1.1.1以无菌操作，取样25 g放入225mL灭菌生理盐水或灭菌乳钵中，经充分振摇作成1：10均匀稀释液。 1.1.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。
1.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。
土压力盒1.1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
1.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至45℃营养琼脂培养基，注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照
1.1.6待琼脂凝固后，翻转平板(使平皿底朝上)，置36±1℃温箱内培养48±2h。自动化测试脚本
1.2菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
1.3菌落计数的报告
1.3.1平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
1.3.2 稀释度的选择
北斗卫星导航仪1.3.
2.1 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表1中例1)。
1.3.
2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)。
1.3.
2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。
1.3.
2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5)。
1.3.
2.5 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表1中例6)。
1.3.
2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
1.3.
2.7 若只有一个稀释度菌落在适宜计数范围内，计算平均值X 稀释倍数；作为结果；若两个连续稀释度的菌落都在适宜计数范围内时按公式计算：
例次稀释液及菌落数两稀释
液之比菌落总数报告方式
[cfu/g]
10-1 10-210-3
1多不可计164201640016000或 1.6×
104
2多不可计29546 1.63775038000或 3.8×导线测量法
104
3多不可计27160 2.22710027000或 2.7×
104
4600350313313000310000或 3.1×
过氧化氢灭菌器检测105 527115270270或2.7×102 6000＜1×10 ＜10
7多不可计305123050031000或 3.1×
104
2.大肠菌测定步骤
大肠菌系指一能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌数系以100mL(g)检样内大肠菌最可能数(MPN)表示。 操作步骤
2.1 检样稀释
2.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做
成1:10的均匀稀释液。
2.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1:100的稀释液。
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2.1.3 另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。
2.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种3管。
2.2 乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌阴性，如有产气者，则按下列程序进行。
2.3 分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养
18-24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染和证实试验。
2.4复发酵实验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌菌落1-2个进行革兰氏染，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌阳性。
2.5 报告
根据证实为大肠菌阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌的MPN值。
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