2020年12月第22卷第6期December2020,Vol.22,No.6
湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine•9•
电源转换电路
基于SIRT3/p-catenin/PPAR y信号通路探讨茂参益气滴丸急性心肌梗死模型大鼠的作用机制 邢少杰，郑淑霞，卞丹丹，曹兴旺，李旭
(首都医科大学电力教学医院感染性疾病科，北京100073)
摘要：目的基于沉默信息调节因子3(SIRT3邓-连环蛋白(p-catenin)/过氧化物酶体增殖物激活受体丫(PPARy)信号通路探讨英参益气滴丸急性心肌梗死(AMI)模型大鼠的作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阿司匹林组、英参益气滴丸组。建立AMI模型术后48h，各组给予相应的处理。观察各组左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室质量指数(LVMI)、微血管密度(MVD)，检测各组白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、核因子-k B(NF-k B)、SIRT3、p-catenin.
PPARy mRNA的表达水平。结果与正常组相比，模型组LVEF、LVFS显著下降(均P<0.01),LVMI显著增高(P<0.01)；与模型组相比，阿司匹林组、英参益气滴丸组LVEF、LVFS显著增高(均P<0.01),LVMI显著 下降(P<0.01)；与阿司匹林组相比，英参益气滴丸组LVEF、LVFS均显著增高(均P<0.01),LVMI显著下降(P<0.05)。与正常组相比，模型组MVD显著增高(P<0.01)；与模型组相比，阿司匹林组、英参益气滴丸组MVD显著增高(P<0.01)；与阿司匹林组相比，英参益气滴丸组MVD显著增高(P<0.01)。与正常组相比，模
基金项目：北京市自然科学基金资助项目(项目编号:7204303)
作者简介：邢少杰(1964-)，男，首都医科大学电力教学医院感染性疾病科主治医师.研究方向：急诊社区肺炎的分布状况。
通信作者：李旭(1970-)，女，首都医科大学电力教学医院感染性疾病科主任医师，研究方向：脑血管病的,E-mail:********************,
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(稿件修回日期:2020-09-10编辑：任婕)
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型组IL-6、TNF-a 、NF-k B 显著增高（均P<0.01 ）；与模型组相比，阿司匹林组、英参益气滴丸组1L-6、TNF-
a 、NF-k B 显著下降（均P<0.01 ）；与阿司匹林组相比，英参益气滴丸组1L-6、TNF-a, NF-k B 显著下降（均 P<0.01 ）与正常组相比，模型组SIRT3、p-catenin 、PPARymRNA 表达显著升高（均P<0.01 ）；与模型组相比，
阿司匹林组、英参益气滴丸组SIRT3、p-cateninmRNA 显著增高,PPARymRNA 显著下降（均P<0.01 ）。与阿
司匹林组相比，英参益气滴丸组SIRT3、P-cateninmRNA 显著增高,PPARymRNA 显著下降（均P<0.01 ）：结 论英参益气滴丸可能通过调节SIRT3/p-catenin/PPARy<；号通路改善AMI 大鼠心室重构，降低炎症反应，促 进血管新生：
关键词：急性心肌梗死；英参益气滴丸；沉默信息调节因子3 ；卜连环蛋白；过氧化物酶体增殖物激活受体丫
中图分类号：R285.5 文献标识码：A doi ： 10. 3969/j. issn. 1008-987x. 2020. 06. 02
Explore the Mechanism of Qishen Yiqi Dripping Pill in Treatment of Acute My ocardial Infarction in Rats Based on SIRT3/p-catenin/PPARy Signaling Pathway
XING Shaojie, ZHENG Shuxia, BIAN Dandan , CAO Xingwang, LI Xu
(Department of Infectious Diseases , Electric Power Teaching Hospital , Capital Medical University, Beijing 100073 )Abstracts : Objective To investigate Qishen Yiqi Dripping Pill in treatment of acute myocardial infarction ( AMI ) mechanism of action in rats based on the silent information regulator 3 ( SIRT3 )/p-catenin ( P-catenin )/peroxisome proliferator activated receptor y ( PPARy ) signaling pathway. Methods Male SD rats were randomly divided into no
rmal group, model group , aspirin group , and Qishen Yiqi Dripping Pill group. 48h after AMI model establishing , each group received the treatment accordingly. Left ventricular ejection fraction ( LVEF ), left ventricular short axis shortening rate ( LVFS ), left ventricular mass index ( LVMI ), in t erleukin-6 (1L-6 ), tumor necrosis factor-a ( TNF-a ), and the expression levels of rm c lear factor-KB ( NF-
k B ),SIRT3, p-catenin, and PPARy mRNA were compared. Results Compared with normal group , LVEF and LVFS in
model group were significantly decreased ( both P<0.01 ), and LVMI was significantly increased (P<0.01 )；compared with model group, LVEF and LVFS in aspirin group and Qishe n Yiqi Dripping Pill group in c reased significantly ( all P<0.01 ), and LVMI decreased significantly (P<0.01 )；compared with aspirin group, LVEF and LVFS in Qishen Yiqi Dripping Pill group were significantly increased ( all P<0.01 ), and LVMI was significantly decreased (P<0.05 )； compared with normal group, the MVD of model group was significantly higher (P<0.01 )； compared with model group, the MVD of aspirin group and Qishen Yiqi Dripping Pill group were significantly higher (P<0.01 )； compared with aspirin group, the Qishen MVD in Yiqi Dripping Pill group was significantly increased ( all P<0.01 ). Compared with normal gr
oup, IL-6, TNF-a, and NF-k B in model group were significantly increased ( all P<0.01 )； compared with model group, IL-6, TNF in aspirin group and Qishen Yiqi Dripping Pill decreased significantly ( all P<0.01 )； compared with aspirin group , IL-6, TNF-a and NF-k B in Qishenyiqi Dripping Pill group decreased significantly ( all P<0.01 )； compared with normal group, the expression of SIRT3, p-catenin, and PPARy mRNA in model group were significantly increased ( all P<0.01 )； compared with model group, both SIR.T3 and p-catenin mRNA in aspirin group and Qishen Yiqi Dripping Pill group Significantly increased, PPARymRNA decreased significantly ( all P<0.01 )； compared with aspirin group, S1RT3 and P-catenin mRNA in Qishen Yiqi Dripping Pill group were significantly increased, and PPARy mRNA was significantly decreased ( both P<0.01 ). Conclusion Qishen Yiqi Dripping Pill could improve ventricular remodeling in AMI rats by regulating the SIRT3/p-catenin/PPARy signaling pathway, reduce inflammation, and promote angiogenesis.
发泄壶Keywords ： acute myocardial infarction ； Qishen Yiqi Dripping Pill ； SIRT3； p-catenin ；PPARy
急性心肌梗死（Acute myocardial infarction , AMI ）是
冠脉急性缺血缺氧导致心肌坏死，临床表现为持久剧
烈胸骨后疼痛，心肌酶活性增高，可伴有心律失常和心 力衰竭，危及患者的生命安全1 ：近年AMI 的发生率
逐渐增高，心肌梗死后心肌结构和心室大小均发生一 定的变化，心脏功能进行性改变，包括炎症因子过度表
达，神经内分泌系统的变化。临床AMI 的药物包 括阿司匹林、瑞舒伐他汀等山，英参益气滴丸常用于冠
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心病和心力衰竭的，能改善心肌损伤和防止心功能减退，对心肌梗死具有预防作用⑶冃前关于茂参益气滴丸作用于AMI机制的研究较少：本研究通过建立大鼠AMI模型，观察基于沉默信息调节因子3（SIRT3）/卩-连环蛋白（P-catenin）/过氧化物酶体增殖物激活受体Y （PPARy）信号通路罠参益气滴丸AMI的作用机制1材料与方法
1.1动物
清洁级雄性SD大鼠60只（武汉生物制品研究所有限责任公司，生产许可证号:SCXK（鄂）2017-0013），体质量（220±30）g。饲养环境温度为24七，湿度为50%。1.2药物
英参益气滴丸（天津天士力制药集团有限公司，规格：0.5g/袋），用生理盐水配制成270mg/mL的水溶液；阿司匹林肠溶片（拜耳医药保健有限公司，规格：100mg/片），用生理盐水配制成100mg/mL的水溶液’
1.3试剂与仪器
逆转录聚合酶链反应试剂盒（日本TAKARA公司，批号：RR420A）；白细胞介素-6（IL-6）试剂盒（上海晶抗生物工程有限公司，批号：JK5263）；肿瘤坏死因子-a（TNF-a）试剂盒（上海晶抗生物工程有限公司.批号：JK2161）；核因子-k B（NF-k B）试剂盒（上海晶抗生物工程有限公司，批号:JK4526）；血小板-内皮细胞粘附分子31（CD31）一抗（英国Abeam公司，批号:ab212065）0 BS110S型电子分析天平（塞多利斯科学仪器有限公司）；心电图机（上海医用仪器厂,XD7100型）；荧光定量PCR仪（美国ABI公司，SteponePlus型）；脱水机（德国Leica公司,ASP200S型），石蜡包埋机（德国Leica 公司,EG1150型），石蜡切片机（德国Leica公司,PM2235型）；显微镜（日本Olympus公司.BX51型）。
1.4模型制备
参照文献造模>5,10%水合氯醛腹腔麻醉大鼠，连接呼吸机和心电图.消毒左侧胸骨，在左侧第4肋间剪开皮肤，剥离肌肉，并暴露心脏，在左前降支下3mm处结扎，观察左心室前壁部分心肌组织变为白，收缩减弱，将心脏放入胸腔后挤出气体，结扎缝合伤口。心电图n导联显示ST段较术前抬高0.2mV为造模成功术后青霉素肌肉注射。
1.5动物分组与给药方法
大鼠随机分为正常组、模型组、阿司匹林组、英参益气滴丸组，每组15只。造模完成后48h各组给予不同的处理「罠参益气滴丸组给予配制好的罠参益气滴丸溶液按10mL/kg灌胃；阿司匹林组给予阿司匹林溶液按lOmL/kg灌胃；正常组和模型组给予相同体积的生理盐水。均每天1次，连续28d。
1.6观察项目及方法
1.6.1大鼠左心室功能检测：采用多普勒超声诊断仪测量大鼠左心室功能，包括左心室射血分数（LVEF）、左心室短轴缩短率（LVFS）、左心室质量指数（LVMI）。
定时药盒1.6.2大鼠IL-6、TNF-a、NF-k B的水平检测：各组取7只大鼠用10%水合氯醛麻醉，采集腹主动脉血液后，离心取上清，运用酶联免疫吸附法测定IL-6、TNF-a、NF-K B的水平。
1.6.3大鼠微血管密度（MVD）的检测：处死大鼠取出心脏，用生理盐水冲洗后放入多聚甲醛溶液中固
定.过夜，切片，取左心室最大横径冠状面组织，进行血小板内皮细胞黏附分子（CD31）免疫组织化学染：CD31阳性反应为细胞染成棕或者棕黄，主要分布于梗死区域：显微镜下呈现棕或棕黄阳性的血管内皮细胞与周围的微血管分开，视为一个可计数的微血管。参照Weidner等"描述的计数方法，检测CD31阳性表达区微血管数量，取其平均值为微血管密度。
1.6.4大鼠心肌组织SIRT3.p-catenin、PPAR y mRNA的表达检测：采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）法测定SIRT3、卩-catenin、PPAR y mRNA的相对表达量。各组取剩余8只大鼠麻醉后开胸取出心脏，采用生理盐水冲洗后将心肌置于EP管中放置于液氮中保存，按照TransZol 操作方法提取总mRNA，琼脂糖凝胶电泳测定mRNA的完整性，分光光度仪测定mRNA在20mm的纯度。按照RT-PCR法的操作步骤，反转录后进行PCR扩增，取PCR产物于琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统中进行扫描，测定目的基因的吸光度值，并对结果进行分析' 1.7统计学方法
应用SPSS20.0软件进行统计学分析，计量数据以均数士标准差（x±$）表示，多组计量数据比较用方差分析.两两比较采用LSD法,P<0.05认为差异显著。
2结果
2.1各组左心室功能比较
与正常组相比，模型组LVEF、LVFS显著下降（均P<0.01）,LVMI显著增高（P<0.01）；与模型组相比，阿
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• 12 •司匹林组、罠参益气滴丸组LVEF 、LVFS 显著增高（均
P<0.01 ）.LVM1显著下降（P<0.01 ）；与阿司匹林组相比，
罠参益气滴丸组LVEF 、LVFS 显著增高（均P<0.01 ）,
LVMI 显著下降（P<0.05）。见表1
表1各组左心室功能的比较（X 土
组别n LVEF( %)LVFS( %)LVMK g/m 2)
正常组1573.12±1.23
43.67±1.05
0.13±0.00
模型组
1556.58±1.07**26.13±0.86**
0.24±0.01"阿司匹林组
1559.65±1.2沪30.76±1.18^
0」6±0.0产
茂参益气滴丸组1563.65±0.9 严
35.37±0.84^#*0.15±0.0严与正常组比较.**P<0.01 ；与模型组比较.AA/X0.01 ；与阿司叫林组
比较,#P<0.05,##F<0.01.
2.2 各组 MVD,IL-6、TNF-a 、NF-k B 的比较
与正常组相比，模型组MVD 显著增高（P<0.01 ）； 与模型组相比，阿司匹林组、罠参益气滴丸组MVD 显 著增高（P<0.01 ）；与阿司匹林组相比，罠参益气滴丸组
MVD 显著增高（P<0.01 ）。与正常组相比，模型组IL-6、
TNF-a 、NF-k B 显著增高（均P<0.01 ）；与模型组相比,
阿司匹林组、罠参益气滴丸组IL-6 .TNF-a,NF-k B 显著 下降（均P<0.01）；与阿司匹林组相比，罠参益气滴丸
组 IL-6、TNF-a 、NF-KB 显著下降（均P<0.01 ）。见表2。
表 2 各组 M VD,IL-6、TNF v 、
NF-k B 比较(x ±s)
组别n MVD IL-6( ng/L )
TNF-a( ng/L )NF-k B( ng/L )正常组7 5.37±0.3674.17±8.32101.34±9.25673.13±89.82模型组
7
11.29±0.51**
120.75±15.78**
212.84±10.46**
90&26± 113.47"
阿司匹林组7
13.34±0.47皿112.51±15.63丛190.15±5.63皿
872.51±97.26M
英参益气滴丸组
716.72±0.95^#,
101.32± 12.39心*
164.82±9.97^801.62±82.15^
与正常组比较.**P<0.01；与模型组比较.AAP<0.01；与阿同匹林组比较.##P<0.01.
2.3 各组 SIRT3、p-catenin, PPARymRNA 相对表达量
的比较
与正常组相比，模型组SIRT3、卩-catenin 、PPARy
mRNA 表达显著升高（均P<0.01）；与模型组相比，阿
司匹林组、英参益气滴丸组SIRT3 .p-catenin mRNA 显著
增高，PPARy mRNA 显著下降（均P<0.01 ）；与阿司匹 林组相比，英参益气滴丸组SIRT3、卩-catenin mRNA 显著 增高,PPARy mRNA 显著下降（均P<0.01 ）。见表3。
表3各组SIRT3、p-catenin 、PPARy mRNA 相对表达量的比较（丘士s ）
组别n SIRT3
P-catenin PPAR y 正常组
80.39±0.02
0.18±0.040.45±0.08
模型组80.43±0.03**
0.39±0.07**
0.97±0.09**
阿司匹林组
80.61 ±0.022
0.78±0.06^
0.60±0.05^
罠参益气滴丸组
8
0.83±0.0 严0.84±0.06沖
烟雾净化0.52±0.1严
与正常组比较.**P<0.01；与模型组比较.AA/MLOl ；与阿司匹林组 相比.##F<0.01「
3讨论
AMI 是在冠脉硬化的基础上斑块破裂、出血和血
栓形成，进而造成动脉闭塞、供血中断使心肌坏死。AM1
梗死区域心室壁拉长变薄.非梗死区域的心室壁代偿 性增厚，纤维化，导致心室重构。持久性心室重构是导
致AMI 心力衰竭的主要原因之一，因此预防心室重构
是防止心功能恶化的关键MVD 是反映血管新生的
指标，代表新生血管数量和血液循环的情况。CD31是 血管内皮细胞的标志物，CD31阳性细胞着部位位于
血管内皮细胞的细胞膜和细胞质，阳性着的血管反 映MVD 的水平"I 炎性因子IL-6、TNF-a 、NF-k
B 水平 增加导致心肌肥大，心脏结构改变，心肌细胞凋亡。因
此抑制炎性因子的释放亦是AMI 的重要途径⑷。 本研究发现，阿司匹林组、英参益气滴丸组LVEF.LVFS
显著增高（均P<0.01 ）,LVMI 显著下降（P<0.01 ），且与阿 司匹林组相比，英参益气滴丸组的作用更为明显
（P<0.01 /<0.05 ）。阿司匹林组、罠参益气滴丸组MVD
显著增高（P<0.01 ）. 1L-6、TNF-a 、NF-k B 水平显著下降
（均P<0.01 ），且与阿司匹林组相比，罠参益气滴丸组的 作用更为明显（均P<0.01）。表明英参益气滴丸在促进
AMI 大鼠微血管的生成，降低血清中炎症因子的水平，
改善心室重构方面具有较好的作用。
SIRT3是Sirtuins 家族成员之一，与心血管疾病关系
密切。研究发现,SIRT3基因敲除后血管平滑肌增殖加
快，导致动脉粥样硬化的发生。亦有研究表明，SIRT3 与心肌肥厚和心肌梗死关系密切［91o P-catenin 是促进 心肌成纤维细胞转化101 PPAR y 是核受体家族之一，参
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与糖脂代谢、炎症反应、脂肪分化和细胞增殖；抑制血管新生，改善心室重构，与心血管疾病和高血压有关PPARy降低心肌中NF-k B预防心肌纤维化。S1RT3、p-catenin之间相互调控，SIRT3表达增加时卩-catenin表达下降.SIRT3表达下降时p-catenin表达增加：叫PPARy 激活时SIRT3表达下降，抑制时S【RT3表达增高°S1RT3通过卩-catenin、PPAR y抑制成纤维细胞的转分化"I阿司匹林组、茂参益气滴丸组SIRT3、卩-catenin mRN A显著增高,PPARy mRNA显著下降(均P<0.01)，且以英参益气滴丸组为优(均P<0.01)。表明罠参益气滴丸明显增加AMI大鼠S1RT3.p-catenin的表达而下调PPAR y。
AMI在中医学上属于“胸痹”范畴。多见于中老年，四季均可发病，发病与寒邪内侵、饮食不当、情志失调有关“4)。素体阳虚，阴寒邪气侵袭，过食肥甘生冷，忧思伤脾，脾虚气结导致气滞血瘀“。罠参益
气滴丸中丹参活血化瘀，黄英补中益气，降香行气活血，三七止血化瘀。药理学研究表明，丹参抑制心肌中成纤维细胞的增殖，防止心肌肥厚黄罠减轻AMI左心室重构，对胶原损伤起到一定的保护作用"：。降香增加冠脉血流量，增加心率。三七降低血液黏度，抑制血栓形成.抗自由基，促进细胞在再生，抑制心肌纤维化。以往研究发现，罠参益气滴丸降低心肌氧耗量，增加心输出量，防止心肌纤维化的形成⑷。本研究表明，与阿司匹林相比，罠参益气滴丸明显提高左心室功能和结构，促进微血管的生成，降低血清中炎性因子的水平，可能与调节SIRT3/p-catenin/PPARy信号通路有关。
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(稿件修回日期:2020-10-07编辑：林飞)
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