青海农林科技•试验简报•2020年第4期红花七叶树的组织培养和离体快繁技术 赵玉莲
(大通县桥头公园，青海西宁810100)
摘要：试验对红花七叶树进行了组织快繁研究。结果表明：腋芽启动发育的最优培养基组合为MS+ 6-BA(1.5mg/L)+NAA(0.01mg/L；红花七叶树芽增殖和伸长的最佳培养基为MS+6-BA(1.5mg/L)+ NAA(0.05)mg/L；根培养的最优培养基组合是WPM+IBA(0.2mg/L)+NAA(0.01mg/L)，移栽至大田，建立一套较为简单、有效的红花七叶树组织培养和离体快繁技术体系。 关键词：红花七叶树；组织培养
中图分类号：Q943.1文献标识码：A文章编号：1004-9967(2020)04-0078-03
Tissue Culture and in Vitro Rapid Propagation of Safflower buckeye
ZHAO Yu-lian
(Qiao Tou Park,Datong County,Xining Qinghai810100,China)
Abstract:The test studied on tissue rapid propagation of safflower buckeye.The results showed that the optimal medium combination for the initiation and development of axillary buds was MS+6-ba (1.5mg/L)+NAA(0.01mg/L),that for bud proliferation and elongation was MS+6-ba(1.5mg/L)+ NAA(0.05)mg/L,and that of root culture medium was WPM+IBA(0.2mg/L)+NAA(0.01mg/L).Then test一tube seedlings were domesticated and transplanted.Those establish a relatively simple and effective system of tissue culture and in vitro rapid propagation of safflower buckeye.
Key words:Safflower buckeye；Tissue culture
红花七叶树(Aesculus pavia)为七叶树科七叶树属的落叶乔木⑷，原产欧洲巴尔干半岛，是七叶树科中最美丽的一种，具有极高的观赏等应用价值。该树种在生产中多以种子直播为主⑵，因种子数量及播种苗性状易分离所限，很难满足市场需求及优良单株的繁殖要求。也可采用抒插⑶、嫁接繁殖，但繁殖系数低。因此，探寻该树种新的良种繁育途径十分必要。
通过对红花七叶树组培快繁过程中增殖体系、生根体系、驯化移栽体系等各个环节研究，得到该树种较为高效的工厂化育苗技术体系，为该树种的快繁及进一步遗传改良奠定了基础。
1材料与方法
本试验以温室水培的休眠枝及室外采集的红花七叶树茎段为外植体，进行组培快繁研究。1.1无菌体系的建立
采集休眠枝条，修剪后温室水培至腋芽萌发，剪成2-2.5cm带腋芽茎段；采集半木质化当年生嫩枝，选取带腋芽的茎段，用75%的酒精浸泡30s——无菌水冲洗3次——消毒剂10min——无菌水冲洗5次。消毒结束后，切去外植体剪口部分，接种到不添加激素的MS培养基上，置培养室于25±2乜、16h/d、20001x光照条件下培养。
1.2腋芽发育的启动
将上一步实验中获得的无菌存活外植体，接种在添加不同激素组合的腋芽启动培养基中，试验筛选最优腋芽启动培养基，配置MS培养基添加0.7%的琼脂粉、3%的蔗糖,pH调至5.8。附加6-BA0.5、］.0、l.5mg/L三个浓度梯度;NAA 0.00、0.01、0.05mg/L三个浓度梯度。接种后置于培养室培养。培养室温度25±,16h/d光照，光照强度20001x o1个月后统计出芽率。
1.3芽的增殖和伸长
设置3组试验,MS培养基+6-BA(1.5mg/ L)+NAA(0.00mg/L^0.Olmg/L^O.05mg/L)，培养基中均添加0.7%的琼脂粉、3%的蔗糖,pH调
收稿日期:2020-03-31 78
至5.8。
1.4根的诱导与驯化移栽
配制WPM培养基，每种培养基均以0.7%的琼脂固化，并将pH调至5.8。附加IBAO.0、O.2、0.4mg/L三个浓度梯度；NAA0.00、0.01、0.05mg/L三个浓度梯度。接种后置培养室于25±2七、16h/d、20001x光照条件下培养。
当生根苗根长至3-6cm时，将瓶盖打开，炼苗3d。先用蹑子轻轻夹出幼苗，在流水中轻轻冲洗根部培养基，移栽至装有营养土的穴盘培育盘中，盖好培养盘盖子，室温炼苗15天后去盖。
2结果与分析
2.1芽发育的启动实验结果
腋芽发育的启动试验表明,6-BA和IBA浓度配比明显影响腋芽的发育。当添加1.5mg/L 6-BA和0.01mg/L NAA时，腋芽出芽率最高。故腋芽发育启动的最优培养基组合为MS+6-BA(1.5mg/L)+NAA(O.01mg/L)o
表1不同激素对腋芽启动发育的影响
Table1Effect of different hormone on axial bud germination
因素出芽率(％)
殛亏
A(6-BA)B(NAA)重复1重复H重复m平均值1l(0.5mg/L)1(0.OOmg/L))55606560
212(0.01mg/L)70757071.7
313(0.05mg/L)45404543.3
42(1.0mg/L)170758075
52285809085
62385807580
73(1.5mg/L)1951009095
83280808581.7
93380758078.3
2.2芽的增殖和伸长实验结果0.lOmg/L四个浓度梯度，统计芽的平均增殖个
基本培养基为MS培养基,6-BA1.5mg/L，数和伸长生长情况，试验结果如表2所示：
NAA设置0.00mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、
Table.2Effect of6-BA and IAA on shoot ratio and shoot elongation
表26-BAJAA对幼芽增殖和伸长的影响
植物生长调节物质
(mg/L)平均增殖个数
伸长长度
金钢绳
(cm)
wifi室内定位
生长情况
6-BA1.5+NAA0.00 1.9 1.2生长较弱，叶小而薄6-BA1.5+NAA0.01 2.5 2.0生长正常
6-BA1.5+NAA0.05 3.2 3.8生长旺盛，茎粗叶厚6-BA1.5+NAA0.10 2.4 2.7生长正常，茎弱、细长
由表2可看出当生长素NAA浓度为0.01mg/L时,6-BA在0.5-1.5mg/L的范围内，随浓度增加，茎芽增殖数和茎伸长长度都增加，当浓度为1.5mg/L时，芽的增殖效果最明显。随着6-BA浓度的增加，增殖效果减弱，甚至会有抑制作用。
钢丝绳卷筒对于生长素NAA也出现了类似的现象，增殖效果随NAA浓度的增加是先增后降，也就是说两种激素都是在低浓度时效果不明显，而在高浓度时反而抑制芽的增殖和伸长。实验表明当激素组合为6-BA(1.5mg/L)、NAA(0.05mg/L)时植株生长旺盛，茎粗叶厚。筛选出的6-BA浓度与启动培养中的浓度一致，生长素浓度比启动培养高，这与生长素促进节间伸长有一定关系。因
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此，对于红花七叶树腋芽增殖和伸长的最佳培养基为MS+6-BA(1.5mg/L)+NAA(0.05mg/L)o 2.3根的诱导实验结果
根的诱导试验表明，IAA和IBA浓度配比明显影响生根质量。当添加0.2mg/L IBA和O.Olmg/L NAA时，生根率最高、根平均长度最长。故诱导根的最佳培养基为WPM+IBA (0.2mg/L)+NAA(O.Olmg/L)。
表3生根培养试验结果表
Table.3Results of rootage experiments
试验号一
实验因素生根率(％)根平均长度
A B I n平均I n平均
11(0.0mg/L)1(0.OOmg/L)62.464.263.4 6.3 6.7 6.5 212(0.01mg/L)71.875.773.8 5.9 5.8 5.9 313(0.05mg/L)74.372.273.311.610.511.1 42(0.2mg/L)181.683.682.613.512.613.1 52293.497.395.414.513.614.0 62395.991.993.913.913.813.9 73(0.4mg/L)167.769.66&711.510.611.0 8325&962.760.9 6.4 6.2 6.3 93356.059.95&0 6.8 6.4 6.6
大电流导线2.4试管苗的驯化移栽降香黄檀树
由于IBA诱导的试管苗根系与茎段连接处几乎没有愈伤组织产生，且主、侧根均较粗壮，因此，按照我们的方法移栽成活率较高。红花七叶树试管苗叶片较大，蒸腾失水快，开盖炼苗3d的试管苗移栽至培养基质中如不及时套塑料袋，5min内就可出现叶片失水萎蕎现象，影响移栽成活率。因此，移栽时套袋保湿是关键。
3项目成果及讨论
31以出芽率为统计指标，分析数据得出腋芽启动发育的最优培养基组合为MS+6-BA (1.5mg/L)+NAA(0.01mg/L)o
3.2对腋芽平均增殖个数、伸长长度和生长状况进行统计观察，得到红花七叶树芽增殖和伸长的最佳培养基为MS+6-BA(1.5mg/L)+NAA (0.05)mg/L o
3.3通过生根率和平均根长度的统计分析，得出根培养的最优培养基组合是WPM+IBA (0.2mg/L)+NAA(0.01mg/L)。
分词技术3.4红花七叶树试管苗驯化移栽的关键是，将开盖炼苗3d的试管苗移栽至装有营养土的培养容器后盖盖保湿15d。
3.5腋芽萌发启动困难，细作。叶片大，纸条粗，污染率高，应尝试多种消毒剂，如漂白粉、洗洁精等
清洗。红花七叶树幼苗基部容易褐变⑸，为阻止幼苗继续吸取营养物质，要及时切去褐变部分，继代于新鲜的培养基中。此后研究可以尝试用PVP、活性炭处理。
参考文献：
〔1〕姚方，郭振锋.红花七叶树的育苗及栽培技术〔J〕.绿科技,2010,(11).
〔2〕乔卫阳，张荣祥，唐泽鸿，等.七叶树育苗及栽培技术〔J〕.林业实用技术,2007,(9)：23-24.
〔3〕张兴，耿翠芳，李杰.七叶树嫩枝杆插育苗研究〔J〕.山东林业科技,2008,(1)：56-58.
〔4〕吕秀立，施季森.欧洲七叶树体细胞胚胎发生研究〔J〕.分子植物育种,2003,6(1)：649-654.
〔5〕尉芹，马希汉，张玲.七叶树叶提取物氧化性能的研究〔J〕.西北农林科技大学学报,2001,29(3):41-44.
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