效价:是评价抗生素效能的标准,也是衡量抗生素活性成分含量的尺度。
微生物鉴定法:以抗生素对微生物的杀伤力或抑制程度为指标来衡量抗生素效价的方法
理化方法:根据抗生素的结构特点,利用其特有的化学或物理性质及反应而进行的方法。
抗生素活性表示方法:抗生素的活性以效价单位来表示;每ml或每mg中含有某种抗生素的有效成分的多少,用单位u表示 。
一个青霉素效价单位:能在50mL肉汤培养基中完全抑制金黄葡萄球菌发育的最小青霉素剂量;以IU表示。 1mg青霉素G钠盐定为1667单位;1mg青霉素G钾盐为1595单位。
3、 管碟法测量抗生素效价的方法
a利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用,将已知效价的标准品溶液与未知效价的被检品溶液,在同样条件下加入已放置在含有高度敏感性的试验菌的培养基上的小管内。
b培养后,在抗生素扩散到达的适当范围内,产生了透明的抑菌圈。不同浓度的抗生素,抑菌圈的大小不同;比较标准品与检品的抑菌圈大小,利用不同的计算原理,就可以推算出此抗菌素的效价。
4、青霉素摇瓶培养的操作流程
a菌种活化:从保藏菌种接种到灭菌的斜面培养基中,25℃培养6-7天;待斜面上长满菌苔后作为以及菌种制备的起始菌株。 b一级斜面菌种制作:从起始菌株斜面接种到灭菌的斜面培养基, 25℃培养6-7天,如无杂菌污染及为一级斜面菌种。
c摇瓶培养:从一级斜面菌株接种到三角瓶液体培养基, 25℃、200rpm培养6-7天,可进行青霉素的效价测定等。
d发酵罐培养:
流程:冷冻管 → 斜面母瓶(1)→ 大米孢子(2)→ 一级种子罐(3 )→二级种子罐 (4)→ 发酵罐(5)→ 放罐至提炼
各步所需培养条件:
1. 25℃,6—7天;
2. 25℃,6—7天;
3. 25℃,40—45h,1:2VVM(每分钟通气体积比)
4. 25℃, 13—15h, 1:1.5VVM;
5. 22-26℃,6—7天,1:1—0.8VVM。
[实验材料]
1.菌种
⏹ 产黄青霉菌(Pentcillium chrysogenum)
⏹ 金黄葡萄球菌(Staphyloco ccusauoreus)
2.药品
⏹ 青霉素钠
⏹ 0.2mol/L pH 6.0磷酸缓冲液
⏹ 0.85%生理盐水
⏹ 发酵培养基
⏹ 生物测定培养基
3.仪器及器皿
移液,无菌头,接种环,酒精灯,烧杯,培养皿,滴管,试管,超净工作台等