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试剂配制：（一）母液 （二）使用液
操作步骤：（一） 蛋白样品制备 （二） 蛋白含量的测定 （三） SDS－PAGE电泳 （四）转膜 （五）免疫反应 （六）化学发光，显影，定影 （七） 凝胶图象分析
关键词：印迹试剂 Western 印迹法 免疫反应 蛋白样品制备 SDS－PAGE电泳
这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸
序列的特异性试剂作为探针检测之。 Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。 耗材： 硝酸纤维素膜，乳胶手套，保鲜膜，搪瓷盘（>20×20cm），X-光片夹，X-光片，玻棒长短各一根，计时器，吸水纸，
试剂配制：
（一）母液
1.0mol/L Tris•HCl
Tris非pvc软袋 (MW121.14) 30.29g
蒸馏水 200ml
溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏
水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl
7.4 约17ml
7.5 约16m
7.6 约15ml
汽轮机转子
8.0 约10ml
10％SDS
SDS 10g
蒸馏水至 100ml
50℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。
10％过硫酸胺（AP）
过硫酸胺 0.1g
超纯水 1.0ml
溶解后，4℃保存，保存时间为1周。
1.5mol/L Tris•HCl（pH8.8）
Tris (MW121.14) 45.43g
超纯水 200ml
溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。
0.5mol/L Tris•HCl（pH6.8）
Tris (MW121.14) 15.14g
超纯水 200ml
溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。
彩陶泥
20％Tween20
Tween20 20ml
蒸馏水至 100ml
混匀后4℃保存。
（二）使用液
单去污剂裂解液
（50mmol/L Tris•HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％TritonX－100，100?g/ml PMSF）：
1mol/L Tris•HCl（pH8.0） 2.5ml
NaCl 0.438g
TritonX－100 0.5ml
蒸馏水至 50ml
混匀后， 4℃保存。使用时，加入PMSF至终浓度为100?g/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。
0.01mol/L PBS（ pH 7.2-7.4）
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.44g (Na2HPO4 .H2O 1.56g \ Na2HPO4 .12H2O 3.58g)
KH2PO4 0.2g
蒸馏水至 1000ml
G250考马斯亮蓝溶液（测蛋白含量专用）
考马斯亮蓝G250： 100mg
95％乙醇： 50ml
磷酸： 100ml
蒸馏水至 1000ml
配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存。
0.15 mol/L NaCl
NaCl（MW58.44） 0.877g
蒸馏水至 100 ml
高温灭菌后，室温保存。
100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）
BSA 0.1g
0.15 mol/L NaCl 1ml
溶解后，－20℃保存。制作蛋白标准曲线时，用亚太牌自动粉墙机0.15 mol/LNaCl进行100倍稀释成1mg/ml，－20℃保存。
10％分离胶和5％浓缩校
10％分离胶（两块胶，10ml） 5％浓缩胶（两块胶，5ml）
10%AP（过硫酸胺）
TEMED
加 TEMED后，立即混匀即可灌胶。
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