二、选择题
【A型题】
1．B 2．C． 3．E 4．D 5．C． 6．B 7．C． 8．E 9．A 10．D
11．D 12．E 13．C． 14．C． 15．C 16．B 17．B 18．C． 19．C． 20．D
21．E 22．A 23．D 24．D 25．D 26．A 27．A 28．E
【X型题】
1．BC． 2．BCE 3．ABC． 4．ABCD 5．ABCD
6．ABCD 7．ABCD 8．ACD 9．ABCD 10．BCDE
11．BDE 12．ABDE 13．ABE 14．ACDE 15．BCDE
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三、问答题
答：双脱氧链末端终止法测序原理是利用DNA的体外合成过程。反应体系中的核苷酸单体除了4种dNTP外，还有ddNTP。反应过程中ddNTP虽然可以与正在延伸的DNA链的末端形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中，但它们本身没有-OH，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止。据此原理分别设计四个反应，每一反应中存在相同的DNA模板、引物、四种dNTP和一种ddNTP(如ddATP)，则新合成的DNA链在可能掺入正常dNTP的位置都有可能掺入ddNTP而导致新合成链在不同的位置终止。由于存在ddNTP与dNTP的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。通过PAGE对长度不等的新生链进行分离后，就可根据片段大小直接读出新生DNA链的序列。 答：荧光标记引物法是指将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的端。当相同碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4种）标记引物。这四种引物的序列相同，但端标记的荧光染料颜不同。在测序反应中，模板、反应底物、DNA聚合酶及标记引物等按A、T、C、G编号被置于4支微量离心管中，A、T、C、G四个测序反应分管进行，上样时合并在一个泳道内电泳。特定颜荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。
3. 简述多荧光标记终止底物法的原理。
答：荧光标记终止底物法是指将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。反应中将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP在掺入DNA片段导致链延伸终止的同时，也使该片段端标上了一种特定的荧光染料。经电泳后将各个荧光谱带分开，根据荧光颜的不同来判断所代表的不同碱基信息。
4编织管. 荧光标记引物法和荧光标记终止底物法有哪些不同之处？
答：荧光标记引物法是将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的浮油回收机端。荧光标记终止底物法是将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。两种掺入方式的区别在于，前者的荧光染料标记过程和延伸反应终止分别发生在同一DNA片段的两端，且标记发生在引物与模板的退火过程中，而终止是发生在片段延伸过程中，两者在时间上有一定间隔。而后者使标记和终止过程合二为一，两者在同一时间完成。在具体操作中，前者要求A、C、G、T四个反应分别进行，而后者的四种反应可以在同一管中完成。
5. 多荧光标记DNA的检测原理是什么？
答：在采用多荧光标记DNA的自动测序系统中，两极间极高的电势差推动各个荧光DNA片段在凝胶高分子聚合物中从负极向正级泳动并达到相互分离，且依次通过检测窗口。激光器发出的光束激发荧光DNA片段，荧光发基团发射出特征波长的荧光。这种代表不同碱基信息的不同颜荧光经过光栅分光后再投射到CCD摄像机上同步成像。收集的荧光信号再传输给计算机加以处理。整个电泳过程结束时在检测区某一点上采集的所有荧光信号就转化为一个以时间为横轴坐标，荧光波长种类和强度为纵轴的信号数据的集合。
6. 多荧光标记DNA的检测有哪些优点？
答：由于采用多荧光标记技术，一个样本的四个测序反应产物可以同时在一个泳道内电泳，避免单一标记时四个泳道测序因泳道间迁移率不同对精确度的影响，提高了测序精度。另外，一个样品所有反应产物只需进样一次，所以一次实验便可以处理较之手工方法更多的样品。在相同样品数的情况下，加样的工作量也大大减少。
7. 与同位素标记相比，荧光标记在DNA测序中有哪些优点？
答：电泳后对不同长度DNA新生链进行分析时，需要有可以检测的示踪信号。早期采用同位素法标记新生链，因其具有放射性危害、背景高等缺点而很快被荧光染料标记法所取代。荧光染料的荧光和散射背景较弱，提高了信噪比；它们的激发光谱较接近而发射光谱均位于可见光范围，且不同染料的发射光谱相互分开，易于监测，故在DNA自动测序中得到广泛应用。
8. 简要介绍介绍全自动测序仪的基本结构。
答：全自动DNA测序仪主要由主机、微型计算机和各种应用软件等组成。主机主要包括电泳系统、激光器和荧光检测系统等。大致可分为以下几个结构功能区：
(1)自动进样器区：装载有样品盘、电极（负极）、电极缓冲液瓶、洗涤液（蒸馏水）瓶和废液管。
(2)凝胶块区：括注射器驱动杆、样品盘按钮、注射器固定平台、电极（正极）、缓冲液阀、玻璃注射器、毛细管固定螺母和废液阀等部件。 (3)检测区 检测区内有激光检测器窗口及窗盖、加热板、毛细管、热敏胶带。
9. 简要说明DNA自动测序仪检测区基本结构及功能。
答：DNA自动测序仪检测区基本结构包括：
①激光检测器窗口及窗盖：激光检测器窗口正对毛细管检测窗口，从仪器内部的氩离子激光器发出的激光可通过激光检测器窗口照到毛细管检测窗口上。电泳过程中，当荧光标记DNA链上的荧光基团通过毛细管窗口时，受到激光的激发而产生特征性的荧光光谱，荧光经分光光栅分光后投射到CCD摄像机上同步成像。窗盖起固定毛细管的作用，同时可防止激光外泄；
②加热板：电泳过程中起加热毛细管的作用，一般维持在50℃；
③毛细管：为填充有凝胶高分子聚合物的玻璃管，直径为50m，电泳时样品在毛细管内从负极向正极泳动；
④热敏胶带：将毛细管固定在加热板上。
10. 毛细管电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，常见的原因是什么？
载人旅行箱答：最常见的原因是由于电泳缓冲液蒸发使液面降低，而未能接触到毛细管的两端（或一端）。其它可能原因包括电极弯曲而无法浸入缓冲液中、毛细管未浸入缓冲液中、毛细管内有气泡等。因此，遇到此类问题时，应首先检查电极缓冲液，然后再检查电极和毛细管。
11. 导致毛细管电泳型DNA测序仪电极弯曲的常见原因是什么？
答：主要原因是安装、调整或清洗电极后未进行电极定标操作就直接执行电泳命令，电极不能准确插入各管中而被样品盘打弯。其它如运行前未将样品盘归位、或虽然执行了归位操作，但X/Y轴归位尚未结束就运行Z轴归位等情况下，也容易将电极打弯。
12. 毛细管电泳型DNA测序仪电泳时产生电弧，常见的原因是什么？
答：主要原因是电极、加热板或自动进样器上有灰尘沉积，此时应立即停机，并清洗电极、加热板或自动进样器。
13. 简述平板电泳型DNA测序仪的常见故障及维护。
答：(1)电泳时仪器显示无电流 可能原因包括：①电泳缓冲液配制不正确；②电极导线未接好或损坏；③正极或负极铂金丝断裂；④正极或负极的胶面未浸入缓冲液中。桉树专用肥
(2)传热板粘住胶板 主要原因为上方的缓冲液室漏液。此时应将上方的缓冲液倒掉，并卸下缓冲液室，松开胶板固定夹，将传热板顺着胶板向上滑动，直至与胶板分开。清洗传热板，同时检查缓冲液室漏液的原因，并采取相应措施，防止漏液。
(3)其它 ①倒胶前应按照操作要求认真清洗玻璃板，用未清洗干净的胶板倒胶时易产生气泡、或者产生较高的荧光背景；②配制凝胶时应注意胶的浓度、TEMED含量、尿素浓度等，并注意防止其它物质（尤其是荧光物质）的污染；③倒胶时需注意不能有气泡，用固定夹固定胶板时，四周的力度应均匀一致；④将待测样品加入各孔前，应使用缓冲液冲洗各孔，把尿素冲去，以免影响电泳效果。
14. 全自动DNA测序仪主要应用于哪些方面？
全自动DNA测序仪主要应用在人类基因组测序；人类遗传病、传染病和癌症的基因诊断；法医的亲子鉴定和个体识别；生物工程药物的筛选；动植物杂交育种等方面。
15. 简述蛋白质测序仪的结构及其功能。
答：蛋白质测序仪包括测序反应系统、分析系统和数椐处理系统。
(1)测序反应系统具有4个微管。其主要部件为反应器。因为反应条件要求一定的温度、时间、液体流量等，所以系统计算机具备调节控制这些因素。蛋白质或多肽在这里被水解为单个氨基酸残基。
(2)氨基酸分析系统是由高效液相谱毛细管层析柱组成。层析要求相当严格，液体分配速度、温度、电流电压都能影响层析结果。所以仪器配有稳压、稳流、自动分配流速装置。氨基酸通过这一系统会留下自己的特征吸收峰。
(3)测序软件是根据氨基酸的层析峰来判断为何种氨基酸。计算机系统提供测序需要的运行参数。时间，温度，电压和其他的循环状况，并可实现跳跃步骤，暂停步骤。
此外还有蛋白质或多肽的纯化处理配件及整个测序必备的试剂和溶液。
rtyrty16. 简述蛋白质测序仪的主要应用。
答：蛋白质测序仪获得的蛋白质序列信息主要应用在以下三个方面。
(1)新蛋白质的鉴定：在凝胶电泳中出现的未知条带可以利用蛋白质测序仪来测定其序列，为探索蛋白质的功能提供线索。
(2)分子克隆探针的设计:是蛋白质序列信息的基本用途之一。用蛋白质序列信息设计PCR引物和寡核苷酸探针。可以利用这些探针进行cDNA文库或基因组文库的筛选。
(3)抗原的人工多肽合成：由合成多肽免疫产生的抗体常用来证实和纯化新发现的蛋白质。此外，合成的多肽类似物能够揭示蛋白质重要结构特征和提示蛋白质的功能特性。
17．简述缩微生物处理器的检测原理及其特点。
答：缩微生物处理器基本结构为3层玻璃薄片和一层聚二甲基硅氧烷薄片，各层间紧密粘合形成圆盘状，直径仅10厘米。在这些薄片之间有各种反应小室、毛细管电泳通道和微瓣膜。
检测时仅需将极微量的DNA模板、反应试剂和引物加入相应孔中，系统自动完成热循环反应、扩增产物的纯化、DNA片段的分离及检测。缩微生物处理器可代替价格昂贵的DNA测序仪进行DNA的自动测序，并具有热循环反应、DNA片段的纯化和浓缩等功能，而且仅需极微量的标本和试剂，最大限度地节约了成本和人力，其出现是DNA测序史上的又一重大进步。
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