将整株按照花球、茎、叶、根4个器官分割,清洗,叶片取植株中部健壮的成熟叶片, 重复间取相同部位。
含水量测定
所需仪器:烘箱,天平,滤纸
取样,洗净,105℃杀青2小时,70℃烘干至恒重,测定其含水量
可溶性固形物测定
一、试剂:
二、仪器:手持式折光仪(手持式糖度计)、研钵、滴管、滤纸、擦镜纸、蒸馏水 三、实验步骤
1.样品制备:取5.0 g果实放入研钵磨碎,4000 r/m,离心10 min取汁液。 2.调零:打开手持式折光仪棱镜盖板,用擦镜纸轻擦折光镜面,滴几滴蒸馏水于折光镜面上,合上盖板,将仪器对向光线,由目镜观察,转动棱镜旋钮,使视野分成明暗两部分。若有偏离,用专用螺丝刀补偿器旋钮,使视野分为黑白两,同时使明暗分解线与标尺上的0位重合。打开盖板擦干水分
3.测定,滴入样品在折光镜上,并读取读数。重复三次,计算平均值和标准偏差。 叶绿素测定
一、仪器设备:1)分光光度计;2)电子顶载天平(感量0.01g);3)研钵;4)棕容量瓶; 5)小漏斗;6)定量滤纸;7)吸水纸; 8)擦境纸;9)滴管。
二、试剂:1)80%丙酮;2)石英砂;3)碳酸钙粉。
三、实验步骤
1)取新鲜叶片(或其它绿组织)或干材料,擦净组织表面污物,剪碎(去中脉),混匀。
2)称取剪碎的新鲜样品 0.5g ,共3份,分别放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及2~3ml 丙酮,研成均浆,再加丙酮10ml, 继续研磨至组织变白。静置3~5min。
3)取滤纸1张,置漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,过滤到25ml棕容量瓶中,用少量丙酮冲洗研钵、研棒及 残渣 数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。
4)用滴管吸取丙酮,将滤纸上的叶绿体素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿为止。最后用丙酮定容至25ml,摇匀。
5)把叶绿体素提取液倒入光径1cm的比杯内,以80%丙酮为空白,在波长663nm和645nm下测定吸光度。
四、实验结果计算
叶绿素a的含量 = 12.7OD663 - 2.69OD645
叶绿素b的含量 = 22.9OD645 - 4.86OD663
叶绿素a、b的总含量 = 8.02OD663 + 20.20OD645
Brandford法检测蛋白质含量鬼屋道具
一、仪器和试剂
1.仪器:分光光度计、移液抢、具塞刻度试管、烧杯、量瓶、研钵
2.试剂:考马斯亮蓝G-250染料、牛血清蛋白、90%乙醇、85%磷酸
考马斯亮蓝G-250:称取100mg考马斯亮蓝,溶于50ml90%乙醇中,加入100ml85%的磷酸,再用蒸馏水定溶到1L,贮于棕瓶中。
标准牛血清蛋白溶液:100ug/ml牛血清蛋白:称取牛血清蛋白25mg加水溶解并定溶至100ml,吸取上述溶液40ml,用蒸馏水稀释至100ml即可。
二、 实验步骤
取6支试管,按下表加入试剂(0~100ug/ml的标准蛋白)。混合均匀后,向各管中加入5
ml考马斯亮蓝溶液,摇匀,并放置5min左右,用1cm光径的比皿在595nm下比测定吸光度。以蛋白质浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
绘制标准曲线的各试剂加入量
管号 1 2 3 4 5 6
标准蛋白质/ml 0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00
水/ml 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0
蛋白质质量/ml 0 20 40 60 80 100
2.样品的测定
(1)样品的提取:称取鲜样0.25-0.5g,用5ml水研磨成匀浆后,3000r/min离心10min,取
上清液1.0ml(视蛋白质含量适当稀释)于试管中(每个样品重复2次)。
(2)加入5ml考马斯亮蓝溶液,充分混合,放置2min后在595nm下比,测定吸光度,并通过标准曲线查得蛋白质含量。
四、结果计算
手压式旋转拖把 样品中蛋白质含量 = (mg/g)
式中:C—查标曲值;VT—提取液总体积;WF—样品鲜重;VS—测定时加样量,ml。
总糖和还原糖的测定──3,5-二硝基水杨酸法
一、试剂
3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂:称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中,溶解后移入1000ml容量瓶中,加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml,再加入45g丙三醇,摇匀,冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液:滑石粉母粒准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100ml,即含葡萄糖为2.0mg/ml。
6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%)用蒸馏水稀释到500ml。
碘-碘化钾溶液:称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH:称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
二、器材
WFJ UV-2000型分光光度计,水浴锅,电炉,15mm×180mm试管。
三、操作方法
1、葡萄糖标准曲线制作
取5支15mm×180mm试管,按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号 | 葡萄糖标准液(/ml) | 蒸馏水(/ml) | 葡萄糖含量(/mg) | OD540 |
0 | 0 | 1 | 0 | |
1 | 0.2 | 0.8 | 0.4 | |
2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | |
3 | 0.6 | 0.4 | 1.2 | |
4 | 0.8 | 0.2 | 1.6obd数据 | |
5 | 1 | 0 | 2红豆杉提取物 | |
| | | | |
在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml,于沸水浴中加热2min进行显,取出后用流动水迅速冷却,各加入蒸馏水9.0ml,摇匀,在540nm波长处测定光吸收值。以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显操作为空白调零点。以葡萄糖含量(mg)为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘制标准曲线。
2、样品中还原糖的提取
准确称取 0.5g藕粉,放在100ml烧杯中,先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状,然后加入40ml蒸馏水,混匀,于50℃ 恒温水浴中保温20min,不时搅拌,使还原糖浸出混。过滤,将滤液全部收集在50ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,即为还原糖提取液。
3、样品总糖的水解及提取
准确称取0.5g玉米淀粉,放在锥形瓶中,加入6mol/L HCl 10ml,蒸馏水15ml,在沸水浴中加热0.5h,取出1~2滴置于白瓷板上,加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝。水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂,以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红,并定容到100ml,过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度,混匀,即为稀释1000倍的总糖水解液,用于总糖测定。
4、样品中含糖量的测定
取7支15mm×180mm试管,分别按下表加入试剂:
项目 | 空白 | | 还原糖 | | | 总糖 | |
0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
样品溶液/ml | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
3,5-二硝基水杨酸试剂/ml | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| | | | | | 模具导柱 | |
加完试剂后,于沸水浴中加热2min进行显,取出后用流动水迅速冷却,各加入蒸馏水9.0ml,摇匀,在540nm波长处测定光吸收值。测定后,取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖量。
五、结果处理
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量:
式中:C──还原糖或总糖提取液的浓度,mg/ml;V──还原糖或总糖提取液的总体积,ml;m──样品重量,g;1000──mg换算成g的系数。
注意事项:标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行,一起显和比