蛋白纯化通用问题
1、层析柱的寿命多久，可以用多长时间？
答：填料的使用次数依据不同的目的和条件而有差异。在使用过程中注意操作规范，定期清洁维护，可以使柱子保持最佳状态。 2、柱子堵了，超压如何处理？
答：可能原因 ：缓冲液或样品未进行过滤、蛋白沉淀或杂质残留、清洗不及时等引起层析柱滤膜堵塞 ；流速过快、流动相粘度 ( 如乙醇等 ) 过高、温度过低。 建议处理方法 ：首先将柱子卸下来，确定是系统还是柱子堵了。如果是柱子堵了 ：参考说明书 CIP 操作进行清洁 ；更换层析柱顶端滤膜或超声清洗 。测定柱效或重复之前做过的样品。后续，注意样品前处理 ( 如核酸的去除、样品缓冲液条件 ) 以及层析柱的日常维护。 3、如何去除样品中的 DNA/RNA 等核酸杂质污染？
边缘融合处理器答：·延长超声时间以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同时消化 DNA 和 RNA。
如果来源是大肠杆菌裂解液，含有大量的DNA，可以用链霉素沉淀等方法，预先去除大量的 DNA。
·通过层析方法去除 ：由于核酸带负电，在阴离子柱上会结合或阳离子柱上流穿，也可以有效去除核酸。
·去除填料上结合的核酸 ： 一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 对核酸的去除效果较好（需要确认填料是否可耐受NaOH）。如果核酸的吸附过强，会采用强烈的方法，3M 氯化钠去除靠静电吸附的核酸，然后用 1M 的氢氧化钠分解核酸，之后再用 3M NaCl 清洗。
过店客流统计分析·可用Heparin预装柱或者填料：如果样品是核酸结合蛋白，Heparin可结合核酸结合蛋白，从而使核酸流穿。 货号：17040601，17099801
4、柱子进气泡或跑干了，怎么办？
答：可能的原因 ：环境温度变化 ；缓冲液未经过脱气 ；层析柱连接系统或操作不当。
建议处理方法 ：用大量脱气去离子水或 20% 乙醇反向高速冲洗层析柱，直到小气泡被带出 ( 冲洗过程建议在系统连接反压阀之后进行） 。如果大量进气，建议重新装柱。
5、不同样品检测的吸光度值？
铣床飞刀答：蛋白样品最大吸收值一般在 280 nm，核酸或病毒在 254 nm或 260 nm ；多肽 215 nm ；多糖 206 nm。
6、柱子有素如何去除？
答：素性质很复杂，可以根据填料的耐受情况，优先尝试NaOH 清洗，另外，也可以使用有机溶剂（如 30% 异丙醇或乙醇），最后再尝试酸，如 0.01 M HCl（需要确认填料耐受性）。 如果去除不掉，可以定期把素污染部分的填料去除。
7、填料如何储存？石瓜子莲
答：请参考说明书。大部分填料可以在 4-40℃ 储存，不可以冷冻，注意北方的冬天有时候室温低于零度，运输和储存应避免冻住。储存过程中，注意避免填料干掉，或低温产生气泡。
储存液 ：对于耐碱的层析介质，可以使用 0.01M NaOH 作为储存液 ；对于不耐碱比如亲和介质，一般是用 20% 的乙醇或 2% 苯甲醇作为储存试剂。
8、样品与缓冲液怎么脱气和过滤？
答:溶液和样品必须过滤（0.2um或者0.45um的滤膜过滤）和脱气，可以使用负压抽滤瓶过滤，并且在负压条件下保持10min脱气。脱气的方法还包括：超声15min以上或者使用注射用水配制缓冲液。对于小体积样品的过滤，可以使用高速离心的方式，吸取上清。
9、AKTA系统的清洗和保存？农产品干燥机
答:按时清洗系统或遇到问题时清洗系统。用1M NaOH ，小流速清洗系统30min，之后立即用0.5M NaCl和去离子水将NaOH冲洗干净并且系统pH保持在中性。系统长时间不使用，需保存在20%乙醇中。
10、如何进行柱前压校准？
答:取决于柱位阀，断开所有流路，在system control-system-calibration-归零。
11、AKTA pure与prime plus的最大耐受压力？
答:pure 25是20Mpa，pure 150是5Mpa；prime plus 是1Mpa；紫外电导2MPa，PH电极耐
压0.5MPa。
12、如何设置报警压力？
切口铣刀答：
系统配有多柱位阀：
可以检测柱子的柱前Pre C压力，柱后Post C压力，并且计算出Delta C压力。
分别设置Pre Column Pressure和Delta Column Pressure的压力报警保护柱子。
系统无多柱位阀：
先用管道代替柱子连接设备，在工作流速下测定系统本身的压力，此为空载压力。
Pre Column Pressure为Max Pre-Column Pressure和Max Delta Column Pressure+空载压力中较低值。
13、在正确设置了报警压后，层析柱接入AKTA，总是超压报警？
答：首先判断AKTA系统是否本身压力过高，在线滤膜或者反压阀堵塞，正常情况下反压阀空跑系统压力为0.2左右。如果系统没有问题，接入柱子出现超压，可能是柱子堵塞或者连接柱子的管线折弯造成超压，调整连接管线或者按说明书方式清洗层析柱。
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