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1、 感触感染态细胞的概念
重组DNA份子体外构建完成后必须导入特定的宿主（受体细胞）使之无性繁衍并高效表达外源基因或直接改动其遗传性状，这个导入进程及操纵统称为重组DNA份子的转化.在原核生物中，转化是一个较普遍的现象，在细胞间转化是否产生，一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化进程中的亲缘关系，另一方面还与受体菌是否处于一种感触感染状态有着很大的关系. 所谓的感触感染态：即指受体或宿主最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态，是由受体菌的遗传性状所决定的同时也受菌龄、外界情况因子的影响.cAMP可以使感触感染态水平提高一万倍，而Ca2+也可大大促进转化的作用.细胞的感触感染态一般出现在对数生长期新鲜幼嫩的细胞是制备感触感染态细胞和进行成功转化的关头.制备出的感触感染态细胞暂时不必时可参加占总体积15%的无菌甘油或-70℃保管有效期6个月 . 2、 转化的概念及原理
在基因克隆技巧中，转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内使之
取得新的遗传特性的一种办法.它是微生物遗传、份子遗传、基因工程等研究领域的根本实验技巧之一.受体细胞经过一些特殊办法 ，如电击法、undefinedundefinedundefinedundefinedundefined等化学试剂法处理后，使细胞膜的通透性产生变更，成为能容许外源DNA份子通过的感触感染态细胞.进入细胞的DNA份子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状.大肠杆菌的转化经常使用化学法CaCl2法该法最先是由Cohen于1972年发明的.其原理是细菌处于0℃CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混杂物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞概略，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收DNA复合物，在丰厚培养基上生长数小时后，球状细胞恢复并割裂增值，被转化的细菌中重组子中基因得到表达，在选择性培养基平板上可选出所需的转化子.Ca2+处理的感触感染态细胞其转化率一般能达到5×106~2×107转化子/ug质粒DNA可以满足一般的基因克隆试验.如在Ca2+的根本上联合其它的二价金属离子如Mn2+、Co2+、DMSO或复原剂等物质处理细菌，则可使转化率提高100~1000倍.化学法复杂、快速、稳定、重复性好，菌株适用规模广，感触感染态细菌可以在-70℃保管，因此被普遍用于外源基因的转化.除化学法转化细菌外，还有电击转化法，电击法不需要预先诱导细菌的感触感染态，依靠短暂的电击，促使DNA进入细菌，转化率最高能达到109~1010转化子/ug闭环DNA.因操纵简洁愈来愈为人们所接受. ic卡智能门锁
3、 感触感染态细胞制备及转化中的影响因素
⑴、细胞的生长状态和密度
ai1986网址导航最好从-70℃或-20℃甘油保管的菌种中直接转接用于制备感触感染态细胞的菌液.不要用已经过量次转接及贮存在4℃的培养菌液.细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107
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个左右为佳.即应用对数期或对数生长前期的细菌,可通过测定培养液的OD600控制.对TG1菌株OD600为0.5时,细胞密度在5×107个/ml左右.应注意OD600值与细胞数之间的关系随菌株的不合而不合.密度太高或缺乏均会使转化率下降.此外受体细胞一般应是限制-修饰系统缺陷的突变株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株.并且受体细胞还应与所转化的载体性质相匹配.
⑵、质粒DNA的质量和浓度
用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态的转化率与外源DNA的浓度在一定规模内成正比但当参加的外源DNA的量过量或体积过大时则会使转化率下降.一般地，DNA溶液的体积不该超出感触感染态细胞体积的5%1ng的cccDNA便可使50ul的感触感染态细胞达到饱和.对于
以质粒为载体的重组份子而言，份子量大的转化效率低，实验证明大于30kb的重组质粒将很难进行转化.此外重组DNA份子的构型与转化效率也密切相关，环状重组质粒的转化率较份子量相同的线性重组质粒高10~100倍，因此重组DNA大都组成环状双螺旋份子.
⑶、试剂的质量
线圈电磁铁所用的CaCl2等试剂均需是最高纯度的，并用最纯净的水配制，最好分装保管于4℃.
⑷、避免杂菌和杂DNA的污染
起重安装整个操纵进程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离心管、移液头等最好是新的，并经高压灭菌处理.所有的试剂都要灭菌，且注意避免被其它试剂、DNA酶或杂DNA所污染不然均会影响转化效率或杂DNA的转入.
⑸、整个操纵均需在冰上进行 不克不及离开冰浴 不然细胞转化率将会下降.
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