MCP—1
22
f一2j
第22卷第9期
2IxJ0年9
第二军压大学
ACI'AACADEMIAEMEDICI%~EMILITABISTERTL~.E
v01.22.No9
seD.2O∞815
文章编号:1~5404(2000)09-0815—04
MCP.1McAb和Losartan拮抗VSMCs的增殖与迁移效应的实验研究 !
至，童垦(第三军医大学附属新析医院心血管内科，重庆4㈣7.3,; 提要：目的探讨单梭细胞趋化蛋白一I单兜隆抗体(MCP-IMcAb)或Log.,arlali拮抗血管紧张素Ⅱ(Ang II)介导的血管平滑肌细胞{VSMCsj增殖与迁移效』直的可能眭，为防治动脉硬化(As)提供一定的理论依据:
方法采用改良的Bo~den小章法榆测VSMC~的迁移效应；以Ⅵ下T法,H—TdR掺人法3H一晡氨酸标记法和
VSMCs计数评价VSMCs的增殖效应：将培养的VSMCs分为5组:2%胎牛血清(2%FCS)组,AngI1组(其浓度为
10.～10mob'L)art1组L其浓度为10一10m01/[),MCP-IMcAb组(终浓度为10t*g/.d)}Ⅱ阳性对照
组(含5%的酵母多糖活化血清)结果①AnglI具有剂量依赖性的促进VSMCs增殖与迁移效应;@MCP-I
McAb或La山n能有效地拈抗AtrgII介导的VST',ICs增殖与i上移效应结沦MCP-IMcAb或Losartar，对动脉
硬化性疫病可能具有较大的幢用前景
关键词：董王堡墨；增殖：迁移：单棱细胞趋化蛋白一1克隆抗体
中国法分类号:P,32212m32q25:R392Il文献标识码:A
襁I蝣':
M.'-P一』卅.，三嘲
AntagonisticeffectofMCP-?1McAbandLosartanonproliferationandmigra- tionofAng-Ⅱ-mediatedVSMCsinvitro
电渣重熔HEZuo—yun,LIAi—rain(DeparhnentafCardiology,XinqiaoH.spita].l~firdMilitaryMedkalUniversity.Chong qing400037,Chm)
Abstract:0bjectiveTosindythepossihilityoflnoll~-'vteehemotacticprotein—lmonoclohalanti.
1)od(MCP-1McAb)0rLosarianrealagonizirtgpmlifevationandmigrationofculturedvasc ularSlllIX)th
mu~leceils(VSMCs)mediatedhyangiotensin11(Ang
Ⅱ)Methods_rheculturedVSMCsweredi.
videdinto5groups,ie.2%tbtaicalfsertlnlgroup(2%FCSgToup),A11group(coneentrationo f
角度测量>家用食品搅拌机
lO"一lOmol/I),Losarlangroup(concentrationof10一10.mol/L),MCP一1MeAbgroup(final
concentrationof10p.g/rn1)andpositivecontrol(concentration5%z?~llOSal1)Themigrati oneffectsof
culturedVSMCswereexaminedbyamadifiedBoyden'sdmnrber.Andthepmlil;erationeffe ctwasevalu.
atedwith_Ⅵ'IT.thiazoylbluehflaking,.H—RandH—prolineincorporationaswellasVSMCst20Unt
Results①A唱lIexertedanenhancingeff~:tontheproliferationandmigrationofculturedVSblCsina eoneenteation—dependentrrkq/InerI(BothMCP-1Mcabam1Losartallcouldml~gonizethepmliferation
andmigxationofAngⅡ一mediatedVSMCs.ConclusionItissuggestedthatMCP-1McAband[x~sattarl bothplaypredominatltrolesinitahibitingthepmliferatior~andmigrationofVSMCsandarep rospectivein
thetreatmentofatherosclemtiedi~ases
Keyw0rdsvascularsmoothmus~.1ecellstproliferation;migration;IIIOIIfX'}/[I~ehemota eti(Drolein.1
monoelonalantibody
近来研究表明血管紧张素Ⅱ(A?oIensinⅡ,AngⅡ)
基金项目：国家自然科学基金资助项目(396o~4t)
作者简卉：何作~:(1939一)，男，辽宁肯大连市凡.硕.主任匿师
教授，主要从事动脉硬化血栓胜疾病的发病F几制与防治
方面的研究.发表论文96篇电话:(023}65220165
收稿日期:20呻-01.t5；修回日期:2000~95.o8
对血管平滑肌细胞(V ascularsmoothmusclece11s.
VSMCs)具有生长激素样作用，在冠状动脉粥样硬化性
心脏病和血管成形术后再狭窄等闭塞性血管病变的发
生，发展中起着重要作用.本实验目的在于探讨AngⅡ
对培养VSMCs增殖与迁移效应的影响，并探讨单核细
胞趋化蛋白.1单克隆抗体(M0noe)~echemotaeticurotein.
8l6第三军医大学第22卷
1monoclonalantibody.MCP一1l',1cAb)t~1L~trtan拮抗Ang
Ⅱ介导的上述生物效应，为防治或消退动脉粥样硬化
提供一定的理论依据.
1材料与方法
1.1vSMCs迁移试验
采用改良的Boyden小室法取生长活跃的培养VSMCs{第
2～5代)进行实验.0.25%胰蛋白酶消化VsMcs.用含2%胎牛
血清(2%FCS)的M199培养液将细胞密度调为I×Io'/ml，使细胞在培养液中悬浮1h以恢复形态.混匀细胞悬液，吸取
035m1分别加入Borden小室的上室内，吸取古2%FCS的
M199培养液0.5ml加^Bovden小室的下室内，此为2%FCS 组；下室内分别加^l0～lOmol/L浓度的AngⅡ,10～
10n~lJ'L的Losarlan,5%的酵母多糖活化清盟在上室巾加
^终浓度为10的I~ICP-1MeA5，则分别为A峭Ⅱ组Losar—tan组，阳性对照组及I'flCP-17/IcAb组，并存s劬组和M(2P-I McAb组中分别在其下室中加^AngⅡ10molJI～封闭下室小孔，置37,5%二氧化碳孵箱内培养6h.取出Boyden小室内
的微孔滤膜,PBS洗2次，无水乙醇固定10s以杀死细胞,PBS 洗2次舌以Harris苏木素染5咖n，蒸馏水冲冼,1%盐酸酒精脱3nfin，流水冲洗,1%NdtCO，显蓝染3min一水洗后,
37烤膜过夜，无水乙醇脱水，二甲苯透明，将滤膜上载玻片
中性树胶封片，在显微镜下，计算滤膜下10山tt处随机计数膜内不同层次的VSNCs数.每张膜观察10个高倍视野(10ItF). 计算其总数：硬份滤膜内的移动细胞平均数表示VSNCs的迁U
=
25
围1A|lgⅡ和2%FIN对VSCI~迁移的影响
F蟾1lglt'eetofAIlgⅡ姗d2%FGSonVSCI~IIIigrad叽
l:Gr,ntml(2%FCs);2,3,4,5:10.,lO一,lO.1O
mol/LAngI1+2%FcS;*:P<005,**:P<0叭
eontrol
2.2VSMCs增殖试验结果
22.1AngⅡ促进VSMCs的细胞代谢,DNA和蛋白质台成Angll在10...一lOmol/L范围内，呈其浓度或剂量依赖
移效应程度.
12vSMCs增殖效应检测
1.21细胞生长曲线检测以~rrr法检测2%FCS,
F-121tAN培养液对照组,.4mgI1组,l~sartan组和'~/IFA:'-1l"leAb组I.22VSMCs内DNA和蛋白质台成的检测以H.1掺磁性刀架
人法和H_脯氨酸标记法检测上述4组的DNA和蛋白质合
成量,
I23vsM如计数将细胞密度调整为4×l0}/ml，以每孔
ln加^24孔培养板孔中，分别加八2%FCS(2%FCS组),29"i
~l/LAngII(A几g丌组),AngⅡ10r~l/l/L
l~arlan十2%FCS(LD组)和10一r~l/LAngⅡ+10n
NCP-I~.1eAb(I~IFA:'-IMcAb组)常规培养96h后收集细胞，用血
球汁数板计数各孔VS~,ICs数量.每组试验重复5淡，取其均值
1.3统计学处理
计量资料以±s表示，采用单因素方差分析比较组间差
异的着性
2结果
2lvSMCs迁移试验结果
2%F有少量的vsM移动，提其含有生理量的
VSNCs的趋化物质或生长因子；在.4mgI1组中,VSNCs的迁移数
仿真软驱
量随着Ang丌浓度由l0'至10I七mol/L的递增而明显的增加
(P<0.叭).见图I;Lasarlan或MCP-1~,leAb均能显着地抑制
光敏三极管Ang11介导的~SMCs的迁移效应(P<0叭)，见崮2
2345
围2"瞄mn和MCP-1McAb对vsM迁移的影响
Fig2Effectofk日岫mldMCl~.IMe,.Ab∞VS蚰∞
】
:Control(AngI1lOmL);2,4,5:I10.
10,10一mol/L+.4mgⅡ10tool/L;3:MFA:'-1№Ab+
AngI110'tool/L;*:P<0OI∞l1ol
性的增加VSI',,ICs内细胞代谢,DI'qA和蛋白质合成量，然而A叫Ⅱ
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