水稻的GUS 染方法

我们用于水稻的GUS 染方法：

取新鲜的材料（取根时要从近种子端基部完整取下，无菌蒸馏水冲洗干净，吸去表面水分）置于1.5 ml的离心管中，加入GUS染液（将材料全部浸在其中），染液组成为：100 mM磷酸钠缓冲液（pH 7.0），10 mM EDTA （难溶，要查促溶的方法），Triton X-100 0.1%（v/v氧气袋），亚铁（pataxium ferrocyamide，分子量电玉粉422.39g/mol）0.5 mM，铁（pataxium ferricyamide,分子量329.25g/mol）0.5 mM （这些是终浓度，要配浓度大些的母液），甲醇（methanol）溶液20%微孔抛光镜面加工（v/v），X-Glu 1 mM (用二甲基亚砜配成20倍母液，即10 mg X-Glu加0.96ml, -20℃保存)。37 ℃温浴铜包铝漆包线12-36 h （或室温30-35℃条件下24 h以上），期间摇晃几次使之染均匀，直到蓝不再加深为止。 20kv高压直流电源>挤压成型然后取出材料放在指形管用70%酒精脱3次，再用6% 次氯酸钠脱8-10分钟（这一步可以不用），然后再置入含70% 酒精的青霉素小瓶中煮沸2次（煮沸1次后，降到室温，然后再煮沸1次）, 用灭菌水（如放时间较长，则用70%酒精）置于4℃冰箱保存，体式显微镜观察拍照。（若染材料为叶片，则在煮沸时可加入90% 的酒精，煮沸，直到叶绿素全部降解，即叶片无绿为止）。

本文发布于:2024-09-20 17:30:23，感谢您对本站的认可！

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