中华人民共和国国家标准
G B4789.10 2016
食品安全国家标准
<2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
前言
本标准代替G B4789.10 2010‘食品安全国家标准食品微生物学检验金黄葡萄球菌检验“㊁S N/T0172 2010‘进出口食品中金黄葡萄球菌检验方法“㊁S N/T2154 2008‘进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌检测方法兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术“㊂
本标准与G B4789.10 2010相比，主要变化如下:
试验用增菌液统一为7.5%氯化钠肉汤㊂
食品安全国家标准
食品微生物学检验金黄葡萄球菌检验
1范围
本标准规定了食品中金黄葡萄球菌(S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s)的检验方法㊂
本标准第一法适用于食品中金黄葡萄球菌的定性检验；第二法适用于金黄葡萄球菌含量较高的食
品中金黄葡萄球菌的计数；第三法适用于金黄葡萄球菌含量较低的食品中金黄葡萄球菌的计数㊂2设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下:
2.1恒温培养箱:36ħʃ1ħ㊂
2.2冰箱:2ħ~5ħ㊂
2.3恒温水浴箱:36ħ~56ħ㊂
2.4天平：感量0.1g㊂
2.5均质器㊂
多媒体网络中控2.6振荡器㊂
2.7无菌吸管:1m L(具0.01m L刻度)㊁10m L(具0.1m L刻度)或微量移液器及吸头㊂ 2.8无菌锥形瓶：容量100m L㊁500m L㊂
2.9无菌培养皿：直径90mm㊂
2.10涂布棒㊂
2.11p H计或p H比管或精密p H试纸㊂
爆震弹3培养基和试剂
3.17.5%氯化钠肉汤：见A.1㊂
3.2血琼脂平板：见A.2㊂
3.3 B a i r d-P a r k e r琼脂平板：见A.3㊂
3.4脑心浸出液肉汤(B H I)：见A.4㊂
3.5兔血浆：见A.5㊂
3.6稀释液：磷酸盐缓冲液：见A.6㊂
3.7营养琼脂小斜面：见A.7㊂
3.8革兰氏染液：见A.8㊂
3.9无菌生理盐水：见A.9㊂
第一法金黄葡萄球菌定性检验
4检验程序
金黄葡萄球菌定性检验程序见图1㊂
图1金黄葡萄球菌检验程序
5操作步骤
5.1样品的处理
称取25g样品至盛有225m L7.5%氯化钠肉汤的无菌均质杯内,8000r/m i n~10000r/m i n均质1m i n~2m i n，或放入盛有225m L7.5%氯化钠肉汤无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1m i n~ 2m i n㊂若样品为液态，吸取25m L样品至盛有225m L7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀㊂
5.2增菌
将上述样品匀液于36ħʃ1ħ培养18h~24h㊂金黄葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长㊂
5.3分离
将增菌后的培养物，分别划线接种到B a i r d-P a r k e r平板和血平板，血平板36ħʃ1ħ培养18h~ 24h㊂B a i r d-P a r k e r平板36ħʃ1ħ培养24h~48h㊂
5.4初步鉴定
金黄葡萄球菌在B a i r d-P a r k e r平板上呈圆形，表面光滑㊁凸起㊁湿润㊁菌落直径为2mm~3mm，颜呈灰黑至黑，有光泽，常有浅(非白)的边缘，周围绕以不透明圈(沉淀)，其外常有一清晰带㊂当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感㊂有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同㊂从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其黑常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙，质地较干燥㊂在血平板上，形成菌落较大，圆形㊁光滑凸起㊁湿润㊁金黄(有时为白
)，菌落周围可见完全透明溶血圈㊂挑取上述可疑菌落进行革兰氏染镜检及血浆凝固酶试验㊂5.5确证鉴定
5.5.1染镜检：金黄葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5μm~1μm㊂
裹尸袋
5.5.2血浆凝固酶试验：挑取B a i r d-P a r k e r平板或血平板上至少5个可疑菌落(小于5个全选)，分别接种到5m LB H I和营养琼脂小斜面,36ħʃ1ħ培养18h~24h㊂
取新鲜配制兔血浆0.5m L，放入小试管中，再加入B H I培养物0.2m L~0.3m L，振荡摇匀，置36ħʃ1ħ
温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固(即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块)或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果㊂同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照㊂也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验㊂
modbus网关模块结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5m LB H I,36ħʃ1ħ培养18h~48h，重复试验㊂5.6葡萄球菌肠毒素的检验(选做)输电线路覆冰
可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌肠毒素㊂
6结果与报告
6.1结果判定：符合5.4㊁5.5，可判定为金黄葡萄球菌㊂
6.2结果报告：在25g(m L)样品中检出或未检出金黄葡萄球菌㊂
第二法金黄葡萄球菌平板计数法
7检验程序
金黄葡萄球菌平板计数法检验程序见图2㊂
图2金黄葡萄球菌平板计数法检验程序
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