第5()卷第10期2020年10月
新疆医学
XINJIANG MEDICAL JO U R N A L
uvlo电路
Vol.50 N o.10
水牌制作Octoher.2020
.论著.
慢性牙周炎患者外周血IL- 17、IFN- 7及Th17细胞的水平分析 苏旭\向文静2，王紫萤2，陈晓涛1
U新疆维吾尔自治区人民医院口腔科，乌鲁木齐83000丨；：新纒医科大学口腔医学院，乌鲁木齐830002)
摘要：目的探讨慢性牙周炎患者外周血丨L-17、丨F N-7及T h l7细胞的分布水平方法收集2017年6月至20丨9年12月在新疆维吾尔自治区人民医院口腔科就诊的慢性牙周炎患者51例，同时纳入健康对照51例，
通过流式细胞技术，检测慢性牙周炎和牙周健康者外周血中Thl ,T h l7及I L-17、l F N-7及T h l7的分布水平。结果慢性牙周炎患者外周血I L-17、》^\-'/及1(1117细胞与健康组差异无统计学意义。比-17、》;'1\-7及1'1117细胞表达与11117细胞呈正相关关系（户<0.01).：结论I L-17、I F N-7及T h l7细胞与牙周炎关系还有待进一步明确-
关键词：慢性牙周炎；血清；IL-17、IF N-7及Th 17
中图分类号:R781.4 文献标识码：A 文章编号：1001—5183(2020)10—1019•—03
Analysis of the IL -17, IFN-7 and Thl7 cells levels in patients with chronic periodontitis
SU Xu1.XIANG Wenjing2,WANG Ziying2,CHEN Xiaotao1
(1 Department of Stomatology, People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi, 830001. China;
2Department of Stomatology. Xinjiang Medical University, Urumqi, 830002, China )
Abstract: Objective To explore the distributed level of IL -17, IFN -y and T h l7 cells in peripheral blood of patients with c hronic periodontitis. Methods The frequency of peripheral IL -17, IFN -7and T
h l7 cells in peripheral blood of patients with chronic periodontitis were analyzed by flow cytometry. Results The IL -17, IFN -7and T h l7 cells in peripheral blood between the chronic periodontitis gn>up and the healthy group showed no significant difference. The expression of IL -17. IFN -7and T h l7 cells was synrhronically associated with T h l7 cells (P<0.01 ). Conclusions Further investigation is urgently needed for the relationship between IL - 17, IFN-7and Thl 7 cells and periodontitis.
Key words:Chronic Periodontitis; Serum: IL - 17, IFN-7and T h l7
牙周炎是菌斑生物膜为始动因素的慢性感染 性疾病，以牙周支持组织慢性炎症、牙周附着丧失 和牙槽骨破坏为主要表现。牙周致病菌及其产物可 使口腔局部牙周组织固有性和适应性免疫系统发 生免疫反应I M。但牙周致病菌及介导的机体免疫反 应造成牙周组织破坏程度差异的机制尚不明确。CD4+T细胞作为效应T细胞的重要成员之一，参与 细胞免疫应答。近年更多证据关注新型辅助性T细 胞17型(Thelper 17，Thl7)，在炎症反应、宿主免疫 应答及抗感染反应过程中发挥的重要作用|21。近年 来Thl7因其分泌因子不同存在至少两种表型受到关注。IL-6，IL-l p和IL-23条件下，分化出经典 活化Th丨7细胞，单一表达分泌1L- 17。TGF- p1和 IL-6存在时，诱导出同时分泌IFN-7和1L- 17的选择性活化IL-17、IFN-7及Thl7细胞（Thl7双 阳细胞)131。两种表型的Thl7细胞在因子表达、效 应功能和致病性方面不同。本研究旨在通过流式细 胞技术，分析慢性牙周炎患者外周血中的IL-17、IFN -7及Thl7分布差异及与淋巴细胞亚的关系。1.资料与方法 nidd1.1研究对象
根据牙周病分类法141收集2017年6月至2019
基金项目：新璐维吾尔自治区自然科学基金(项目编号:2016D01C100),
作者简介：苏旭，男，在读硕士，主治医师，研究方向：牙周病病因学~
通信作者：陈晓涛，女，博士，主任医师，研究方向：牙周病病因学，E-mail: :
1020新疆医学第50卷
年12月在新疆维吾尔自治区人民医院口腔科就诊 的慢性牙周炎患者51例，病程1到10余年不等。男性30例，女性21例，年龄47.4±10.2岁。侵袭 性牙周炎、类风湿关节炎、糖尿病、合并肝肾疾病全身系统性疾病者，孕妇和哺乳期患者，半年内有 牙周史或3个月之内有服用抗生素、激素类 药物，吸烟者均不纳人研究。另外，纳入51例牙周 健康者作为对照组，均是就诊口腔科的非牙周疾 患或健康志愿者，所有位点的牙周探诊深度均小 于3 mm，无临床附着丧失，X线检查无牙槽骨的吸 收。符合无免疫性疾病或系统性疾病，无病毒、细菌 等感染或肿瘤等，否认吸烟。所有研究对象均被告 知研究目的，自愿签署知情同意书（伦理批件编号 2016029)。
1.2主要试剂、仪器及设备
CD3-FITC抗人单克隆抗体、CD4-P E抗人单 克隆抗体、IL- 7- Alexaflour647、IL- 17 - PerCP5.5 抗人单克隆抗体、4X核固定液、10X破细胞膜剂、10X破核膜剂、细胞膜固定液缓冲液购自美国Biolegend公司；佛波酯（PMA)、离子霉素（10)、蛋 白转运抑制剂（BFA)购自美国Biogems公司；淋巴 细胞分离液购自天津华科生物有限公司。美国BD 公司FACS Canto T M II流式细胞仪检测外周血Th17细胞,HEAL FORCE超净工作台（上海力新公 司）、相差倒置显微镜（日本Olympus公司）。
1.3研究方法
清晨空腹采集受检者外周静脉抗凝血3 mL，离心取血浆，-80T保存待测。经Ficoll密度梯度 离心分离外周血单个核细胞（peripheral W ood mononuclear cell,PBMC)。将 PBMC转移至 24 孔板 中，佛波酯(PMA)和离子霉素刺激1h后，加入蛋白 转运抑制剂（BFA),371培养箱中培养4 h活化，然 后标记CD3、CD4抗体，破膜孵育后标记IFN-飞、IL- 17A抗体，测定Thl7双阳细胞百分比。同时均 设置同型对照。超导量子比特芯片
1.4统计学处理方法
用SPSS22.0进行分析，两组间比较采用Knw/ca/-『oifc //检验。各组间线性相关性分析采 用Speorma/?相关分析，P<0.05认为差异有统计学意义。
2.结果
2.1外周血Thl7双阳细胞來度比较
流式细胞术检测外周血慢性牙周炎患者和健 康者Thl7双阳细胞的表达，典型流式细胞图见图1所示。结果表明慢性牙周炎患者外周血中Thl7双 阳细胞检测水平（0.236 ±0.238)%，健康对照组 (0.192 ± 0•136)%，两组差异无统计学意义(P> 0.05)〇
Sample
图1外周血Th17双阳细胞的典型流式图
表1牙周炎与健康组外周血淋巴细胞分布水平
例数
Thl
(%)
Thl7
(%)
IL-17M F N-7*
(%)
慢性牙周炎组5114.756 ± 8.5410.933 ± 0.6620.236 ± 0.238健康组5117.112 ±8.812 1.069 ±0.7680.192 ±0.136 X2 2.0900.481 1.522
P值0.1480.4880.217
2.2相关性分析
对慢性牙周炎组Thl7双阳细胞表达与T h l、Th17细胞进行线性相关性分析，仅显示慢性牙周 炎患者Thl7双阳细胞表达与Thl7细胞水平呈正 相关关系(尸<0.01)(图2)。
图2外周血Th1、Th17与Th17双阳细胞的相关关系
A:Th1与T M7双阳细胞相关性r=0.188
红薯清洗机B:Th17与Th17双阳细胞相关性r
=0.549
第10期苏旭，等；慢性牙周炎患者外周血IL-17+IFN-7+Thl7细胞的水平分析1021
3讨论
Thl7细胞及其功能已被广泛接受，Thl7细胞 能分泌产生多种细胞因子:IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-6、结合C C型趋化因子6(CCR6)和肿 瘤坏死因子《(TNF-a)等，并参与机体自身免疫疾 病过程，发挥特定功能|51。但已有研究发现Thl7细 胞存在两种不同的亚型：单一表达分泌IL-17的 经典活化Thl7细胞(IL-17、Thl7细胞），以及同时 分泌IFN-7和IL- 17的选择性活化Thl7细胞 (IFN-7、IL-17 及 Th17 cells，即Th17 双阳细胞）[6]。在人及小鼠体内均检测到Thl7/T h l细胞，但不能 明确其细胞来源[7]。这两种不同的Thl7细胞的分 化方向可能与局部细胞因子微环境有关。这两种 Thl7细胞的前体细胞在接受特定细胞因子信号后，经胞内信号传导、核因子调控靶基因转录及表 达而最终决定其表型。尽管实验证明人体内分离出 的未经抗原刺激分化的初始CD4+T细胞或记忆性 CD4+T细胞在经过诱导分化后均能产生这两种不 同表型Thl7细胞，且分化所得两者的比例相当，但 是目前的研究仍然不能确定Thl7双阳细胞的确切 来源。Suryani等W在变态反应性脑脊髓炎模型实验 中指出Thl7双阳细胞源自T h l细胞分化，通过分 泌IL-17发挥功能；而Lexberg等M发现无论是ThO 经体外诱导分化的T h l细胞，或直接从体内分离所 得的T h l细胞均无法产生可分泌IL-17的细胞，因此不认为Thl7双阳细胞源于T h l细胞的观点。与T h l,Thl7细胞相比，该细胞在参与炎症反应的 过程中具备独特的特点。由于其同时表达IL-17, IFN-7及T h l与Thl7细胞趋化因子受体，可以在 CXCR3配体CXCL9、10、11的作用下引导进人炎症组织，同时更有效促进上皮细胞表达炎症介质 本实验结果表明在慢性牙周炎患者体内，IFN-7、IL-17及双阳的Thl7细胞的百分比和被检 出率均较正常对照有升高的趋势，进行统计学检验 确未发现差异有意义，并不能提示该细胞与牙周 炎有关。分析原因：（1)双阳性细胞在外周血检出比
例相对较低，其发生显著变化与牙周炎病变程度和 病变严重程度密切相关。可能纳人患者的样本代表 性欠佳;（2)局部细胞因子微环境影响双阳细胞的 分化。有学者提出T G F-p促进人Thl7细胞分化
，但NaP〇litani[13]等发现抗TGF-p抗体作用Thl7 细胞后，分化未受影响，认为TGF-(3不参与人 Thl7细胞分化，甚至有抑制分化的作用％。后续的 研究中，增加临床慢性牙周炎的组织标本，通过流 式检测技术，结合ELESA方法，将患者和健康者双 阳细胞的检出比例，同时与个体牙周组织局部微环 境中的细胞因子IL-l(3、IL-6、IL-23及TGF-卩水 平进行相关性分析，将进一步明确双阳细胞是否参 与牙周炎发病过程。
参考文献
[I] 尹顺，张绍伟.牙周炎与慢性肝病相关性的研究进展[J】.新疆医学,2019,49
(02): 188-192•(增加文献）
[21Jafri S, Ormiston M L. Immune regulation of systemic hypiert-ension, pulmonary arterial hypertension, and preeclampsia ： shared disease mechanisms and transla- tio-nal opportunities [J]. Am J Phy-siol Regul Integr Comp Phsiol, 2017,313
(6): R693-R705(替换文献）
[3]Lee Y, Awasthi A, Yosef N, et aL Induction and molecular signature of pathogenic
TH17 cells[J]. Nature immunology, 2012,13:991-999
[4】Armitage GC. Periodontal diagnosis and classification of periodontaldiseases. Pe- riodontology 2000,2004,34 ： 9ca3780
[5JNALBANT A, ESKIER D. Genes associated with T helper 17 cell differentiation and function [J]. Front Biosci (Elite E d), 2016,8:427-435.
[6] Peters A, Lee Y, Kuchroo VK. TTie many faces of Thl 7 cells [J]. Current opinion
in immunology, 2011,23： 702-706
[7] Acosta-Rodriguez EV, Rivino L, Geginat J, Jarr〇9say D, Gattomo M, et al.
Surface phenotype and antigenic specificity of human interleukin 17-producing T helper memory cells[J]. Nature immunology, 2007,8 ： 639-646
[8] Suryani S, Suttonl. An interferon-gamma-producing Thl subset is the major
source of IL-17 inexperimental autoimmune encephalitis [J]. Journal of neuroim- munology, 2007,183： 96-103
[9] Lexberg MH, Taubner A, Albrecht I, et al. IFN-gamma and IL-12 synergize to
convert in vivo generated Thl7 into Thl /Thl7cells [J]. European journal of immunology, 2010,40:3017-3027
[10] Boniface K, Blumenschein WM, Brovont-Porth K, et al. Human T h l7 cells
comprise heterogeneous subsets including IFN-gamma-producing cells with distinct properties from the Th 1lineage{J]. J Immunol, 2010,185： 679-687
[II) Janke M, Peine M, Nass A, et al. In-vitro-induced Thl7 cells fail to induce inflammation in vivo and show an impaired migration into inflamed sites.[J]. European journal of immunology, 2010,40： 1089-1098
[12] Lee G J I J 0M S. The Balance of Thl 7 versus Treg Cells in Autoimmunity [J].
International journal of molecular sciences, 2018,19( 3 ).
[13] Acosta-Rodriguez E V, Napolitani G, Lanzavecchia A, et al. Interleukins lbeta
and 6 but not transforming growth factor-beta are essential for the differentiation of interleukin 17-producing human T helper cells [J]. Nat Immunol, 2007,8
(9)：942~949.
[14] Santarlasci V, Maggi L, Capone M, et al. TGF-beta indirectly favors the devel
opment of human Thl7 cells by inhibiting Th 1cells[J]. Eur J Immunol, 2009,39
(1):207~215.
[收稿日期:2020-05-26]
(本文编辑：郭星延）
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