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土壤过氧化氢酶的测定方法

ICS13.080.30

B10

团体标准

T/NAIA XXXX—2020

土壤过氧化氢酶活性的测定包装箱制作

（高锰酸钾滴定法）

id卡制作2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施宁夏化学分析测试协会发布

前言

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》规定编写。本标准由宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）提出。

本标准由宁夏化学分析测试协会归口。

本标准起草单位：宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）、宁夏大学、宁夏农林科学院荒漠所、银川能源学院、宁夏化学分析测试协会。

扫路刷本标准主要起草人：任亚丽、白玲、张亮亮、卜姣姣、杨洁、季波、鲁静、张小飞、刘娜娜。本标准于2020年XX月XX日首次发布。

土壤过氧化氢酶的测定

（高锰酸钾滴定法）

1范围

本标准规定了土壤过氧化氢酶的测定方法（高锰酸钾滴定法）。

本标准适用于各类土壤过氧化氢酶的测定（高锰酸钾滴定法）。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 601化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

光盘封套NY/T 1121.1土壤检测第一部分：土壤样品的采集、处理和贮存

3原理

在4℃条件下，土壤过氧化氢酶酶促分解过氧化氢，用高锰酸钾标准溶液滴定反应剩余过氧化氢，所消耗的高锰酸钾标准溶液体积数来表示过氧化氢酶的活性。

4试剂和溶液

除非另有说明外，本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂，分析用水为GB/T 6682规定的三级水。

4.1甲苯（C 7H 8）。

4.2浓硫酸（H 2SO 4）。

4.3过氧化氢（H 2O 2）。

4.4高锰酸钾（K 2MnO 4）。

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4.5硫酸溶液（0.2mol/L）

准确移取5.43mL 浓硫酸，缓缓注入400mL 水中，冷却后用水定容至500mL。置于4℃冰箱贮存。

4.6高锰酸钾标准溶液c（1/5K 2MnO 4）=0.1mol/L

称取3.3g（精确至0.0001g）高锰酸钾，溶于1050mL 水中，缓缓煮沸15min，冷却，于暗处放置两周，过滤。贮存于棕瓶中，并按照GB/T 601对其进行标定。

4.7过氧化氢水溶液（3%）

准确量取30%过氧化氢溶液25mL，用水定容至250mL，配成3%过氧化氢水溶液，置

于4℃冰箱贮存，临用时用0.1mol/L 高锰酸钾标准溶液（4.6）标定。准确吸取1.00mL 3%过氧化氢溶液于50mL 三角瓶中，加入5mL 水，5mL 0.2mol/L 的硫酸溶液（4.5），用0.1mol/L 的高锰酸钾标准溶液（4.6）标定，所消耗的体积数为16.51mL。

备注：由于不同批次的过氧化氢浓度存在差异，因此需要每次滴定前标定，若消耗高锰酸钾标准溶液（4.6）的体积大于或小于16.51mL 时，说明过氧化氢的实际浓度大于或小于3%，这种情况就要重新配制过氧化氢溶液重新标定，直到过氧化氢实际浓度等于3%时才能使用。

5仪器设备

5.1电子天平：感量0.0001g。

5.2冰箱（4℃）。

5.3酸式滴定管。

6操作步骤

分别称取5g（精确至0.0001g）土壤（如含量高可适当减少称样量）样品于具塞三角瓶中（用不加土样的作空白对照），加入0.5mL 甲苯（4.1），摇匀，于4℃冰箱中放置30min。取出，立刻加入25mL 4℃冰箱贮存的3%过氧化氢水溶液（4.7），充分混匀后，再置于4℃冰箱中放置1h。取出，迅速加入25mL 贮存于4℃冰箱的0.2mol/L 硫酸溶液（4.5），摇匀后过滤。准确吸取1.00mL 滤液于50mL 三角瓶中，加入5mL 水和5mL 0.2mol/L 硫酸溶液（4.5），用0.1mol/L 高锰酸钾标准溶液（4.6）滴定，滴定至紫褪去出现浅粉为终点。根据空白和样品的滴定差，求出相当于分解过氧化氢的量所消耗的高锰酸钾标准溶液（4.6）。

7结果计算

上彩

过氧化氢酶活性以1h，1g 风干土壤所消耗0.1mol/L 高锰酸钾标准溶液的体积数来表示，按式（1）计算：

f m T

V V X ⨯⨯-=)(0)

1(⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅高锰酸钾滴定度的矫正值，按式（2）计算：

502.0)

n 5/14⨯=O KM c T （)

2(⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅式中：X 过氧化氢酶活性，单位为毫升每克每小时（mL/g·h）；

V 0空白所消耗的高锰酸钾标准溶液的滴定体积，单位为毫升（mL）；V 样品所消耗的高锰酸钾标准溶液的滴定体积，单位为毫升（mL）；T 高锰酸钾滴定度的矫正值；m 表示新鲜土壤质量，单位为克（g）；

f表示风干土壤占新鲜土壤的比例。

结果保留三位有效数字。