ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．０６．２０·质量管理研究·
吕园，邬兰，张秀梅，徐秋爽，张健，李萍，王海鹏，俞杨（南京市第一医院南京医科大学附属南京医院核医学科实验诊断部，南京２１０００６）
摘要：目的 对１３种呼吸道病原体多重检测试剂盒（ＰＣＲ毛细管电泳片段分析法）进行性能验证。方法 参照ＣＮＡＳ ＧＬ０３９：
２０１９《分子诊断检验程序性能验证指南》和厂商性能确认方法，用包含１３种病原体（经参比方法测序法确认）的临床咽拭子样本进行方法符合率验证，用国家参考品、慢病毒载体和质粒混合样本（包含所有１３种病原体）进行检出限验证，用包含其他７ 种病原体的临床咽拭子样本进行交叉反应验证，用分别添加终浓度为５％的全血、１．２ｍｇ／ｍＬ的硫酸沙丁胺醇的临床咽拭子样本进行抗干扰能力验证，以试剂盒说明书的性能指标作为结果判断标准。结果 包含１３种病原体的临床咽拭子样本经本试剂盒检测，各自出现所检测病原体的特征峰，满足方法符合率的验证要求；以国家参考品、慢病毒载体和质粒混合后的样品重复检测２０次，对应的１３种病原体均为阳性，满足检出限的验证要求；包含其他７种病原体的临床咽拭子样本均未出现本试剂盒所
检测的病原体特征峰，满足交叉反应的验证要求；分别添加终浓度为５％的全血、１．２ｍｇ／ｍＬ的硫酸沙丁胺醇的临床咽拭子样本检测结果与未添加干扰物质的对照组检测结果相同，满足抗干扰能力的验证要求。结论 １３种呼吸道病原体多重检测试剂盒各项性能验证参数与厂商声明的标准一致，可正式应用于临床检测。
关键词：十三种呼吸道病原体；聚合酶链反应；毛细管电泳；性能验证
中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标志码：Ａ
性能验证指使用某特定检测试剂或系统的实验
室按照所提供的试剂盒或检测系统说明书使用时，
能复现生产厂家所宣称的检测性能。中国合格评定
国家认可委员会（ＣＮＡＳ）２０１９年２月１５日发布并
实施ＣＮＡＳ ＧＬ０３９：２０１９《分子诊断检验程序性能验
证指南》［１］。本研究参照其要求，以１３种呼吸道病
原体多重检测试剂盒（ＰＣＲ毛细电泳片段分析法）
说明书中的性能指标作为验证结果的判断标准，进
行方法符合率、检出限、交叉反应和抗干扰能力４个
方面的性能验证。
１ 对象与方法
１．１ 对象 （１）方法符合率样本：经测序确认的分
别包含１３种病原体（甲型流感病毒、腺病毒、博卡
病毒、鼻病毒、甲型流感病毒Ｈ１Ｎ１、副流感病毒、衣
原体、偏肺病毒、乙型流感病毒、肺炎支原体、季节性
Ｈ
３Ｎ
２病毒、
冠状病毒、呼吸道合胞病毒）的临床咽拭
子样本。（２）检出限样本：定值标准物质样本［参考品，由国家参考品（中国食品药品检定研究院）、慢病毒载体和质粒混合而成，包含所有１３种病原体］。（３）交叉反应样本：经测序确认的、包含７种病原体（包括表皮葡萄球菌、金黄葡萄球菌、粪肠球菌、肺炎克雷伯菌、解脲支原体、巨细胞病毒、ＥＢ病毒），但不包含待测试剂盒１３种病原体的临床咽拭子样本。（４）抗干扰能力验证样本：经测序确认的弱阳性临床咽拭子样本２例（副流感病毒ＨＰＩＶ和冠状病毒ＨＣＯＶ）。测序工作委托上海生工生物公司完成，使用Ｓａｎｇｅｒ测序方法。测序仪器为ＡＢＩ３７３０ｘＬ；测序试剂为赛默飞ＢｉｇＤｙｅＴｅｒｍｉｎａｔｏｒｖ３．１
ＣｙｃｌｅＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇＫｉｔ；测序使用３７３０默认的测序参数（ＳｔａｎｄａｒｄｒｅａｄＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ＰＯＰ７分离胶、
３６ｃｍ毛细管）；将测序结果在ＮＣＢＩ网站上作ＢＬＡＳＴ对比分析。
１．２ 试剂和仪器 核酸提取或纯化试剂（宁波海尔施公司）；１３种呼吸道病原体多重检测试剂盒（ＰＣＲ
毛细电泳片段分析法，宁波海尔施公司）；参考品［批号１０４１９０１０７００１，由国家参考品（中国食品药品检定研究院，３７００００６ ２０１５０１）、慢病毒载体和质粒混合而成，宁波海尔施公司］；ＳＬＡ ３２全自动核酸提取仪（台湾圆点奈米技术公司），Ａ３００ＰＣＲ扩增仪（杭州朗基公司），ＡＢＩ３５００Ｄｘ基因分析仪（英潍捷基公司）。
１．３ 临床咽拭子样本采集及核酸提取 使用专用的咽拭子取样后迅速放入装有３ｍＬ采样液的采样
管中，旋紧管盖。采样液中包含蛋白质稳定剂、阻止细菌和真菌生长的抗生素、缓冲液。将采样管置于
·０７４·临床检验杂志２０２０年６月第３８卷第６期 ＣｈｉｎＪＣｌｉｎＬａｂＳｃｉ，Ｊｕｎｅ２０２０，Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．６
基金项目：南京医科大学科技发展基金重点项目（２０１６ＮＪＭＵＺＤ０４４）。
作者简介：吕园，１９８７年生，女，主管技师，博士，主要从事分子诊断工作。
通信作者：俞杨，副主任技师，博士，Ｅ ｍａｉｌ：ｂｏｈｅｍｉａ０００＠１６３．ｃｏｍ。
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