限制性内切酶HindIII说明书

Hin d III
A A G C T T
T T C G A    A
Takara Code:D1060A
包装量:3,000 Units泪血症
附带试剂:10×M Buffer 500 μl
10×Loading Buffer 500 μl
纯度:
1)Overdigestion Test:≥15 Units
2)Ligation-Recutting Test:
Ligation Effi.:100%,Recutting Effi.:100%
3)pKF3 Cloning Test:<2%
●酶贮存液:
10 mM Tris-HCl, pH7.5
400 mM KCl
0.1 mM EDTA
1 mM DTT
0.01 % BSA
50 % Glycerol
服装人台●起源:Escherichia coli carrying the plasmid encoding Hin dⅢ
gene.
●一般反应体系:
Hin dⅢ  1 μl
10×M Buffer    2 μl
DNA                        ≤1 μg
灭菌水up to 20 μl
●反应温度:37℃
●反应时间:
在上述20 μl的反应体系中,37℃反应5分钟可以完全切断λDNA,满足各种实验需求。针对特殊酶切底物DNA,如果得不到良好的酶切效果时,可以将反应时间延长至1小时。
●活性确认:
在50 μl反应液中,37℃温度下反应1小时,将1 μg的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。
●纯度检测:
1)Overdigestion Test:在1 μg DNA中加入过量的该限制酶,进行长时间(24小时)酶切反应,然后进行琼脂糖电泳,确认切出的DNA片段的电泳谱带不发生变化。
2)Ligation-Recutting Test:在经过10倍量该酶切出的DNA片段中,加入T4 DNA Ligase,使其连接,然后再使用该酶进行切断反应,判断Ligation-Recutting效率。
3)pKF3 Enforcement Cloning Test:使用10倍量的该酶,将Enforcement Cloning Vector pKF3 DNA切开,然后再进行连接后,转化至TH2感受态细胞中,判断该酶切位点受到影响的重组体所占的比率。●在各种Universal Buffer中的相对活性:
L M H K T(+BSA)相对活性(%) (60) 100 <20 200 (100)
●各种DNA的切断数:
●Star活性:
Mn2+存在条件下,识别序列会发生变化。
●Basal Buffer组成:
锁接头10 mM Tris-HCl, pH7.5
7 mM MgCl2
押花材料
60 mM NaCl
●Universal Buffer组成(-20℃保存):
1.10 × L 100 mM Tris-HCl,pH7.5    4.10 × K 200 mM Tris-HCl,pH8.5
塑料提手100 mM MgCl2100 mM MgCl2
10 mM Dithiothreitol 10 mM Dithiothreitol 2.10 × M 100 mM Tris-HCl,pH7.5 1,000 mM KCl
盆角齿100 mM MgCl2  5.10 × T 330 mM Tris-Ac,pH7.9
10 mM Dithiothreitol (BSA 100 mM Mg-Ac
500 mM NaCl -Free)    5 mM Dithiothreitol 3.10 × H 500 mM Tris-HCl,pH7.5 660 mM K-Ac
100 mM MgCl2  6. 0.1% BSA
10 mM  Dithiothreitol 7. 0.1% Triton X-100
1,000 mM NaCl
●10×Loading Buffer组成
(开封后室温保存)
0.9% SDS
50% Glycerol
0.05% Bromophenol Blue
使用时添加反应液量的1/10,即可停止反应,进行电泳。-20℃保存时,会出现SDS沉淀,请于温水浴中溶解后使用。在室温下保存时,SDS有时也会出现沉淀,此时同样请在温水浴中溶解后使用。
λAd2 SV φX pBR pUC pUC M13 Col
40 174 322 19 119 mp18 E1
7 12    6 0    1    1    1    1
0 V2011.12

本文发布于:2024-09-22 17:29:58,感谢您对本站的认可!

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