2007-11-08 13:46:10| 分类： 生物技术 | 标签： |字号大中小 订阅
采集藻类要以各种藻类的生态环境、生活习性为基础。藻类主要分布在水中，如湖、河、海洋，可分为固着、漂浮、浮游三类。在陆地潮湿处也有分布。从气候条件看，一般在温暖季节，藻类的种类和数量较多。有一些种类如蓝藻在气温较高时生长特别繁盛；也有些种类如硅藻、甲藻在气温凉爽时较多。 一、目的
学习藻类的采集、标本制作和保藏方法。
二、用具和药品
镊子，小刀，浮游生物网，玻璃瓶，玻璃管，铁丝篮，培养皿，台秤，骨匙，三角烧瓶，量筒，采水瓶，广口瓶，橡皮塞，温度计，绳子，标本瓶，指管，记录簿， 25和13号绢纱，硬纸标签，铅笔，黑纸，吸管，盖玻片，载玻片，铅块（或不锈钢块），表面皿，标本盘，毛边纸，纱布，道林纸，标本夹，报纸。
碘，碘化钾，福尔马林，95％乙醇，醋酸，酪酸，冰醋酸，甘汕，阿拉伯树胶，水合氯醛，铁矾，海氏苏木素，明胶，石炭酸，火漆，加拿大胶，二甲苯，pH试纸。
三、操作
1．标本的采集
藻类分布极广，在不同环境条件中，藻类的组成成分是不同的。因此，采集不同生境中的藻类，应根据它们的生长情况，采取不同方法。
（1）着生藻类：对于生长在其他物体上较大型藻类，一般用手或镊子采取。应尽可能采取
整个植物，包括它们的基部或着生部分。生长在石上的，最好用小刀刮取；生长在水生高等植物上的，要用镊子取下生长藻类最多的部分叶、茎一同保存（尽可能记下植物名称）；生长在土壤上的，最好用刀铲取，尽可能少带泥土（如专作土壤藻类研究，则应分层采土，进行培养）；生长在树干上的，要用刀削取。
微型藻类中也有不少是附生的，更有一些混生在其他植物（如苔藓等）之间，在有这类藻类生长的部位，常具有各种颜的斑点、斑块、颗粒、粘质层、皮壳状、薄膜等标志，应选择生长最多部分用刀刮取或削取。岩石上不易刮下的种类，如急流中或海岸岩石上的藻类可敲取或取小石块一同保存。
（2）漂浮藻类：在各种静水水体中，常漂浮一些丝状藻藻丛。采集时应注意取同一藻丛上不同颜部分或不同颜的藻丛，特别是变成黄褐部分常为生殖时期的植物体。如采集较长的、分枝的藻类，不宜折取一段藻体，而应尽可能采整体。
（3）浮游藻类：先准备好采集工具，在水面较宽、较深水体中要用：
（1）浮游生物网 一般用25号（网孔为0.06毫米）筛绢做成。在湖泊内应用的浮游生物网为圆锥形，口径约20厘米，网长约60厘米（见图）。
制作时，可用直径约3～4毫米的铜条或粗铅丝作一环，来支持网口，使它成环形。用金属（如铝、钢精或铜）或玻璃小筒，套结在网底，通常称为网头，用来收集过滤到的藻类。由于滤液内有浮游动物，如时间放得较久，往往藻类有不少被浮游动物吞食，所以若不马上观察，需用固定液固定。若用来分离藻种，可用13号筛绢（网孔0.1毫米）再将滤液过滤一次备用。有些地方购买筛绢较困难，也可不用浮游生物网，而用采水瓶，或一般器皿。但因藻类个体较少，最好多采些水样，待沉积后观察。 （2）采水瓶 采取垂直分层定量藻样和水样需用采水瓶。这种工具式样规格繁多，见图是可以自制的简易采水瓶，比较实用。
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制作方法是取一个500mL（或1000mL）的广口瓶，瓶底附一块重1.5kg的铅块（或不锈钢块），用铅丝固定在瓶底。瓶口橡皮塞穿三个孔，一孔插进水的长玻管，一孔插排气和出水的短玻管，一孔插温度计。进水管与出水管的上端都高出塞面3cm左右，进水管下端接近瓶底，出水管下端接近塞底。用一根长约24cm的软橡皮管，一头紧套在排气管上，不使脱落；另一头则较松地套在进水管上，并在此处扎一根细绳（既要扎牢，又不能影响以后排水）。还要在瓶颈上扎一根较粗的绳子，以沉下或拉起水瓶。
采样时，将采水瓶沉没到规定水层，向上拉细绳，使橡皮管与进水管脱开，水即可迅速进入采水瓶（为使进水速度快些，玻管内径最好粗些，在10mm以上）。待3～5分钟后，将瓶提出水面，先看水温，再倒出水样。
（3）采样记录 采样结束后，即填写采样记录（项目见附表）。所有样品的标签和记录都必须用铅笔（钢笔或圆珠笔字迹遇水会化掉），并在标本瓶上缚牢编号标签（有一种胶布标签使用较方便）。标本瓶口要塞紧。
（4）各种藻类的采集：
1)衣藻 衣藻分布很广，绝大部分在淡水中。一般生活在有机质丰富的较不流动的水沟、水池或临时水洼中，在流动性的或清洁的水池里较少。南方农民用的粪池或粪缸中（一般在粪不多而上层有较多水的缸），经常有纯粹的衣藻，致使水呈绿（有时还有眼虫）。
一般衣藻最多的时期是在春末、秋初，气温在10～20℃，在上海、江、浙一带，一年四季几乎都可采到。形成胶鞘体的常在渐趋干竭的水池岸边。如欲得到较多且纯粹的材料，可用大的广口瓶盛入2/3有衣藻的池水带回。瓶的一面用黑纸遮起，另一面承光，放在窗台上。这样，由于衣藻具有趋光性，大量聚集于光亮面，然后用吸管吸取备用。要得到结合生殖时期的衣藻，当气候骤然变化时就可能采到。如在上海，当冬季寒潮到来的次日采集时，就会发现结合状态的衣藻。
2)水绵 在池塘中，缓慢流动的河水中，有时在岸滩边，可发现水绵，特别是春、秋两季更多。生长初期它们是亮绿，在衰亡和生殖时发黄。水绵用手触之有滑润的感觉（其他有些丝状藻也会有滑润感）。
采集标本时，应该在一个水域中选择若干不同地点，对不同颜的都要采集，且不可看材料已变黄绿不洁，成一种破棉絮状漂浮物时就弃之不采，因为这样就常把生殖状态标本遗漏。采集少量标本时，可用小玻璃管（指管）装回；如需要材料较多，则可用广口瓶装回，但放入材料不宜过多，最多占容器的1/3，水也不宜过满，以求空气充足。材料如当场不固定则需敞口带回。
在采集时，如要知道材料是否已经是接合时期，除了观察颜是一种鉴别方法外，也可把盛有材料的容器正向着太阳光，用放大镜在管外看一下。如果丝状体上有褐斑点则是形成了接合孢子，这样的材料一定要带回。要得到接合时期的水绵，应在一个固定地点作定期的经常采集观察。水绵的接合有明显的周期性，且每种的接合生殖时期不同，大多在春季接合，但在夏、秋季，甚至在冬季（上海、苏州一带）也可到。
3)硅藻影像处理 在自然界中分布很广，大量存在于水体中，在水底各种物体表面上都可以到它们，经常出现于潮湿岩石表面（呈黄棕），在土壤里也常能见到。附生硅藻可用解剖刀从附着表面刮下来，采集土表硅藻可带一层土。
4)蓝藻 大多存在于水体中，尤其当大量发生成“水花”时（一般在高温季节和水体富营养化
后易产生）很易捞取观察。另外，在水田、河滩、水沟边土面如呈一片蓝黑也是蓝藻，在雨后积水潭内也能发现，可连泥一起采集。由于蓝藻体表有粘胶层，常造成手触有粘滑感。与其他藻类不同，蓝藻能耐干旱，甚至在直射阳光下，干燥岩石上也可存在。
5)轮藻 广泛分布于含有硬水、粘泥和水流较慢的湖泊或水池里，通常形成茂密藻丛。在秋季可采到带有生殖器官的轮藻，这些器官用肉眼可以看见。采集时，还需注意轮藻是以假根固定在水底土壤中。
6)大型海藻 包括褐藻、红藻和绿藻。
①采集地点的选定：对海藻生活习性的观察和标本的采集，一般是在潮间带进行的。潮间带的采集简单，不需特殊设备。潮间带有岩礁、石缝、水峡、砂砾和其他各种各样的环境，所以在这里可到这个地区的绝大部分种类。
潮间带处于海洋与陆地相联接的地带，是指大潮期间潮水涨得最高的水面和退至最低线之间的地区。一般绿藻主要生长在潮间带，褐藻、红藻多数生长在潮间带和潮下带。
②采集时间：海藻一年四季均有生长，但因季节不同，各种藻类的生长和分布亦各有不同。
一般说，南方在每年三、四月，而北方在五、六、七月为采集海藻最适宜时期（四、五月是海藻生长最盛、种类最多的时候，六、七月则能采到有繁殖器官的藻体）。在这个期间，潮水涨落差度也大，便于观察和采集。
海水每日两次涨潮和退潮（有的地区例外），标本采集工作，最好在退潮时，跟随潮水退落时进行。农历每月初一至初三及十五到十八是大潮期间，潮水退得最低，这时在岩岸及岩池中进行采集标本工作，能采到生活于潮间带的各种海藻。
③采集工具：
采集桶和箱——冷却水循环采集桶最好用帆布做成，直径21厘米，高27厘米，外边围一只和桶等高的围兜，兜上再做二或三行大小不同的小兜，准备装个体大小不同的海藻。也可用塑料桶代替。普通用于高等植物采集标本的采集箱也可使用，但采集箱最好分为大小两格，以便把重要及稀少的标本与一般及大型的标本隔离开来。
凿子和铁锤——这类工具不宜太大，用于凿取牢固附着在岩石上的种类。
采集耙及捞网——适用于低潮线下或海浪冲击的地方，趁海水下退时，迅速地把海藻耙上
来。耙柄由2～4节，一般长1～1.5米中空的铝质管子所组成，节处有按扣，可连接或拆开，以便携带。耙柄也可用钓鱼竿代用，把采耙拆下，换装上小网，即可组成简便的捞网，用以捞取漂浮的海藻。
其他工具可参考淡水藻采集。
2．标本的固定
最常用的固定剂是福尔马林（即40％甲醛溶液）或路哥氏碘液。如果标本只作一般形态、分类观察用，在用浮游生物网采到的水样中，加入福尔马林，使其含有4％浓度即可，同时可作长期保存。若是直接取水样沉淀浓缩，则用路哥氏碘液再加福尔马林最为适宜。在1L水样中加路哥氏碘液15mL，沉淀浓缩后，再加福尔马林使含有3％浓度即可。此外如FAA（常称为标准固定液）和铬酸醋酸固定液等也是常用的固定剂，对进一步进行藻体结构观察有良好效果。
几种常用固定液配方：
（1）路哥氏碘液：碘化钾6g溶于20mL水中）加碘4g，待溶解后再加入水80mL。
（2）FAA标准固定液：福尔马林5mL、醋酸5mL、50％或70％乙醇90mL。
（3）铬酸-醋酸固定液（在藻类上使用的为弱铬酸-醋酸液）；10％铬酸水溶液2.5mL、10％冰醋酸水溶液5mL，蒸馏水92.5mL。
3．标本制作
（1）玻片标本：对微小藻类，除不需作切片外，其他操作与高等植物相似。其基本步骤：一是杀生、固定，二是冲洗及脱水，三是染，四是透明及封藏。以下介绍几种方法：
1）甘油封片制作法可分不染与染两种：
识字闪卡不染方法——①标本用4％福尔马林固定，时间约12～24小时。②洗肾机载玻片上滴一小滴10％甘油液，吸取沉淀于福尔马林液中标本，滴在甘油液中，用针轻轻搅动，使标本均匀散布。③将载玻片放在干燥器或其他容器内，注意防尘，使甘油中水分逐渐蒸发，时间随干燥情况而定。待甘油浓缩至原来一半时，即可加一滴20％甘油，再静置使水蒸发，然后再加40％甘油。待甘油浓缩至原来容量一半时，即可加盖玻片，仍使继续蒸发。④2～3天后，甘油近于无水状态，此时即可进行密封。⑤密封：需用洪氏两液，其配方为阿拉伯树
胶20g、蒸馏水20mL、水合氯醛17g、甘油3mL、冰醋酸2mL。用毛笔沾上此液，涂在盖玻片四周边缘部分（约0.5～1mm），过含油尼龙衬板1～2天，用刀轻轻刮去盖玻片四周不平整处，再用瓷漆在四周加固密封。
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