共8株，占总菌株数12.90%；产AmpC酶菌株对各种抗生素的耐药率比非产酶菌株明显增高。结论：肠杆菌科细菌耐药状况较为严重，应对AmpC 酶检测及监测给予足够重视；产AmpC酶细菌所引起的感染以亚胺培南或头孢吡肟为首选，左氧氟沙星、阿米卡星等可作为选用药物之一。

关键词：AmpC酶；肠杆菌科细菌；三维试验

The Detection of AmpC enzyme and Analysis of Drug-Resistance

in Enterobacteriaceae

Abstract: Objective: To investigate the status, antibiotic susceptibility of AmpC β Lactamase-producing Enterobacteriaceae which are resistant to the third-general cephalosporins for the basis of treating infections. Methods: Clinically isolated 62 strains of the Enterobacteriaceae were collected. The isolates harboring AmpC β-lactamases were detected by cefoxitin three-dimensional extract test and PCR amplification of ampc structure gene were studied. The method of Kirby-Bauer agar diffusion with the standard of NCCLS was used for antibiotic susceptibility to 13 kinds of antibiotics. Results: The resistant rates of 62 Enterobacteriaceae strains were low to cefepime, imipenem and amikacin, but high resistance to ampicillin/sulbactam, ceftriaxone, ceftazidime. The resistant rates of clinical isolates to levofloxacin was lower than ciprofloxacin. 8(12.9%) strains which produced AmpC β-lactamases were determined from 62 strains of the Enterobacteriaceae . The resistant rates of the Enterobacteriaceae producing AmpC β- lactamases were significantly higher than those of non-producing AmpC. Conclusion: The resistant status of Enterobacteriaceae is severe. Much attention should be paid to of AmpC β-lactamase detection and surveillance. Imipenem is the most effective antibiotic for the treatment of infections caused by AmpC producing strains. Cefepime, levofloxacin and amikacin were also effective for the treatment of such infections.

Key words: AmpC β-lactamase; Enterobacteriaceae; Three-dimensional extract test.

前言

随着β-内酰胺类抗生素的广泛并且不合理的应用，导致细菌对其耐药日益增多，国内外研究均表明，阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及弗劳地枸橼酸杆菌等肠杆菌科细菌对第三代头孢菌素的耐药率在逐年上升。目前认为革兰氏阴性杆菌对第三代头孢菌素耐药的原因主要是由于细菌产生质粒介导的超广谱酶（ESBLs）和染体介导的Class C酶如AmpC酶[1]。近年来又发现革兰氏阴性杆菌还存在质粒介导的AmpC酶，因而增加了细菌耐药的复杂性，同时导致耐药菌的广泛传播和临床对该类细菌感染的困难。但现在临床实验室尚无快速检测产AmpC酶菌株的方法，有关产AmpC酶菌株流行状况的调查资料甚少，其严重性一直被低估。在本研究中，我们检测了62株肠杆菌科细菌产AmpC酶情况并分析其耐药性，以了解本地区耐头孢类抗菌药物肠杆菌科细菌的分布﹑耐药发生率及耐药情况，为临床产AmpC酶细菌的感染提供理论指导。

材料与方法

muhdpe合金管1 实验材料与仪器

折叠麻将桌1.1 菌株来源

1.1.1 实验菌株

62株肠杆菌科细菌临床分离株（不含同一病例相同部位重复分离菌株，且至少对一种第三代头孢菌素耐药）来自我院2003年6月~2003年12月的各种不同细菌感染的住院患者。其中下呼吸道感染25例，泌尿系统感染16例，外科切口感染12例，全身感染5例，其它感染4例；全部菌株均重新经VITEK系统（BioMerieux，法国）鉴定确认。

1.1.2 标准菌株

大肠埃希菌ATCC25922（由国家临床检验中心购得），标准高产AmpC 酶阴沟肠杆菌029M（由华中科技大学同济医学院检验科惠赠）。

1.2 药敏纸片

空调衣

哌拉西林-三唑巴坦（Piperacillin-lazobactam TZP），批号：310425；头孢噻肟-克拉维酸（Cefotaxime-clavulanic acid CD03），批号：312147；氨苄西林-舒巴坦（Ampicillin-sulbactam SAM），批号：312154；头孢西丁（Cefoxitin FOX），批号：314158；头孢曲松（Ceftriaxone CRO），批号：313421；以上纸片为英国OXOID公司产品。头孢噻肟（Cefotaxime CTX），批号：032547；头孢他啶（Ceftazidime CAZ），批号：035412；头孢吡肟（Cefepime FEP），批号：032547；氨曲南（Az-treonam ATM），批号：032862；亚胺培南（Imipenem IPM），批

号：031758；环丙沙星（Ciprofloxacin CIP），批号：033478；阿米卡星（Amikacin AMK），批号：035329；左氧氟沙星（Levofloxacin LVF），批号：032436；以上纸片均为北京天坛药物生物技术开发公司产品。

1.3 培养基与试剂

(1)增菌培养基为胰大豆蛋白胨肉汤（英国OXOID公司），三维试验培养基为M-H琼脂（英国OXDID公司）；

(2)头孢硝噻吩粉剂（英国OXOID公司）；

(3)TaqDNA聚合酶、dNTP、PCR核酸分子量标准及1%琼脂糖（上海生工生物技术公司）。

1.4 仪器

恒温干燥箱：101-1型，上海浦东跃欣科学仪器厂

压电陶瓷驱动电源

恒温水箱：DHW-600型，北京爱琦霞商贸中心

恒温箱：DG-407型，成都电烘箱厂

超低温冰箱：日本Sanyo公司单宁酶

高速冷冻离心机：TGL-16G型，上海分析仪器厂

冷冻离心机：C-422型，法国JOUAN公司

恒温空气摇床：HZQ-C型，哈尔滨东明医疗仪器厂

DNA扩增仪：OMN-E型，英国HYBAID公司

水平电泳仪：DYY-III7B型，北京六一仪器厂

多功能暗箱式紫外透射仪：ZF-90型，上海顾村电光仪器厂

凝胶DNA成像仪：DNA/RNA800型，美国基因公司

本文发布于:2024-09-24 10:15:32，感谢您对本站的认可！

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