一种用于测定糖类抗原242的试剂盒及其应用的制作方法

1.本发明涉及免疫检测试剂盒技术领域，具体涉及一种用于测定糖类抗原242的试剂盒及其应用。

背景技术：

2.ca242是一种唾液酸化的糖类抗原，与ca19-9共表达于一种相同的粘蛋白上，在健康人和良性疾病血清中含量很低，它是存在于多种恶性肿瘤细胞中的粘蛋白类型的糖蛋白。对于消化道肿瘤有比较好的预示作用，相比于其他肿瘤标志物，ca242在消化道癌具有更高的特异性，包括直肠癌、胰腺癌、胃癌等。糖类抗原242通常还需要与其他的肿瘤标志物，例如癌胚抗原一起进行辅助诊断。如果这两种肿瘤标志物都明显的升高，要进一步进行影像学检查以寻是否有恶性肿瘤。
3.现有的糖类抗原242免疫测定试剂盒只能用于血清检测样本，用于检测血浆样本检测时，干扰大，无法实现检测血浆样本。

技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，解决现有糖类抗原242免疫测定试剂盒无法实现检测血浆样本的问题。
5.本发明通过下述技术方案实现：
6.一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，包括校准品、羊单抗包被的磁珠、分析缓冲液和酶工作液，所述羊单抗包被的磁珠上标记有生物素；所述分析缓冲液中添加有猪血清和小牛血清。
7.本发明中使用的分析缓冲液含有猪血清和小牛血清，分析缓冲液中的猪血清和小牛血清能很好的抑制血浆中的干扰物质，使测定糖类抗原242试剂盒能够用于血浆中糖类抗原242检测，改善了临床中仅适用血清情况；同时，分析缓冲液中的猪血清和小牛血清也可降低血清中的干扰情况，使得试剂盒测值与比对试剂盒的测值偏差更小。
8.进一步地，分析缓冲液中，猪血清的浓度大于50ml/l，小牛血清的浓度大于50ml/l。
9.进一步地，分析缓冲液中，猪血清的浓度为50-200ml/l，小牛血清的浓度为50-200ml/l。
10.进一步地，分析缓冲液中，猪血清的浓度为100ml/l，小牛血清的浓度为100ml/l。
11.进一步地，分析缓冲液中包括以下组分：
12.tris、nacl、盐酸、bsa、猪血清、小牛血清、pc-950和tween-20。
13.进一步地，分析缓冲液的制备过程包括以下步骤：
14.a、tris和nacl于容器内加入纯化水溶解；
15.b、向步骤a中所得到的溶液中加入盐酸，调节ph值到7.35-7.45；
16.c、向步骤b中所得到的溶液中加入bsa、猪血清、小牛血清、pc-950和tween-20；
17.d、用纯化水定容，获得分析缓冲液。
18.进一步地，羊单抗包被的磁珠为biotin-糖类抗原242单克隆抗体磁珠包被。
19.进一步地，酶工作液为含蛋白的缓冲液和酶标抗体的混合溶液。
20.上述试剂盒在测定血浆中糖类抗原242中的应用。
21.上述试剂盒在测定血清中糖类抗原242中的应用。
22.本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
23.1、本发明通过在分析缓冲液中添加一定浓度的猪血清和小牛血清，能很好的抑制血浆中的干扰物质，解决了现有糖类抗原242免疫测定试剂盒无法实现检测血浆样本的问题；并且，分析缓冲液中的猪血清和小牛血清也可降低血清中的干扰情况，使得试剂盒测值与比对试剂盒的测值偏差更小。
24.2、本发明通过在分析缓冲液中添加有猪血清和小牛血清，能提高灵敏度及特异性。
具体实施方式
25.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
26.实施例1：
27.一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，包括：
28.糖类抗原242校准品；
29.羊单抗包被的磁珠，羊单抗包被的磁珠为biotin-糖类抗原242单克隆抗体磁珠包被，羊单抗包被的磁珠上标记有生物素；
30.由12.11g/l tris、9.00g/l nacl、约5.5ml/l浓hcl、20g/l蔗糖、10.00g/l bsa、1ml/l pc-950、0.5ml/l tween-20、10μg/ml的羊单抗人242单克隆抗体1，0.2mg/ml链亲和素磁珠和50ul/mg磁珠封闭液组成。
31.分析缓冲液，由以下组分组成：
32.tris、nacl、盐酸、bsa、猪血清、小牛血清、pc-950和tween-20；
33.酶工作液，含蛋白的缓冲液和酶标抗体的混合溶液，由12.11g/l tris、9.00g/l nacl、约5.5ml/l浓hcl，10.00g/l海藻糖、0.05g/l果绿素、5.00g/l bsa、5.00g/l酪蛋白、0.1ml/l tx-100、3ml/l pc-300、10ml/l丙三醇和1mg/μg碱性磷酸酶活化的抗人人242单克隆抗体2组成。
34.本实施例中，分析缓冲液猪血清的浓度为50ml/l，小牛血清的浓度为50ml/l，分析缓冲液的制备过程包括以下步骤：
35.a、准备干净的容器，用实验室天平称取1.21gtris、9.0gnacl，加入约900ml纯化水溶解；
36.b、向步骤a中所得到溶液中加入适量的盐酸，用盐酸0.7ml调节ph值，使得ph调节到7.35-7.45；
37.c、向步骤b中加入10.0gbsa、50ml猪血清、50ml小牛血清、1.0mlpc-950、0.5mltween-20；
38.d、用纯化水将c中溶液定容至1l，配成添加50ml/l猪血清、50ml/l小牛血清缓冲液。
39.实施例2：
40.本实施例基于实施例1，与实施例1的区别在于：
41.分析缓冲液猪血清的浓度为100ml/l，小牛血清的浓度为100ml/l，分析缓冲液的制备过程包括以下步骤：
42.a、准备干净的容器，用实验室天平称取1.21gtris、9.0gnacl,加入约900ml纯化水溶解；
43.b、向步骤a中所得到溶液中加入适量的盐酸，用盐酸0.7ml调节ph值，使得ph调节到7.35-7.45；
44.c、向步骤b中加入10.0gbsa、100ml/l猪血清、100ml/l小牛血清、1.0mlpc-950、0.5mltween-20；
45.d、用纯化水将c中溶液定容至1l，配成添加100ml/l猪血清、100ml/l小牛血清缓冲液。
46.实施例3：
47.本实施例基于实施例1，与实施例1的区别在于：
48.分析缓冲液猪血清的浓度为200ml/l，小牛血清的浓度为200ml/l，分析缓冲液的制备过程包括以下步骤：
49.a、准备干净的容器，用实验室天平称取1.21gtris、9.0gnacl,加入约900ml纯化水溶解；
50.b、向步骤a中所得到溶液中加入适量的盐酸，用盐酸0.7ml调节ph值，使得ph调节到7.35-7.45；
51.c、向步骤b中加入10.0gbsa、200ml猪血清、200ml小牛血清、1.0mlpc-950、0.5mltween-20；
52.d、用纯化水将c中溶液定容至1l，配成添加200ml/l猪血清、200ml/l小牛血清缓冲液。
53.对比例1：
54.分析缓冲液不添加猪血清、小牛血清，分析缓冲液的制备过程包括以下步骤：
55.a、准备干净的容器，用实验室天平称取1.21gtris、9.0gnacl,加入约900ml纯化水溶解；
56.b、向步骤a中所得到溶液中加入适量的盐酸，用盐酸0.7ml调节ph值，使得ph调节到7.35-7.45；
57.c、向步骤b中加入10.0gbsa、1.0mlpc-950、0.5mltween-20；
58.d、用纯化水将c中溶液定容至1l，配成不添加小牛血清、猪血清的缓冲液。
59.对比例2：
60.本对比例基于实施例2，与实施例2的区别在于：
61.分析缓冲液中只含100ml/l猪血清，不含小牛血清。
62.对比例3：
63.本对比例基于实施例2，与实施例2的区别在于：
64.分析缓冲液中只含100ml/l小牛血清，不含猪血清。
65.进行以下试验来说明本发明的技术效果：
66.实验一：不加猪血清及小牛血清的分析缓冲液、添加猪血清及小牛血清的分析缓冲液，在同等情况下，人血清样本检测比较实验。
67.实验材料：bnhs，0.2mol/l pbs(ph7.4)缓冲液，1mmol/l tris缓冲液，羊抗人糖类抗原242特异性单克隆抗体，含有1％bsa的缓冲液buffer，alp标记的糖类抗原242单克隆抗体，裸磁珠，分别用不加猪血清及小牛血清的分析缓冲液、添加猪血清及小牛血清的分析缓冲液、糖类抗原242校准品cal-1,cal-6(cal-1到cal-6的浓度为0,5,20,50,100,200)，样本s1-s80，底物液，清洗液，贝克曼全自动化学发光测定仪access2。
68.添加猪血清及小牛血清的分析缓冲液采用实施例1的分析缓冲液，用生物素抗体包被好的磁珠，酶工作液和含有1％bsa的缓冲液buffer共同组成试剂盒，校准品校准系统后，并测定血清样本s1-s80。
69.反应模式为：先加入校准品30ul，分析缓冲液磁珠50ul,酶工作液50ul，磁珠50ul37℃共同孵育20min，再加入清洗液在磁场中清洗分离三次后，加入底物液37℃孵育5min后，于全自动化学发光测定仪上检测。
70.实验结果如表1和表2所示：
71.表1
[0072][0073]
表2
[0074]
[0075][0076][0077]
由表1和表2的数据可知：
[0078]
采用不添加猪血清、小牛血清的分析缓冲液，检测血清样本与比对厂家偏差较大；
采用添加猪血清、小牛血清的分析缓冲液，检测样本与比对厂家测值比对相对良好。
[0079]
实验二：不同浓度的猪血清、小牛血清的分析缓冲液对样本测定比较实验。
[0080]
按实施例1、实施例2、实施例3的方法对猪血清、小牛血清浓度进行调节，观察批间差。
[0081]
实验材料：bnhs，0.2mol/l pbs(ph7.4)缓冲液，1mmol/l tris缓冲液，羊抗人糖类抗原242特异性单克隆抗体，含有1％bsa的缓冲液buffer，alp标记的糖类抗原242单克隆抗体，裸磁珠，分别用添加不同浓度猪血清及小牛血清缓冲液作为分析缓冲液，糖类抗原242校准品cal-1，cal-6(cal-1到cal-6的浓度为0,5,20,50,100,200)，样本s1-s80，底物液，清洗液，贝克曼全自动化学发光测定仪access2。
[0082]
实验方法参照实验一。
[0083]
试验结果如表3、表4所示：
[0084]
表3
[0085][0086]
表4
[0087]
[0088]
[0089][0090]
由表3、表4可知：
[0091]
同样是分析缓冲液，添加猪血清及小牛血清，50ml/l猪血清、50ml/l小牛血清，测定血清样本，出现部分样本偏差较大情况。添加100ml/l猪血清、100ml/l小牛血清与添加200ml/l猪血清、200ml/l小牛血清测定血清样本，与比对厂家相比，偏差较小。
[0092]
实验三：分析缓冲液中添加100ml/l猪血清、100ml/l小牛血清(即实施例2中的分析缓冲液)，与不添加猪血清、小牛血清检测血清及血浆样本(即对比例1中的分析缓冲液)。
[0093]
添加猪血清及小牛血清的分析缓冲液采用实施例2的分析缓冲液，用生物素抗体包被好的磁珠，酶工作液和含有1％bsa的缓冲液buffer共同组成试剂盒，校准品校准系统后，并测定血清样本s1-s80。
[0094]
不添加猪血清及小牛血清的分析缓冲液采用比对例1的分析缓冲液，用生物素抗体包被好的磁珠，酶工作液和含有1％bsa的缓冲液buffer共同组成试剂盒，校准品校准系统后，并测定血清样本s1-s80。
[0095]
实验材料：bnhs，0.2mol/l pbs(ph7.4)缓冲液，1mmol/l tris缓冲液，羊抗人糖类
抗原242特异性单克隆抗体，含有1％bsa的缓冲液buffer，alp标记的糖类抗原242单克隆抗体，裸磁珠，分别用分析缓冲液为添加添加100ml/l猪血清、100ml/l小牛血清，糖类抗原242校准品cal-1,cal-6(cal-1到cal-6的浓度为0,5,20,50,100,200)，样本s1-s80，底物液，清洗液，贝克曼全自动化学发光测定仪access2。
[0096]
实验方法参照实验一：
[0097]
实验结果如表5所示：
[0098]
表5
[0099]
[0100]
[0101][0102]
由表5可知：
[0103]
同样是在分析缓冲液中添加猪血清，小牛血清测定血清血浆同源样本几乎无差异，在分析缓冲液中未添加猪血清，小牛血清测定血清血浆同源样本差异较明显。
[0104]
实验四：只加猪血清及小牛血清其中一种的分析缓冲液、添加猪血清及小牛血清的分析缓冲液，在同等情况下，人血浆样本检测比较实验。
[0105]
实验材料：bnhs，0.2mol/l pbs(ph7.4)缓冲液，1mmol/l tris缓冲液，羊抗人糖类抗原242特异性单克隆抗体，含有1％bsa的缓冲液buffer，alp标记的糖类抗原242单克隆抗体，裸磁珠，分别用只加猪血清的分析缓冲液、只加小牛血清的分析缓冲液、未添加猪血清及小牛血清的分析缓冲液、糖类抗原242校准品cal-1,cal-6(cal-1到cal-6的浓度为0,5,20,50,100,200)，样本s1-s80，底物液，清洗液，贝克曼全自动化学发光测定仪access2。
[0106]
只添加猪血清的分析缓冲液采用实施例4的分析缓冲液，用生物素抗体包被好的磁珠，酶工作液和含有1％bsa的缓冲液buffer共同组成试剂盒，校准品校准系统后，并测定血清样本s1-s80。
[0107]
只添加小牛血清的分析缓冲液采用实施例5的分析缓冲液，用生物素抗体包被好的磁珠，酶工作液和含有1％bsa的缓冲液buffer共同组成试剂盒，校准品校准系统后，并测定血清样本s1-s80。
[0108]
不添加猪血清及小牛血清的分析缓冲液采用对比例1的分析缓冲液，用生物素抗体包被好的磁珠，酶工作液和含有1％bsa的缓冲液buffer共同组成试剂盒，校准品校准系统后，并测定血清样本s1-s80。
[0109]
反应模式为：先加入校准品30ul，分析缓冲液磁珠50ul,酶工作液50ul，磁珠50ul37℃共同孵育20min，再加入清洗液在磁场中清洗分离三次后，加入底物液37℃孵育5min后，于全自动化学发光测定仪上检测。
[0110]
结果如表6和表7所示：
[0111]
表6
[0112][0113]
表7
[0114]
[0115]
[0116][0117]
由表6、表7可知：
[0118]
同样是在分析缓冲液中只添加猪血清或小牛血清，与不添加猪血清及小牛血清测定血清血浆同源样本都存在较大偏差。
[0119]
综上，糖类抗原242测定试剂盒在分析缓冲液中添加猪血清，小牛血清时，测定血清样本特异性及灵敏度有较大提高，与比对厂家测值相比，偏差较小。同时血清血浆的同源偏差较小，改善此项目仅用于血清样本测定的情况。可在调整至添加50ml/l猪血清、50ml/l小牛血清时，测定血清样本有部分偏差较大，添加100ml/l猪血清、100ml/l小牛血清及200ml/l猪血清、200ml/l小牛血清时，测定血清样本与比对厂家偏差较小，考虑成本优化，选择在分析缓冲液中添加100ml/l猪血清、100ml/l小牛血清。
[0120]
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：

1.一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，其特征在于，包括校准品、羊单抗包被的磁珠、分析缓冲液和酶工作液，所述羊单抗包被的磁珠上标记有生物素；所述分析缓冲液中添加有猪血清和小牛血清。2.根据权利要求1所述的一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，其特征在于，分析缓冲液中，猪血清的浓度大于50ml/l，小牛血清的浓度大于50ml/l。3.根据权利要求2所述的一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，其特征在于，分析缓冲液中，猪血清的浓度为50-200ml/l，小牛血清的浓度为50-200ml/l。4.根据权利要求3所述的一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，其特征在于，分析缓冲液中，猪血清的浓度为100ml/l，小牛血清的浓度为100ml/l。5.根据权利要求1所述的一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，其特征在于，分析缓冲液中包括以下组分：tris、nacl、盐酸、bsa、猪血清、小牛血清、pc-950和tween-20。6.根据权利要求5所述的一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，其特征在于，分析缓冲液的制备过程包括以下步骤：a、tris和nacl于容器内加入纯化水溶解；b、向步骤a中所得到的溶液中加入盐酸，调节ph值到7.35-7.45；c、向步骤b中所得到的溶液中加入bsa、猪血清、小牛血清、pc-950和tween-20；d、用纯化水定容，获得分析缓冲液。7.根据权利要求1所述的一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，其特征在于，羊单抗包被的磁珠为biotin-糖类抗原242单克隆抗体磁珠包被。8.根据权利要求1所述的一种用于测定糖类抗原242的试剂盒，其特征在于，酶工作液为含蛋白的缓冲液和酶标抗体的混合溶液。9.如权利要求1-8任一项所述的试剂盒在测定血浆中糖类抗原242中的应用。10.如权利要求1-8任一项所述的试剂盒在测定血清中糖类抗原242中的应用。

技术总结

本发明公开了一种用于测定糖类抗原242的试剂盒及其应用，用于测定糖类抗原242的试剂盒，包括校准品、羊单抗包被的磁珠、分析缓冲液和酶工作液，所述羊单抗包被的磁珠上标记有生物素；所述分析缓冲液中添加有猪血清和小牛血清。本发明中使用的分析缓冲液含有猪血清和小牛血清，分析缓冲液中的猪血清和小牛血清能很好的抑制血浆中的干扰物质，使测定糖类抗原242试剂盒能够用于血浆中糖类抗原242检测，改善了临床中仅适用血清情况，同时可降低血清中的干扰情况。的干扰情况。