过氧化氢检测试剂盒(硫酸钛比法)

过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(硫酸钛比法)

简介：

过氧化氢(H2O2)是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。

Leagene过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(硫酸钛比法)其检测原理是H2O2与硫酸肽反应发生的过氧化物-钛复合物黄沉淀，溶解于强酸中，其黄深浅与过氧化氢浓度在一定范围内呈线性关系，通过分光光度计检测412nm处吸光度。该试剂盒主要用于检测植物组织、血清、血浆等样品中过氧化氢(H2O2)含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

编号名称	TO1076 50T	Storage
试剂(A): H2O2标准	1ml	RT
试剂(B): 碱性基液	10.5ml	RT
试剂(C): 硫酸钛	1g	RT
试剂(D): 酸性基液	100ml	RT
使用说明书	1份

自备材料：

1、蒸馏水

2、丙酮

3、低温离心机

4、比杯

5、分光光度计

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，加入预冷的丙酮，在冰浴条件下迅速匀浆或研磨，4℃ 离心，收集上清液，测量提取液总体积，4℃保存备用。

血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃保存，用于过氧化氢的检测。

高活性样品：如果样品中含有较高浓度的过氧化氢，可以使用丙酮进行恰当的稀释。

2、配制100μM丙酮-H2O2溶液：取H2O2标准准确溶解于蒸馏水中，即得10mM的H2O2。取H2O2准确溶解于丙酮中，即为100μM的丙酮-H2O2溶液，按下表依次稀释：

加入物(ml)	1	2	3	4	5
丙酮-H2O2溶液(100μM)	0.2	0.4	0.6	0.8	1
预冷丙酮	0.8	0.6	0.4	0.2	0
H2O2含量(nmol)	20	40	60	80	100

3、配制硫酸钛溶液：将硫酸钛小心缓慢的加入至浓盐酸中，即为硫酸钛溶液，4℃避光保存。

4、 H2O2加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的H2O2浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。

加入物(ml)	空白管	标准管	测定管
预冷丙酮	1	—	—
系列丙酮-H2O2溶液	—	1	—
待测样品	—	—	1
碱性基液(直接加入到溶液)	0.2	0.2	0.2
硫酸钛溶液 (直接加入到溶液)	0.1	0.1	0.1
加入碱性基液、硫酸钛溶液时，应直接加入溶液，不要粘到管壁。

5、 H2O2测定：混匀弃上清液，留取沉淀，如有必要可加入预冷丙酮反复洗涤沉淀物。向标准管、测定管的沉淀中加入2ml酸性基液，摇动，使沉淀完全溶解(注意：空白管无需该

步骤)。比杯光径1cm，以空白调零，以分光光度计测定412nm处系列标准管、测定管的吸光度。如果没有分光光度计，亦可用酶标仪检测，但如果有条件，尽量采用分光光度计测定。

计算：

以系列丙酮-H2O2溶液(20、40、60、80、100nmol/L)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。以测定管吸光度代入回归方程求得待测样品中H2O2含量。

组织样品H2O2 (nmol/g)=(m0×VT)/(m1×VS)

液体样品H2O2 (nmol/ml)=(m0×VT)/VS

注意事项：

1、本试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样本数相应增多。如果有条件，尽量采用

分光光度计检测。

2、 H2O2标准和碱性基液应严格密闭保存，避免挥发，否则效率会下降。

3、 H2O2标准和酸性基液有一定腐蚀性，请小心操作。

4、加入碱性基液、硫酸钛溶液时，应直接加入溶液，不要粘到管壁。

5、过氧化物-钛复合物黄沉淀溶解于酸性基液时需要一段时间，需完全溶解，否则有可能影响比结果。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

编号	名称
CS0001	ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DF0111	中性福尔马林固定液(10%)
DM0007	瑞氏-姬姆萨复合染液
TC0699	植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)
TC1167	尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比法)