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ZNF750基因启动子异常甲基化在食管鳞癌发病中的作用研究

分类号：R730.2学校代码：5182铝合金

10114密级：学号：041510527

硕士学位论文

ZNF750基因启动子异常甲基化在食管鳞癌发病中的作用研究Effects of aberrant methylation of ZNF750promoter in the

development of esophageal squamous cell carcinoma

中国山西

二〇一八年六月一日

研究生：常

璐指导教师：

崔永萍教授专业名称：

细胞生物学研究方向：

肿瘤病因学学位类型：

学术学位所在学院：基础医学院

分类号：R730.2学校代码：10114

密级：学号：041510527

ZNF750基因启动子异常甲基化在食管鳞癌发病中的作用研究Effects of aberrant methylation of ZNF750promoter in the development of esophageal squamous cell carcinoma

研究生：常璐

指导教师：崔永萍教授

专业名称：细胞生物学

研究方向：肿瘤病因学

学位类型：学术学位

所在学院：基础医学院

中国山西

二〇一八年六月一日

防裂霜目录

中文摘要.................................................................................................................................I 英文摘要..............................................................................................................................III 常用缩写词中英文对照表...................................................................................................V 前言 (1)

1材料与方法 (2)

1.1实验材料 (2)

1.2实验方法 (7)

一次性咖啡杯>蒙自水芹

2结果 (20)

语音合成技术2.1生物信息学预测ZNF750基因启动子区存在CpG岛甲基化位点 (20)

键盘防尘罩2.2食管鳞癌细胞中ZNF750基因启动子甲基化程度与其表达呈负相关 (21)

2.35-Aza-dC诱导食管鳞癌细胞中ZNF750基因的表达 (22)

2.45-Aza-dC对食管鳞癌细胞生物学行为的影响 (23)

2.55-Aza-dC对食管鳞癌细胞凋亡及周期相关蛋白表达的影响 (26)

2.6成功构建pGL3-Basic-P600、pGL3-Basic-P600-HpaII、pGL3-Basic-P600-HhaI

荧光报告载体 (26)

2.7DNA甲基化抑制ZNF750基因启动子的转录活性 (27)

3讨论 (28)

4结论 (34)

参考文献 (35)

综述 (39)

致谢 (48)

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 (49)

个人简历 (50)

山西医科大学硕士学位论文

ZNF750基因启动子异常甲基化在食管鳞癌发病中的作用研究

摘要

目的：

研究锌指蛋白750（zinc finger protein750,ZNF750）基因启动子的异常甲基化对其表达的改变及甲基化抑制剂对食管鳞癌细胞生物学行为的影响，并初步探讨其调控机制。

方法：

运用癌症基因组图谱计划（The Cancer Genome Atlas,TCGA）食管癌数据库分析ZNF750基因表达与其甲基化程度的相关性；通过University of California at Santa Cruz （UCSC）基因组数据库及CpG Island Prediction预测ZNF750基因启动子甲基化位点；亚硫酸氢盐测序PCR（bisulfite sequencing PCR,BSP）方法检测不同食管鳞癌细胞系中ZNF750启动子区的甲基化水平，并采用反转录定量PCR（Reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）法检测不同食管鳞癌细胞系中ZNF750基因的表达；筛选高甲基化的食管鳞癌细胞系KYSE140和KYSE150，甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC）作用后检测ZNF750基因的表达，并通过四甲基

偶氮唑盐（Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比法、Transwell法和流式细胞术检测5-Aza-dC处理前后细胞生物学行为的改变；蛋白印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白聚ADP核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase, PARP）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cysteinyl aspartate specific proteinase-3, Caspase-3）和细胞周期蛋白B-1（CyclinB-1,CCNB-1）、细胞周期蛋白E-1（CyclinE-1, CCNE-1）的表达。构建不同甲基化程度的ZNF750启动子荧光素酶报告质粒pGL3-Basic-P600、pGL3-Basic-P600-HpaII、pGL3-Basic-P600-HhaI，转染食管鳞癌细胞系KYSE150，双荧光素酶实验检测ZNF750启动子DNA甲基化对其转录活性影响。

本文发布于:2024-09-20 23:40:03，感谢您对本站的认可！

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标签：基因食管蛋白

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