过氧化氢酶活性的测定

华南农业大学实验报告

专业班次 11农学一班组别201130010110

题目影响酶促反应的因素姓名梁志雄日期

【实验原理】

1、酶的化学本质是蛋白质，作为催化剂，与一般的有机和无机的催化剂相比较，有其相同之处，但也有其特异性。酶促反应的速度要比一般的催化剂催化的反应速度要快得多，本实验比较生马铃薯糜（含活泼过氧化氢）、熟马铃薯糜（已将过氧化氢钝化）、铁粉对于这个反应的催化效果，放出的氧气气泡越多，反应速度越快。

2、酶的重要特性之一就是其催化的专一性，一种酶只能催化一个反应或者是一类反应。本实验分别研究淀粉酶和蔗糖酶的专一性。根据蔗糖酶和淀粉酶催化的反应方程式可知，反应生成的单糖都是还原糖，利用还原糖与本乃狄试剂试剂中的铜离子反应，生成转红丝的Cu2O沉淀，因此可以利用这个反应是否有砖红沉淀产生来判断是否有产物还原糖生成，从而确定某种底物的存在是否有酶促反应的发生。

3、在3中不同的pH条件下，比较淀粉酶催化淀粉水解能力的大小，反应后加碘液，蓝越深，证明淀粉残留越多，该反应的酶活性越低。蓝越浅，淀粉残留越少，该反应的酶活性越高。

4、在0℃、37℃、70℃3个温度条件下，淀粉酶催化反应后淀粉的残余情况，加碘液后蓝越深，残余淀粉越多，该反应酶活性越低。

5、能够使酶促反应速度升高的化学物质称为激活剂。能够使酶促放映速度下降的化学放映物质称为抑制剂。本实验在淀粉酶催化的反应系统中分别加入一定浓度的NaCl和CuSO4，比较反应后淀粉的残余量。蓝越深，酶活性越低，蓝越浅，酶活性越高。

【实验材料和试剂】

马铃薯块茎处理、淀粉酶、1%淀粉溶液、蔗糖酶粗酶液、本乃狄试剂、碘液、2%过氧化氢溶液、2%蔗糖溶液、缓冲液、氯化钠溶液、硫酸铜溶液

【实验步骤】

1、配制适宜浓度的唾液淀粉酶溶液

试管	1	2	3	4	5	6
水	2D	2D	2D	2D	2D	2D
酶	2D»»»	2D»»»	2D»»»	2D»»»	2D»»»	2D»»»
浓度	50%	25%	12.5%	6.25%	3.13%	1.56%
淀粉	均2D，静置5min
碘	均2D
颜	淡棕	棕	蓝	蓝	深蓝	深蓝

2、酶催化的高效性实验，取四支试管，编号1~4，按照表1加入过氧化钠和各种催化物质，立即观察各管气泡出现的情况，在下表中填入数据

表1酶催化的高效性实验

试管编号	1	2	3	4
2%H2O2（ml）	4	4	4	4
生马铃薯糜	少许
熟马铃薯糜		少许
铁粉			少许
所见现象	大量气泡数据存储安全检测	少量气泡	有气泡	没有气泡
如何解释	生马铃薯糜中含有较多的过氧化氢酶、而熟的马铃薯液的的过氧化氢酶则钝化，故1试管中反应迅速，产生大量的气泡，而2试管中则较少，3试管中装有铁粉，铁粉可以催化过氧化氢分解，故3试管中也有气泡产生，但是相对于生物催化剂来说，铁粉的催化能力远不及生物催化剂的催化能力强，故3试管中虽然有气泡，可以比1试管少，4试管做对照用

2、酶催化的专一性实验，取试管6支，编号1~6，按照表2的顺序加入试剂，并进行保温处理，处理后将各管的颜变化记录在表2中，把颜变化填入表2中

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表2酶催化的专一性实验

苹果削皮机

试管编号	1	2	3	4	5	6
1%淀粉溶液（ml）	1	1			1
2%蔗糖溶液（ml）			1	1		1
淀粉酶溶液（ml）	1		1
蔗糖粗酶液（ml）		1		1
蒸馏水（ml）					1	1
将各管摇匀，在37摄氏度恒温中保温10分钟
本乃狄（ml）	2	2	2	2抓瓜	2	2
将各管摇匀，放进沸水浴中保温5分钟
颜	棕红	浅蓝	浅蓝	棕红	浅蓝	浅蓝
解析	1、4试管中，相应的底物都与对应的催化酶液反应，生成了还原性糖，还原性糖与本乃狄试剂中的铜离子反应，生成了棕红的沉淀；2、3试管中，催化剂与底物不相配，故不起反应，试管颜为本乃狄试剂的颜，5、6试管作为对照用。

3、pH对酶促反应的影响实验，取试管3支，编号1~3，按照表3的顺序加进相应的试剂和保温处理，最后加入碘液观察各个试管颜的变化

表3pH对酶促反应的影响实验

试管编号	1	2	3
pH3.4缓冲液（ml）	3
离线浏览 pH6.0缓冲液（ml）		3
pH8.0缓冲液（ml）			3
1%淀粉酶（ml）	1	1	1
唾液淀粉酶（ml）	1	1	1
将各试管摇匀，在37摄氏度的恒温中水浴保温3min
检查淀粉水解的程度	每30秒从2试管取液1滴放在白瓷板上，加入一滴碘液，观察颜是否变蓝，当检查到其颜不再变蓝后，立即取出所有的试管
碘液（ml）	0.5	0.5	0.5
记录各试管颜	深紫	棕黄	深紫
解析	只有在pH的温度中，酶才能发挥出最大的作用，本实验中，2试管中的pH浓度适合酶发挥作用，故淀粉大部分被分解，与碘液反应没有明显的现象

4、温度对于酶促反应的影响实验，取试管3支，编号1~3，按照表4的顺序加入相应的试剂和保温处理，最后加入碘液后观察各管颜的变化

表4温度对于酶促反应的影响实验

试管编号	1	2	3
淀粉酶（ml）	1	1	1
	0摄氏度保温5min	37摄氏度保温5min	70摄氏度保温5min
pH6.0缓冲液（ml）	2	2	2
1%淀粉溶液（ml）	1	1	1
	0摄氏度保温5min	37摄氏度保温5min	70摄氏度保温5min
将各管放在自来水中冷却
碘液（ml）	0.5	0.5	0.5
颜	深蓝	棕红	深蓝
解析	在某一个温度下，酶促反应的反应速度最高，这个温度就是该酶的最适应温度，温度过低会使酶活性降低，温度过高会使酶失活，从上面的实验来看，2试管中的温度是适合酶催化反应的，过底物基本被消耗，产生还原糖，与本乃狄试剂产生棕红沉淀

5、酶的激活与抑制剂实验，去试管3支，编号1~3，按照表5的顺序加入试剂和保温处理，观察各试管中颜变化

表5酶的激活与抑制实验

试管编号	1	2	3
1%氯化钠溶液（ml）	1
1%硫酸铜溶液（ml）		1
蒸馏水（ml）			1
1%淀粉酶（ml）	1	1	1 长效连续捕鼠器
摇匀，在37摄氏度恒温水浴保温1分钟后，没30秒从1号试管中取液1滴放在白瓷板中，加1滴碘液，观察蓝变化，到蓝基本不出现时，把所有的试管都拿出
碘液（ml）	0.5	0.5	0.5
各试管情况	酒红	蓝	棕红
解析	氯化钠溶液对于淀粉酶活性有抑制作用，而硫酸铜溶液对于淀粉酶溶液有促进作用，3号试管做对照

【实验记录】

记录情况在表格中

【实验结论】

上述的5个实验，探究了酶的高效性、专一性，还有温度、pH、激活剂与抑制剂对于酶活性的影响，从实验现象可以知道，酶作为催化剂，与一般的有机和无机催化剂相比较，催化能力较强，一种酶只能催化一个或者是一类反应，酶具有高度的特异性，由于酶的结构关系，酶只有在最适宜温度和pH的条件下，才能发挥最大的催化作用，该温度称为最适温度，该pH称为最适pH，最后一个实验，我们知道了激活剂可以提高酶促反应的速度，而抑制剂即可以使酶促反应的速度下降，利用这两种物质，在工业生产中，就可以根据生产的要求适当控制酶反应的速度。

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