原理
电梯运行
检测平台
过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中,能将过氧化氢分解为氧和水,可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。用氧电极法测量放氧速度,方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。 仪器药品
氧电极仪记录仪
50mmol/L磷酸缓冲液,pH7.0(奥沙利见附表2)。
50mmol/L过氧化氢溶液:取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。
标准过氧化氢酶溶液:称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg),溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中,使酶浓度为10U/ml。
仪器的标定
按实验88步骤进行仪器的标定,以求得记录纸上每小格相当的含氧量。
绘制酶活性标准曲线
在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液,开启电磁搅拌器搅动10分钟,插入电极,吸去溢出在电极外面的溶液,调节移位旋钮,使记录笔位于满刻度的10─20%左右,使记录纸走动,1─2分钟后温度达到平衡,记录笔画出直线。
用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶,立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。
根据上述同样步骤,注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(pvc文件袋例如浓度为20、30、40、50U/ml等),记录氧释放曲线。
样品测定
在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟,插上电极,待记录为一直线后,注入10μl合适浓度的待测酶液样品,立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。
根据样品的放氧曲线,计算得到每分钟的放氧量,在标准曲线上查得酶活性大小。
如果没有标准的过氧化氢酶,不能计算酶活性单位时,也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。
颜反应、染类
试剂实验名称发生颜变化的物质或结构颜变化或现象斐林试剂检测生物组织中的还原糖还原糖蓝→棕→砖红双缩脲试剂检测生物组织中的蛋白质蛋白质蓝→紫苏丹Ⅲ/Ⅳ检测生物组织中的脂肪脂肪橘黄/红碘液检测生物组织中的淀粉淀粉蓝甲基绿观察DNA和RNA在细胞中的分布DNA绿吡罗红观察DNA和RNA在细胞中的分布RNA红溴麝香草酚蓝水溶液探究酵母菌的细胞呼吸方式CO2蓝→绿→黄重铬酸钾溶液探究酵母菌的细胞呼吸方式酒精橙→灰绿龙胆紫(醋酸洋红溶液)观察根尖分生组织细胞有丝分裂染体深健那绿(活性染料)用高倍显微镜观察线粒体线粒体蓝绿台盼蓝 死细胞蓝N-1-萘基乙二胺盐酸盐泡菜制作中测定亚硝酸盐的含量亚硝酸盐(经酸化、重氮化)玫瑰红酚红分离土壤中分解尿素的细菌的检测氨红刚果红分解纤维素的微生物的分离纤维素红二苯胺DNA的粗提取与鉴定DNA(水浴加热)变蓝 冲洗、漂洗类
实验名称冲洗、漂洗试剂作用检测生物组织中的脂肪体积分数95%的酒精洗去苏丹Ⅲ/Ⅳ的浮观察DNA和RNA在细胞中的分布蒸馏水洗去盐酸,利于染观察根尖分生组织细胞有丝分裂清水洗去解离液,防止过度解离低温诱导植物染体数目变化体积分数95%的酒精洗去卡诺氏液 使用酒精的实验
实验名称浓度作用检测生物组织中的脂肪体积分数50%的酒精洗去浮绿叶中素的提取和分离无水乙醇溶解并提取绿叶中的素观察根尖分生组织细胞有丝分裂体积分数95%的酒精与15%的盐酸按1:1比例制成解离液,使组织中的细胞相互分离低温诱导植物染体数目变化体积分数95%的酒精与15%的盐酸按1气门绞刀:1比例制成解离液,使组织中的细胞相互分离土壤中小动物类丰富度的研究体积分数70%的酒精保存收集的小动物DNA粗提取与鉴定体积分数95%的酒精(冷却)使DNA析出,与蛋白质分离 使用盐酸的实验
实验名称浓度作用观察DNA和RNA在细胞中的分布8%盐酸改变细胞膜的通透性,加速染剂进入细胞;使染质中DNA与蛋白质分离,利于DNA与染剂的结合影响酶活性的条件5%盐酸设定酸性条件观察根尖分生组织细胞有丝分裂15%盐酸与体积分数为95%的酒精按1:1定位板比例制成解离液,使组织中的细胞相互分离低温诱导植物染体数目变化15%盐酸
与体积分数为95%的酒精按1:1比例制成解离液,使组织中的细胞相互分离沃泰默、斯他林和贝利斯实验
刺激小肠腔引起分泌促胰液素,发现人体中第一种激素:促胰液素 使用NaOH溶液的实验
实验名称浓度作用检测生物组织中的还原糖0.1g/mlNaOH形成Cu(OH)2检测生物组织中的蛋白质0.1g/mlNaOH创造碱性环境影响酶活性的条件5%NaOH设定碱性条件探究酵母菌的细胞呼吸方式10%NaOH吸收空气中的CO2,排除对实验结果的影响 使用 测量空间NaCl溶液的实验