r:bioer Hits: Hanks液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hanks液则是无钙镁离子的Hanks液。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在BSS中可生存几个小时。 胰蛋白酶溶液是一种常用的细胞消化液，原代培养时用于处理组织块，使细胞分离下来。传代时用胰蛋白酶使培养细胞离开所贴附的培养瓶表面，并分散成单个细胞。胰蛋白酶主要采自牛或猪的胰脏，呈白粉末状，易潮解，应在低温干燥处保存。胰酶的活力常用一份胰酶解离酪蛋白的份数表示，常用胰酶活力为1：125或1：250。 胰蛋白酶对细胞的分离效果与细胞的类型、特性和瓶壁表面特性有关。一般来说浓度大、温度高(勿高于37℃)、作用时间长，则对细胞分离能力大。但超过一定程度会损伤细胞，导致细胞传代后不能贴壁或死亡。胰酶在pH 8.0、37℃时消化能力最强。溶液中的Ca2+、Mg2+和血清会降低胰酶活力，所以配制胰酶时须用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液。当消化结束时，可加入少量血清或含血清的培养基以终止胰酶作用。
细胞传代使用的胰酶浓度是0.25%或0.2%。用于原代细胞培养消化组织块则为0.1%或0.125%。
材料：3000 mL锥形瓶，25 mL、50 mL试剂瓶，500 mL输液瓶，螺口盖，翻帽塞，pH试纸，孔径0.22μm的微孔滤膜。地震的模拟实验
药品：NaCl，Na2HPO4，KH2PO4，KCl，酚红，NaHCO3，胰蛋白酶干粉，0.02%EDTA，CaCl2，D-葡萄糖，MgCh·6H20，MgSO4·7H2O，酚红(0.1%)(配法：称酚红2 g，置于研磨器中，先用数滴5.6%的NaHCO3溶液溶解并研磨，再加进该5.6%NaHCO3溶液使最终体积为100 mL。瓶装保存，备用)。 仪器： 抽滤泵1套，过滤器1套，高压灭菌锅，量筒，磁力搅拌器，研磨器。
(一)配制D-Hanks液
1．按下表称取D-Hanks试剂。
2．依次加入上述试剂至800 mL无菌水中，磁力搅拌下溶解，加2%酚红1ml（如果是储存以后用，则先不加），定容至1000 mL。防护服生产线设备
3．高压灭菌，10磅10 min。
NaCl 8.00g
KCl 0.40g
Na2HPO4•12H2O 0.12g
或者Na2HPO4•7H2O 0.09g
或者Na2HPO4•H2O 0.06g
或者Na2HPO4 0.048g
反相加法器
KH2PO4 0.06g
无水葡萄糖 1.00g
双蒸水 1000ml
(二)配制Hanks液
详见Hanks液、PBS的配制
(三)配制胰蛋白酶消化液
1．D-Hanks液高压灭菌之后，晾至室温，4℃保存备用。
2．称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中)，加入少量D-Hanks液研磨1 000次左右，调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中，4℃下磁力搅拌使完全溶解。
3．用NaHCO3干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左右(胰酶作用的最适pH值)，并加入0.02%EDTA以协助消化作用。
CS CN
4．滤过除菌，-20℃冻存。
注意事项：
1．BSS的pH值应确定为7.2左右。
2．如配制的Hanks液高压灭菌后液体变混，则可将100 mL的CaCl2与含有其他成分的液体分别装瓶高压灭菌之后，再在无菌条件下配制，定容。这样可以避免高压灭菌后液体变混。
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3．胰酶受热易失活，所以尽量避免盛夏配制，并且在配制过程中温度应始终保持在4℃左右。
4．胰酶研磨要充分，否则在过滤时会将较大的颗粒过滤掉，不能达到真正的浓度。
5．胰酶分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时体积会膨胀，而多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。
补充：EDTA-胰蛋白酶的配制
1、胰酶是0.25%，这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS，注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。
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