第一章实验室与基本操作
第一节实验室及其基本设备
实验室的大小取决于工作的目的和规模： 1.以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产影响效率。
2.在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计避免某些环节 倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。 要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制 温度、光照、湿度等培养条件。
实验室设计
标准的组织培养实验室包括：洗涤室(准备室)；配置室；灭菌室； 接种室；培养室；观察室等 一、准备室
作用：材料、培养器械的清洗、培养基准备、灭菌等的准备工作。 普通化学实验室：仪器及设备、化学药品。 纯水仪、冰箱、移液、过滤灭菌器、电炉、微波炉、磁力搅拌器、 低速台式离心机、电脑等作用：配制培养基。
洗涤室：清洗、贮存器皿设施、鼓风干燥箱等。作用：玻璃器皿、用 具和培养材料的洗涤。
①高压蒸气灭菌装置：如立式、卧式和手提式灭菌器。作用：培养基、 器械、棉塞、无菌纸等灭菌消毒②细菌过滤器
二、无菌操作室
作用：进行植物材料分离接种的重要场所，需长期的无菌操作，对 组织培养成功起关键作
用。
试验设施；超净工作台；紫外灯；固定式和挪移式载物台；消毒器、
广口瓶、酒精灯、酒精棉、机械支架；手术剪、解剖刀、解剖针、镊子等 超净工作台(alaminarflowhood)
工作原理:利用鼓风机驱动空气通过高效过滤器除去空气中的尘埃颗 粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台车库门开门机面，使工作台内构成无菌 环境。
三、培养室
作用：进行材料的培养的场所。其大小、规模可根据工作性质设定。 以充分利用空间和节能为原则。
设备：可调控光、温、湿度等设备。还有固定式培养架、转床、摇床。 合用于器官(芽、茎、花药等)、愈伤组织、细胞和原生质体的固体培养 和液体培养。
四、细胞学实验室
作用：细胞学和组织学观察。
设备：需备有高倍显微镜、体视显微镜、倒置显微镜、各种相机、恒 温箱、切片机、恒温水浴、滴瓶、染缸、载玻片、盖玻片等。
五、温室
作用：哺育组织与细胞培养出来的材料，组培苗的移栽锻炼。 服务评价器第二节基本操作
一、洗涤方法
1、重铬酸钾洗液：
饱和的重铬酸钾洗液： 43 克重铬酸钾溶于 1000 毫升蒸馏水中(饱和三自由度摇摆台 溶液)。按 1：1 体积比将浓硫酸缓慢地倒入饱和重铬酸钾水溶液中。
流程：(12h)
水洗→晾干→重铬酸钾洗液→→ 自来水冲净、蒸馏水洗两次→干燥 2、 洗涤剂：洗衣粉、洗液
3、超声波洗净器：小型玻璃器皿，顽强性污渍。超声波除污。(要 加水)新的玻璃器皿： 0.1﹪HCl 浸泡 12 小时，洗衣粉、自来水洗、蒸馏 水冲。污染的玻璃器皿：要先高压灭菌后，然后再刷洗。要避免交叉污染。
二、灭菌方法
1、干热灭菌：利用鼓风干燥箱(烘箱)进行烘烤灭菌的方法。箱内 温度控制在 150℃， 120min。玻璃器皿.2、湿热灭菌：利用高压蒸汽灭菌 的方法。普通温度为 121℃，压力 0.1MPa，消毒 15~20min。培养基灭菌.
3、熏蒸灭菌：利用药物熏蒸以达到灭菌的目的。用甲醛内加入高锰 酸钾、百菌清、硫磺熏蒸。用 3%来苏尔溶液或者 1%漂白粉水溶液，或者0.2% 过氧乙酸溶液喷洒、拖擦地板。培养室、接种室灭菌.
4、过滤灭菌：使溶液通过夹有微孔滤膜的漏斗，滤膜孔径需选用 0.3~0.45μm。在无菌环境下，用真空泵抽滤，其滤液为无菌。液体培养 (不耐高温活性物质)
5、药剂灭菌：用 70~75%酒精、 0.1~0.2%、 10%的次氯酸钠、 新洁尔灭、 Cloro 某等药剂灭菌的方法。培养材料灭菌。 6、烧灼灭菌： 用酒精灯烧灼达到灭菌的目的。接种器具灭菌。
7、射线灭菌：用紫外线照射的方法灭菌。照射时间普通为 15~ 30min。接种时应关闭紫外灯。室内灭菌。
三、无菌操作
1.接种室以及工作台灭菌：紫外灯 30 分钟，用时一定要关闭它。 2. 喷嘴清洗工作台消毒： 70%乙醇，用小型喷壶消毒或者棉球擦拭。
3.点燃酒精灯，开启灭菌器,对使用器械进行烧烤灭菌。器械冷却后 方可使用。
第三节培养基的配置
一、培养基成份(culturemedium：维持离体细胞生存和生长的溶液)主 要有：
1、无机盐：包括大量元素( N，P，K，Ca、S、Mg)，微量元素( Fe、 Mn、Zn、B、Mo、Cu、Cl、Co、I)。 2、有机化合物：碳源(糖类)，维减速机测试 生素类，有机含氮化合物。
3、植物生长调节物质：生长素，细胞分裂素，赤霉素，脱落酸等。 4、 附加物类：琼脂，活性炭，椰乳，硝酸银等。
1、无机盐——大量元素和微量元素大量元素：
N：用量最多。常用的有硝态氮和铵态氮， KNO3、NH4NO3 植物组织， 从培养基中吸收氮后形成蛋白质。 P：在植物组织培养在的细胞增殖分化 大量需要。主要从 NaH2PO4、KH2PO4 供应。磷参预核酸、能量代谢。 K： 直接影响培养物中酶的活性。主要由 KCl、KNO3 或者 KH2PO4 供应。
rct-341
主要包括 Fe、Mn、Zn、B、Mo、Cu、Cl、Co、I 等。植物对这些元素 需要量甚微，稍多
会发生毒害。 Fe 是用量较多的一种微量元素，对组织 中叶绿素的合成和延伸生长起重要作用。铁常以 FeSO4 和乙二胺四乙酸钠 (Na2-EDTA)的螯合物存在于培养基中。
作用：维持培养基的合适渗透压对初生细胞和原生质体的完整性有十 分重要作用。此外，糖类也是合成有机物的碳源。最常用有：蔗糖、葡萄 糖、果糖、多糖、可溶性淀粉和糊精。作为氮源，蔗糖普通浓度为 2%~ 3%。
糖的浓度影响组织分化类型：
在高浓度(3%~4%)的蔗糖有利于韧皮组织分化；低糖浓度(1.5%~ 2.5%)时，仅生长出木质部；适中浓度时形成具有木质部和韧皮部。
②维生素类
作用：直接参预生物催化剂(酶)的形成、蛋白质、脂肪代谢等重要 生命活动。
③有机含氮化合物
氨基酸：常用的为：甘氨酸及酰胺类物质。如谷氨酰胺、天冬酰胺和 多种氨基酸混合物。
水解乳蛋白、水解酪蛋白。
3、植物生长调节物质①生长素：
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议