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5. 数据分析
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⽬前构建链特异性⽂库的⽅法有多种，其中⽤的最普遍的是dUTP⽅法，跟普通建库⽅式相⽐，链特异性建库会在第⼆链 cDNA 合成时，⽤dUTP代替dTTP，加接头后⽤UDGase处理，降解掉有U的第⼆条cDNA，这样使得测序后的数据可以确定链的⽅向性，从⽽可以判断转录本是来⾃正义还是反义DNA链。与普通转录组测序相⽐，它能更准确地统计转录本的数量和确定基因的结构。推荐个帖⼦感兴趣的可以学习⼀下该建库⽅式的原理 下⾯通过这张建库⽰意图来看看普通RNA-Seq建库和链特异性建库的差异在什么地⽅ 图⽚.png
数据分析流程
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数据量⼤⼩
转录调控测序所需的数据量随项⽬类型不同⽽有所差异，数据量还与基因组⼤⼩、复杂度有关⽬前，为保证数据分析结果的可靠性和准确性，对于Illumina平台、PacBio平台：
mjpg真核转录组测序推荐采⽤6Gb 数据量进⾏后续分析，如果想检测到更低丰度的转录本，推荐采⽤8-10Gb数据量；
原核⽣物转录组，推荐采⽤4Gb数据量进⾏后续分析；
关注点
转录组的分析⼤致有以下⼏种情况：
1. 同⼀物种在发育过程中的各时间节点的基因表达特点及存在的差异； 2. 不同品系之间存在的差异表达基因；
3. 不同的外界条件处理，如细菌、真菌、病毒、光照、紫外、⼲旱、⾼温、⾼盐胁迫，对基因表达的影响；
4. 同⼀个体，不同组织之间的基因表达差异。
v型钢
病历夹其他常见问题
⽣物学重复问题半导体模块
⽣物学差异是基因⾃⾝表达的特性，与检测技术的选择以及数据处理的⽅式⽆关，如果没有⽣物学重复，或者⽣物学重复的数量不够，就不能得到有统计意义的实验结果。获得的差异表达基因很可能仅仅是少数个体差异的表现，并不能反映疾病或者某种特定⽣理状态的体本质特征，并且有些审稿⼈会很在意⽣物学重复这个问题。
1. 对于动植物样品，建议5个以上⽣物学重复，对⽣物学样品之间做相关性检验，提⾼实验结果的可信度。
热扩散系数
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