20g 。在40～60周龄，可参考如下配方：玉米60.18%，豆粕21.5%，鱼粉2.5%，骨粉2.5%，麸皮5.6%，贝壳粉7.00%，食盐0.35%，饲料添加剂0.15%，氨基酸0.12%，胆碱0.1%，
每100kg 饲料中添加复合多维15g 。海兰褐壳蛋鸡的可利用时间是80周龄，80周龄后产蛋量下降，料蛋比不断增大，逐渐失去生产价值，可作为商品鸡淘汰。总体来说，
海兰褐蛋鸡的饲养管理比较省心，回报率高，
经济效益好。摘要
非原产地人工繁殖大鲵一直是个难题，本研究在模拟自然环境条件下， 进行大鲵人工繁殖。对亲本进行强化培育，促使雌雄亲体性腺发育同步成熟；依据性腺发育的综合特征判定，在最佳的繁殖时间段对大鲵进行催产和人工授精；根据大鲵受精卵发育特点，设计专用孵化装置，提高孵化率。在2012-2015年的4批次试验中，累计繁殖♀41尾，♂36尾，受精率分别为45.7%、62.3%、85.0%和86.2%，孵化率为分别为28.6%、56.7%、71.4%和72.6%，4年共计繁殖苗种9089尾，繁殖后的亲鲵体质健康， 成活率100%。关键词
大鲵；促性腺发育；
人工繁殖；孵化率人工繁殖大鲵的关键技术
王永杰
陈红莲
王银东
安徽省农业科学院水产研究所，
合肥230031收稿日期：2016-05-03
基金项目：安徽省大鲵人工繁殖与养殖工程技术（201106G01044）；安徽省农科院学科建设水产珍稀动物大鲵繁育与健康养殖技术研究（15A0504）食品可追溯系统
王永杰，男，1966年生，博士，研究员，研究方向：名优水产养殖与水产种质资源保护。
大鲵（）俗称“娃娃鱼”，属两栖类动物，为国家二级保护动物，被称作“活化石”。1975年7月1日，大鲵被列入国际濒危物种贸易公约（CITES ）附录I ，被IUCN 物种保护红名录列为极危物种[1-2]。近年来，由于生态环境破坏、水环境污
染、高强度的滥捕以及大鲵繁殖力低等原因，
导致野生大鲵数量越来越少，
原栖息地急剧萎缩，许多地域性大鲵种濒临灭绝。大鲵是农业产业化重点
开发品种之一，在科研、食用、药用和观赏等方面具有潜在的应用价值，为保护、增殖、利用大鲵资源，我国水产科研人员进行大鲵驯养繁殖的研究，取得了大鲵人工驯养、工厂化养殖、人工配合饲料等技术成果，大鲵人工繁殖获得了初步成功[3]。尽管1978年就开始对大鲵进行人工繁殖，
但直到目前为止大鲵规模化全人工繁殖还是个难题，
尤其是非大鲵原产地繁殖大鲵的难度更大[4]，严重制约大鲵养殖业的发展。大鲵人工繁殖常见的难题主要有：雌、雄性腺发育不同步，精子无活力，
雌性亲体产下大量没有授精能力的卵，或受精卵胚胎发育后期（指尾芽期、鳃板期）容易出现大量死亡[5]。分析其原因，主要因为人工繁殖大鲵一般生存在封闭、狭小水体中，失去在野生环境下自主活动的特定条件，抑制性腺发育。其中水温、水流量、光照和食物是影响性腺发育和孵化的最主要因素。本研究是在模拟大鲵自然繁殖环境的参数，采用促进大鲵性腺发育成熟和雌雄发育同步化等技术措施，经过4年来的努力，大鲵人工繁殖成功率显著提高，
现总结如下。1材料与方法
1）亲本培育池建设。亲本培育池是依据大鲵的
生理特性建造，建成封闭式的椭圆形小池，每个池面积4～6m 2，每个池内安装2个进水管和1个排水管，进水管向同一方向倾斜，形成流水。池底用小卵石间隔20cm 铺成，池内用大卵石筑成穴洞，穴洞面积约占亲本培育池的1/3左右。
2）亲本放养。选择体质健壮，
无外伤，体重在. All Rights Reserved.
图1
大鲵受精卵孵化装置
注：1.孵化水池与进排水系统；2.孵化塑料篮；3.轴杆；4.固定圈；5.隔
离塑料篮绳
6
3
1
2
4
5
5～8kg 大鲵作为繁殖亲本，雄性大鲵选择在7龄以上，雌性在8龄以上。雌雄单独饲养，催产前再进行配对和强化培育。
3）亲本的培育。
营养调控：亲本培育时的饵料尽可能满足多元化，平时以投喂高蛋白、低脂肪、低热量及富含微量元素饵料为主。在产后和产前1个月内，投喂高蛋白、高脂肪、高热量的食物。食物一般选择溪蟹、米虾、青蛙、泥鳅、鱼块等，投喂量多少以吃完不剩为宜。雄鲵繁殖前3个月要多喂溪蟹，
少喂高脂肪类饵料，雌鲵临产前一个月投喂一定数量的青蛙，可提高卵带质量。根据性腺发育特征，用控制投喂食物品种和数量的方法调节性腺发育的速率。
水流调节：池水深度0.3～0.4m ，穴洞水深0.2～0.3m ，水流速度0.3～0.5m/min 左右。雄大鲵从春季开始逐步加大水量以促进性腺发育成熟，繁殖季节需要人工营造流水声和加大水流的刺激。
光照调节：根据月相变化规律从春季开始给大鲵补充一定强度的自然光照。穴洞里面光照在50～
200lx ，池中在1500～2500lx 。
温度调节：繁殖期间水温控制为16～22℃。从
春季开始对雄大鲵池适当增加一定流量的井水，提高雄大鲵池水温1～2℃，加快雄大鲵性腺发育进度，解决雄大鲵性成熟比雌大鲵推迟的难题，使雌雄大鲵性腺同步成熟进入繁殖期。也可适当降低雌大鲵池水温，延缓雌大鲵性腺发育进程，以达到雌雄大鲵性腺发育同步成熟。
4）性腺发育成熟度判断方法。从6月份开始就要密切注意雌雄大鲵性腺发育和活动情况，每周全面检查1次，根据性腺发育状况及时调节大鲵的食物、水温、水深、水流量、光照强度等因素，以促使雌雄大鲵同步达到性成熟。雌性亲体成熟标志为腹部膨大而柔软，用手轻摸腹部有饱满松软且富有弹性之感，
将亲本托起观察腹部有蠕动，可选作催产。雄性亲本成熟标志为泄殖孔内周边有一隆起圈上小白点比较突起，内周边红肿明显，
可选作催产。5）人工催产。
催产剂：选用促黄体素释放激素类似物（LHRH-A2）和绒毛膜促性腺激素（HCG ）混合使用。催产剂量：根据性腺发育程度作相应调整，剂量一般为（LRH-A2）2～10ug/kg+（HCG ）100～500IU/kg 。
催产方法：亲本催产方法分两次注射和一次注射。成熟度稍差分两次注射，
两次注射必须注意控制第一针剂量，一般为整个剂量的1/10，成熟度好的采用一次注射，注射部位为大鲵后背部肋间。止推垫圈
人工授精：采用干湿法人工授精，待雌性大鲵产出卵胶膜后，随即从池中将雌性大鲵捉起，轻轻放入布担架内，用湿黑布蒙住其头部，然后一人用手将尾部向上稍稍托起，另一个人手端干净瓷盆，用经过消毒的手托住卵带一端，
然后向下轻轻让卵带缓缓地流入盆中，卵带长度控制在20～30个卵粒为宜。然后立即将准备好的大鲵精液加到卵带上，两手轻轻晃动盆子，使精卵充分混合。待5～10min 后，加入少量纯净水，经过约0.5h ，换2次盆中的水，即可进入孵化阶段。
微电解水杯6）孵化设施与孵化条件。孵化装置包括：①孵化水池与进排水系统；②孵化塑料篮；③轴杆；④固
定圈；⑤隔离塑料篮绳（图1）。所述的轴杆位于固定圈的圆心处，连接丝的一端与轴杆转动连接，另一端与固定圈固定连接，孵化篮设于固定圈与连接丝围成的空隙中，其篮口设有支撑浮漂。该孵化装置通过池水的流动带动孵化篮以轴杆为圆心转动，为受精卵的孵化提供微流水环境，提高了大鲵受精卵的孵化率。水暖炉
水温：孵化水温19～21℃，水温变化幅度严格控制在±1℃。
溶氧：受精卵在孵化期间，水中溶氧量不得低于5mg/L 。
光照：光照控制为50～100lx 。
水源：用地下井水和水库水混合，各占50%左右。
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表1
2012-2015年人工催产及孵化结果
年份数量/尾平均体重/kg
碳油
产卵量/个受精卵/个受精率/%孵化水温/℃出苗数/尾
孵化率/%♀♂2012129 4.12257103145.719～2064528.62013109 5.23256202962.319～21184656.7201487 5.94185355785.019～20.5298771.42015
11
9
7.1
4972
4286
86.2
19～20
3611
72.6
孵化过程中每隔1～6h 需用羽毛轻轻翻动卵子1次，当胚胎能自行运动旋转后就不需人工翻卵了。对于未受精的和发育不良、坏死的胚胎要及时剔除，以防感染正常胚胎。
7）幼鲵培育。刚孵化出的稚鲵由于发育尚不够完善，还不能开口摄食，主要通过腹部卵黄囊获得内源营养[6-7]。历经25～31d ，卵黄囊日渐变小直至消耗殆尽，逐渐发育为开始主动摄食的幼鲵。开口饵料可投喂红虫、摇蚊幼虫、蝇蛆等，要注意保持水质清新、水温稳定及病害防治等。随着个体生长发育，经过1～2年时间，幼鲵的肺逐渐完成发育，鳃开始逐渐退化，心脏发育逐步完善，
四肢形成完整。当肺成为大鲵的主要呼吸器官，最终变态发育为成鲵，便可按照常规的饲养方法进行养殖。
2结果
1）孵化装置。大鲵受精卵的孵化装置根据大鲵受精卵孵化的不同阶段需要，精准控制孵化温度和水流大小，为受精卵的孵化提供了一个微水流环
境，显著提高大鲵受精卵的孵化率，
同时辅以充氧装置和温控装置，为受精卵创造最佳的孵化条件，提高大鲵孵化率。
2）人工孵化。恒定孵化温度在19℃左右，每个塑料篮放200枚左右，孵化时间为38d 开始出膜。所繁殖的苗种体自然，
体形正常，体质健壮。3）繁殖结果。2012-2015年的4次试验中，共繁殖♀41尾，♂36尾，大鲵亲体从催产到产卵效应时间为3～6d 。受精率分别为45.7%、62.3%、85.0%和86.2%，孵化率为分别为28.6%、56.7%、71.4%和72.6%，4年共计繁殖苗种9089尾。繁殖后的亲鲵体质健康，成活率100%（表1）。
3讨论
1）大鲵性腺发育同步化与产卵最佳时机。据报道20世纪70年代末至90年代初，湖南省的阳微电解填料
爱生等[4]就进行了大鲵人工繁殖技术的研究。当前大鲵人工繁殖采用注射脑垂体、LRH-A 、HCG 和高效催产合剂，均能使大鲵产卵，
授精后即可孵化出幼苗，但很少突破大鲵苗种批量繁殖[5-6，8]
。目前我
国大鲵非原产地的人工繁殖技术总体水平是：①繁殖率偏低，即亲本与苗的比为1∶20左右，一般在1
∶5～10，有的甚至为1∶5以下；②受精率低，一般仅为20%；③随之而来的孵化率也很低。为了获得一定数量的苗种，不少单位依靠经济实力到处搜集野生资源，有的养殖场蓄积亲本达5000～6000尾，人工繁殖采用以多取胜的战术，结果是严重耗损可贵的野生大鲵资源来换取苗种。有的单位1年人工繁殖下来，大鲵亲本死亡竟达200～300尾[9-10]。如此大的代价对野生大鲵资源保护而言，就是一种技术犯罪行为，应该引起从事大鲵人工繁殖的科技工作者关注与思考。综上所述，目前大鲵人工繁殖的技术水平不高，还有很大的发展与提升空间，大鲵的人工繁殖仍存在严重的技术瓶颈。
无论是雄鲵或雌鲵，只有其性腺在适当成熟时
期注入催产素才能顺利完成“生理成熟”、完成精卵
结合受精大业[7，10]
。也就是说人工催产早了不行，
晚了也不行，而由于大鲵是野生动物，在人工环境下，是一个从不适应到适应的过程，且通过生产实践证
明，野生大鲵的生长与发育，最显著的特点是个体差异比较大，这就带来大鲵性腺发育成熟的时间不同步，存在早晚的差别。不少繁殖单位对大鲵性腺发育成熟时机把握不准，
基本处于“模糊”概念，处于乱点鸳鸯谱的盲目状态，
一般采取以多取胜的方法，采取分批进行催产，产出的卵大部分质量不高，受精率低下。大鲵的产卵时机从性腺发育的组织学而言，大鲵性腺发育要达成熟的Ⅳ期末。从细胞学的特征而言，卵细胞的细胞核要极化偏位，
精细胞发育变态完成，这和两栖类、鱼类基本相同[6，11-12]
。但这些毕
竟是体内的标准，采用常规肉眼观察是无法获取
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图2大鲵受精卵孵
化
的，给性腺发育成熟度判断带来一定的难度。结合本地实际，对亲鲵编号驯养情况与每年人工繁殖的情况，做详细记录，逐号跟踪进行相关分析，总结分析大鲵人工繁殖结果与亲鲵个体大小、
摄食、生长及催产时间的关系。依据亲鲵腹褶的形态、泄殖孔内凹程度、腹部松软程度以及活动姿态等，采用经验鉴别与形态检查相结合的方法综合判断。在繁殖季节，雌鲵泄殖孔充血，腹部膨大而柔软、富有弹性。雄鲵泄殖孔边缘有一排外突的小白点，外围有一椭圆形隆起。实际操作过程中详细记录每个繁殖周期，其中最佳有效催产期的常年水温的积温是个重要参数，出一个繁殖周期水温积温的参数值来确立大鲵催产的有利时机。依据4年来大鲵繁殖的经验，安徽中部地区人工繁殖大鲵最佳时间段应该在每年的8月中下旬。
2）大鲵孵化方法。大鲵受精卵的孵化对水质、水流、水温和溶氧要求极高。在自然状态下雄鱼有背卵孵化的特性，说明卵在孵化过程中必须经常翻动[12]。人工授精完成后，将受精卵徐徐倒入塑料滤篮，每个卵带控制在20粒左右，若受精卵带较长则必须将卵带剪断。刚开始6h 内不要触动，6h 后将受精卵子小心移入深10cm 、直径20cm 的塑料滤篮内，用泡沫浮于水面上，卵子逐渐吸水膨胀。每个篮可容200枚左右的受精卵（图2），过多的受精卵会影响出苗率。可利用水压跌水增氧，始终保持微
弱的流水状态，满足受精卵发育溶氧要求。操作过程中要严格消毒，防止卵带感染水霉而影响正在发
育中的受精卵或胚胎。若相连的2个受精卵或胚胎中有1个是坏的，必须及时将其剪掉，防止感染好的受精卵或胚胎。在神经胚期胚胎发育对震动敏感，不要搬动，此时暂时停止摘除坏卵的工作。在鳃板早期胚胎易贴壳死亡，经常轻微摇动一下胚胎，使胚胎卵黄膜与内胶膜不粘贴太紧，以防卵黄膜破裂，影响出苗率。
参
考
文
献
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