其中肝脏分布最多。可以利用这些特点把药物运送到以上靶器官，达到以及辅助的作用。水凝胶剂是近年来发展较快的一种新型生物黏附释药系统，能增稠、改善体系流变性、悬浮和提供生物黏附性，具分散性好、均匀性好，黏附力强、稳定性好、药效持久、应用方便、可避开首过效应和给药部位浓度高等优点，且涂抹性好、无油腻感、不污染衣物，透皮吸收速度比乳膏剂快，与外用溶液剂相较，可延缓药物释放，延长药物在皮肤上的保留时间。莪术微乳凝胶即将莪术微乳加至水凝胶基质中形成的水凝胶剂，与常规中药微乳相比能显著增加难溶物的溶解度，经皮给药可以起到缓释、控释、靶向 的作用［9］
。国内经皮制剂根据现代经皮给药系统（transdermal therapeutic system ，TTS ）的要求研制，其研究起步稍晚，但是中药外治历史悠久，疗效显著，现代经皮给药制剂新技术如离子导入、电致孔、超声波导入、磁导入、激光技术、微针透皮、热疗技术等结合我们中医药自身的优势特如中医的综合诊治理论、穴位同经络学、脏象学等传统的中医理论相结合，
可能是开发中药经皮制剂的有效途径［10-11］
。
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江叔奇，葛卫红*
，吴君金，石婷婷，许广艳，阮利君（浙江中医药大学药学院，浙江杭州310053）
收稿日期：2010-09-28基金项目：国家科技支撑计划项目（2006BAI098B08-08）作者简介：江叔奇（1982—），男，硕士生，研究方向：中药新药开发。E-mail ：jiangshuqi@yahoo．com．cn *通信作者：葛卫红（1969—），男，博士，教授，硕士生导师，研究方向：中药药理和中药新药开发。Tel ：（0571）86613603，E-mail ：geweihong @hotmail．com
摘要：目的研究冠心苏合丸物质组释放动力学特征。方法以GC-MS 法为检测手段，60%乙醇为释放介质，在（37ʃ
0．5）ħ温度下，采用浆法100r /min 测定同一处方不同厂家生产的和同一厂家生产的不同批号的冠心苏合丸的物质组释放度，以考察不同厂家、不同批号冠心苏合丸物质组释放动力学特征的差异。结果
A 厂（批号9012742）、A 厂（批号
9011245）、A 厂（批号8013353）、B 厂、C 厂和D 厂的冠心苏合丸在240min 内物质组的平均累积释放率分别是：104．12%、107．38%、93．79%、69．33%、75．30%和101．36%，释放曲线的Weibull 分布参数T 50分别为（184．38ʃ19．03）、（186．51ʃ8．65）、（193．38ʃ4．87）、（186．90ʃ10．71）、（246．32ʃ12．90）和（114．23ʃ5．89）min ，T d 分别为（199．42ʃ22．47）、（202．41ʃ9．16）、（220．64ʃ8．34）、（300．06ʃ34．43）、（374．04ʃ40．57）和（168．07ʃ10．79）min 。结论不同
厂家的冠心苏合丸物质组释放动力学特征存在显著性差异，同一厂家不同批号间的冠心苏合丸物质组释放动力学特征
无显著性差异。
关键词：GC-MS 法；冠心苏合丸；物质组释放动力学9
08
中图分类号：R944．2+7文献标志码：A文章编号：1001-1528（2011）05-0809-05
柳编水果篮
冠心苏合丸源于宋代《太平惠民和剂局方》中的苏合香丸，是由苏合香（Styrax）、冰片（Borne-olum）、乳香（制）（Resona Boswellia）、檀香（Lignum Santali Albi）、土木香（Inula helenium）等五味药材组方而成，具有理气、宽胸、止痛之功效，临床用于心绞痛、胸闷、憋气等病症［1］。
丸剂是中药传统剂型之一，早在《五十二病方》中就有记述［2］。传统上，中医根据患者病情辨证论治选用剂型，丸剂常用于病属轻缓或久病体虚余病未清等症。然而，传统中药丸剂释放特征及剂型特点的研究，目前多以中药复方中的单一或少数组分进行。显然，这种研究模式不能将中药及其复方作为一个有机整体，使中医药失去多组分、整体性的特点。
随着组学在现代科学技术中的应用，特别是在中医药研究中的应用，部分学者提出了多组分中药释放动力学评价方法［3-7］，即以多组分中药物质组（化合物组）为中药药动学评价对象，对多组分中药及其复方进行化合物组的释放动力学的量化表征，评价多组分中药制剂的释放特征。本实验以此为基础，采用GC-MS法检测，通过对不同厂家生产的和同一厂家生产的不同批号的冠心苏合丸丸剂间的物质组释放特征进行比较研究，为冠心苏合丸的质量控制提供一定的参考方法。
1仪器与试药
1．1实验仪器
RCZ-6C2型溶出仪（上海黄海药检仪器有限公司）；GC-MS-QP2010Plus气相谱质谱联用仪（日本岛津公司）；Rtx-5MS（30mˑ0．25mmˑ0．25μm）毛细管气相谱柱（Restek）；Avanti J-26XP高速离心机（美国Beckman）；Milli-Q Biocel超纯水仪（美国MILLIPORE公司）；JA2003N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；KH-250DB型超声仪（昆山禾创超声仪器有限公司）。
1．2试剂与药品
冠心苏合丸（A厂，批号：8013353，9011245，9012742；B厂，批号：20081201；C厂，批号：096602；D厂，批号：20090201）；无水乙醇（分析纯，天津市永大化学试剂开发中心，批号：20090811）；超纯水（实验室自制）。
2原理
中药物质组释放/溶出动力学评价方法的基础是：设定多组分中药物质组含量为中药整体性的指标，而中药所含的化合物之间的含量特征关系是其释放特征量化评价的依据。将多组分中药的物质组基本组成特征视为标准谱，采用Kalman滤波法计算，获得多组中药在释放介质中的物质组释放量，并得到其释放动力学［6-11］。
光耦电路
3方法
3．1实验条件
气相谱条件：谱柱为Rtx-5MS（30mˑ0．25 mmˑ0．25μm）；载气为高纯氦气（纯度＞99．999%）；柱体积流量1．23mL/min；柱前压：75．0 kPa；进样口温度250ħ；程序升温：柱温60ħ，保持3min，以15ħ/min速率升温至240ħ，保持4min；进样方式：分流进样，分流比为50ʒ1；进样量1μL。
质谱条件：质谱检测模式：常规扫描模式（SCAN）；电子轰击（EI）离子源，电子能量70eV；离子源温度200ħ；接口温度230ħ；四级杆温度：150ħ；质量扫描范围m/z40 500；溶剂切割时间：3 min。
3．2阴性对照溶液的配制
加入500mL脱气后60%乙醇溶液于溶出杯内，于（37ʃ0．5）ħ，浆法100r/min下搅拌10h，0．22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，依法检测并记录GC-MS图。
mide-0083．3方法学研究
3．3．1各厂家冠心苏合丸标准物质组溶液的制备取各厂家冠心苏合丸（A厂，批号：9012742；B 厂；C厂；D厂）各5丸，精密称定，分别放入研钵，加入50mL脱气60%乙醇溶液，研匀，再取450m
L脱气60%乙醇溶液［12］将混悬药液洗入溶出杯，在密闭条件下［13］，于（37ʃ0．5）ħ，浆法100r/min下搅拌10h，取溶出液适量，5000r/min离心15min，取上清液，即得各厂家标准物质组溶液（A厂家浓度相当于8．178mg生药/mL；B厂家浓度相当于12．706 mg生药/mL；C厂家浓度相当于12．450mg生药/ mL；D厂家浓度相当于8．982mg生药/mL）。3．3．2物质组浓度标准谱测定
取适量各厂家标准物质组溶液，0．22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，按GC-MS法依法测定，将实验数据导出，选取具有主要离子峰的时间段的离子强度，即得物质组浓度标准谱。
3．3．3线性关系考察
018
分别精密移取A厂冠心苏合丸标准物质组溶液0．5、1．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0mL，置10mL 量瓶内，加60%乙醇溶液至刻度，混匀即得0．4089、0．8178、1．6356、3．2712、4．9068、6．5424、8．1780 mg生药/mL的供试液，0．22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，按GC-MS法依法测定，选取标准谱相应时间段的离子强度，并与相应的物质组浓度标准谱比较，以Kalman滤波法计算各供试液的物质组浓度，考察测定和计算方法的线性。
3．3．4精密度试验
取A厂冠心苏合丸标准物质组溶液适量，0．22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，进样6次，依法测定、计算各样本物质组浓度，以考察测定和计算方法的精密度。
3．3．5稳定性试验
取A厂冠心苏合丸标准物质组溶液适量，避光密封，常温下放置，0．22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，分别于0、2、4、8、16、24h各依法测定一次，计算各物质组溶液浓度，以考察测定和计算方法的稳定性。
3．4不同厂家冠心苏合丸的物质组释放
分别取A厂，批号：9012742；B厂；C厂；D厂冠心苏合丸各6份，每份5丸，精密称定，放入不同的溶出杯内，采用桨法装置［14］，释放介质为60%乙醇溶液，在密闭条件下［13］，温度为（37ʃ0．5）ħ，转速为100r/min，分别于30、60、120、180、240min取样10mL，补加等量的60%乙醇溶液，5000r/min离心15min，上清液以0．22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，采用GC-MS法依法测定，并计算各厂家冠心苏合丸的物质组释放度和Weibull分布参数。
3．5同一厂家不同批号冠心苏合丸的物质组释放分别取A厂生产的批号为8013353，9011245的冠心苏合丸各6份，每份5丸，精密称定，放入不同的溶出杯内，按3．4项下方法，测定各批号冠心苏合丸的物质组释放度和Weibull分布参数。
4结果
4．1阴性对照溶液的GC-MS图谱见图1。
4．2方法学研究
4．2．1各厂家冠心苏合丸标准物质组浓度GC-MS 图
以时间t（单位：min）为横坐标，离子强度为纵坐标，记录不同厂家标准物质组溶液GC-MS图谱（图2 5）
。
图1阴性对照溶液的GC-MS
图谱
图2A厂冠心苏合丸标准物质组浓度GC-MS
图谱图3B厂冠心苏合丸标准物质组浓度GC-MS
图谱图4C厂冠心苏合丸标准物质组浓度GC-MS
分级授权
图谱
图5D厂冠心苏合丸标准物质组浓度GC-MS图谱
智能商用豆浆机118
4．2．2GC-MS 法测定的物质组浓度线性
以生药质量浓度（X ）为横坐标，物质组浓度（G t ）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程G t =0．1185X +0．0117（r =0．9997），结果表明，冠心苏合丸溶液的物质组浓度在0．4089 8．1780mg 生药/mL 浓度范围内呈良好的线性关系。4．2．3
精密度实验
与冠心苏合丸物质组标准谱相比较，经Kalman 滤波后，物质组浓度计算结果为（0．9725ʃ0．0127）（n =6），表明物质组浓度测定方法的精密度良好。
4．2．4稳定性实验
与冠心苏合丸物质组标准谱相比较，
冠心苏合丸物质组溶液在室温放置24h 内物质组浓度变化较小，其物质组浓度值的波动范围为（0．9948ʃ0．0240）（n =6），说明冠心苏合丸物质组溶液在24h 内稳定性良好。4．3
不同厂家冠心苏合丸的物质组释放
采用GC-
MS 法测定冠心苏合丸不同时间点释放的物质组含量，
其物质组释放动力学评价方法计算结果显示，不同厂家生产的冠心苏合丸的物质组含量差异显著（图6），
A 、
B 、
C 、
D 4个厂家生产的冠心苏合丸240min 内物质组的平均累积释放百分率分别为（104．12ʃ4．54），
（69．33ʃ1．31），（75．30ʃ2．07），（101．36ʃ0．74）。计算各厂家冠心苏合丸Weibull 分布参数T 50、T d ，发现各厂家丸剂间T 50、T d 存在显著性差异（P ＜0．01）（表1 2）
。
图6不同厂家冠心苏合丸物质组释放曲线（n =6）表1
不同厂家冠心苏合丸释放曲线的Weilbull
分布参数（珔
x ʃs ，n =6）厂家
T 50/min T d /min A 厂184．38ʃ19．03199．42ʃ22．47B 厂186．90ʃ10．71300．06ʃ34．43C 厂246．32ʃ12．90374．04ʃ40．57D 厂
114．23ʃ5．89
168．07ʃ10．79
4．4同一厂家不同批号冠心苏合丸的物质组释放度
GC-MS 法测定计算结果显示，不同批号的丸剂
在各释放时间点的物质组释放度有一定差异，但其
表2
不同厂家冠心苏合丸Weibull 分布参数方差分析
参数变异来源离均差平方和自由度均方F 值T 50组间52536．21317512．07103．30*组内3390．6320169．53T d
组间160379．12353459．7161．94*
组内
17262．34
20
863．12
注：*P ＜0．01。
240min 内累积释放的物质组含量差异不显著，近乎均达到完全释放（图7），批号为8013353、
9011245、9012742的冠心苏合丸在240min 内物质组的平均累积释放百分率分别为：93．79ʃ1．53，
107．38ʃ5．59，
104．12ʃ4．54。计算同一厂家不同批号冠心苏合丸Weibull 分布参数T 50、
T d ，发现各不同批号丸剂间T 50、
T d 不存在显著性差异（P ＞0．05）（表3，4）
。
图7
不同批号冠心苏合丸物质组释放曲线（n =6）表3
不同批号冠心苏合丸释放曲线的Weilbull
分布参数（珔
x ʃs ，n =6）批号
T 50/min T d /min 8013353193．38ʃ4．87220．64ʃ8．349011245186．51ʃ8．65202．48ʃ9．169012742
184．38ʃ19．03
199．42ʃ22．47
表4
不同批号冠心苏合丸Weibull 分布参数方差分析
参数变异来源离均差平方和
自由度均方F 值T 50组间265．242132．620．86#组内2304．3615153．62T d
组间1582．322791．163．61#
组内3291．67
15
219．44
注：#P ＜0．05。
5分析与讨论5．1
方法学适用性
冠心苏合丸物质组释放度测定方法学考察结果
显示，中药物质组释放动力学评价理论用于冠心苏合丸的物质组释放度测定，方法可行，能够准确对
物质组进行定量。GC-MS 法测定冠心苏合丸的物质组在0．4089 8．178mg 生药/mL 浓度范围内呈良好的线性关系（r =0．9997），物质组浓度测定的精密度和测试液24h 内的稳定性均较好。
2
18
5．2释放介质的选择
目前释放度/溶出度测定常用的介质主要有水、不同浓度的盐酸溶液、各种浓度的磷酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液［15］。但在测定某些不易溶于上述介质的药物时，可以在介质中加入一定量表面活性剂或有机溶媒，增加溶解度，使样品溶出速率增大。由于GC-MS法主要适用于测定脂溶性物质，而脂溶性物质在水溶性介质中溶解度较小，使药物释放溶出有一定的困难，根据文献［12］的研究结果，本实验采用60%的乙醇溶液作为释放介质，研究冠心苏合丸的释放度。
5．3样品剂量的选择
化学药的溶出度测定，通常每次测定1粒（片），而服用量多为每次1 2粒（片）。对于中药丸剂，一般测定量不超过8丸［16］。但当冠心苏合丸的取样量为1丸时，某些成分的离子强度低，基线噪音较大，影响测定的准确度。因此为提高离子强度，减少实验误差，本实验的测定量选择5丸。
5．4过滤膜的选择及过滤操作时注意事项
取样过滤时，应注意可能存在的损失。因滤膜与药物间有一个吸附饱和过程，即滤膜只有吸附到一定量之后，方能达到饱和、不再吸附［17］。由于试验中的溶出介质是60%乙醇溶液，因此在取样过滤时应选择有机膜，同时每次过滤时应先弃除初滤液7 8mL，取续滤液1 2mL作为检测液，减少滤膜对脂溶性成分的吸附。
5．5溶出装置的密闭性
由于乙醇和所测定的成分大多具有挥发性，为了防止测定过程中这些成分的挥发损失，保证测定结果的准确性，本实验按照文献［13］的方法，即采用以橡皮垫覆盖，密封膜包封溶出杯的方法，并在橡皮垫与桨的接触处涂抹少量蓖麻油。这样能有效防止乙醇、冰片等在溶出过程中的过度挥发损失。
5．6释放度控制标准是中药质量控制的新视角实验中测定不同厂家的或同一厂家不同批号的冠心苏合丸的释放度，按照物质组释放动力学评价方法，发现相同厂家不同批号的冠心苏合丸Weibull
分布参数T
50和T
d
没有显著性差异（P＞0．05），而
不同厂家生产的冠心苏合丸Weibull分布参数T
50
和
T
d
却有显著性差异（P＜0．01）。提示中药制剂质量
控制中，在制订含量控制标准的同时，有必要制订基
于中药物质组释放度的中药复方固体制剂质量控制
标准。
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