间接免疫荧光——甲醇固定法

1、弃培养基，用PBS洗盖玻片。（一定要洗干净将死细胞除尽，否则影响观察采图）

2、把盖玻片投入到-20度预冷的100%甲醇中，-20度冰箱10min（可以盛在用过的六孔板或60mm金属化膜的皿里，非常好用，建议用六孔板，空深不会溅出液体/面积小省试剂）

3、用PBST（含0.1%Tween20）洗固定的盖玻片，5-10min/次*3次（Tween20起到透化的作用，以利于抗体进入细胞内与抗原结合）

4、然后用10%NGS或BSA（PBST配置）温育10-30min。（此步后，玻片可暂存于4度的70%rbd-312乙醇中，一星期后仍可获得理想的结果。封闭血清推荐用与二抗同种来源的血清，不可用与一抗同源的血清，以避免抗体交叉反应）

5、弃blocking buffer，室温加一抗（用1%BSA的封闭液稀释）温育1h或37度温育30min；

封装外壳6、用含PBST室温洗，5-10min/次*3次；

光线路终端>充气模型

7、二抗（用1%的封闭液稀释）室温温育至少30min；注意避光；

8、用PBST室温洗，10min/次*3次

9、 DAPI复染，50uL室温静置5min

10、细胞面朝下放在一滴10uL anti-fade的载玻片上，用指甲油或Gelvetol（封片剂）等封片，显微观察。

Reference:

《分子克隆实验指南系列：细胞实验指南》科学出版社2001.2月第一版p1006-1007

内孔撑圆涨紧夹具

本文发布于:2024-09-22 04:31:49，感谢您对本站的认可！

标签：细胞血清室温抗体

留言与评论（共有 0 条评论）