一种无蔗糖型安眠补脑糖浆的质量检测方法

一种无蔗糖型安眠补脑糖浆的质量检测方法

技术领域

本发明涉及药物质量检测的技术领域，具体涉及一种未添加蔗糖的无蔗糖型安 眠补脑糖浆的质量检测方法。

背景技术

无蔗糖型安眠补脑糖浆是以制何首乌、制远志、柏子仁、枸杞子、麦冬、醋制 五味子、桑椹、大枣、红参、蜜炙甘草十味药组成，具有益气滋肾，养心安神的功 效，用于神经官能症或其他慢性疾病所引起的失眠、头昏、头痛心慌等症。为了能 更好的控制该安眠补脑糖浆的质量，保证用药的安全性和疗效，能更好的指导生产、 提供高品质的产品给消费者，因此，需要一套更为完善的质量检测方法。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种无蔗糖型安眠补脑糖浆的质量检测方法，该方法为 相关的生产、检验机构提供了检测指标，检测手段及技术方法，保证该药品的用药 的安全性和疗效，给消费者提供了品质优良的产品。

本发明的技术方案是：设计了一种无蔗糖型安眠补脑糖浆的质量检测方法，所 述的无蔗糖型安眠补脑糖浆以制何首乌、制远志、柏子仁、枸杞子、麦冬、醋制五 味子、桑椹、大枣、红参、蜜炙甘草十味中药为原料，其特征是在于所述的质量检 测方法包括以下步骤：

(1)取本品10ml，加醋酸乙酯10ml，振摇，分取醋酸乙酯液，置水浴上蒸干， 残渣加甲醇3ml使溶解，滤过，滤液加镁粉0.2‑0.5g和盐酸3‑8滴，置水浴中加热 5‑8分钟，显红；

(2)取本品1ml，加水10ml，强力振摇1分钟，应产生持久性泡沫，10分钟 内不消失；

(3)取本品10ml，加水5ml，加盐酸1ml，超声处理15分钟，放冷，用乙醚 提取2次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶 液；另取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄 层谱法试验，参见中国药典2000年版附录Ⅵ B，吸取上述两种溶液各6μl，分别 点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以甲苯‑醋酸乙酯‑甲酸 (15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试 品谱中，在与对照品谱相应位置上，显相同的橙荧光斑点；置氨气中熏后， 斑点变为红。

(4)取本品20ml，加盐酸1ml，水2ml，摇匀，煮沸10分钟，放凉，用氯仿 20ml振摇提取，分取氯仿层，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g， 照供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。照薄层谱法试验，参见中国药典2000 年版附录Ⅵ B，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合 剂的硅胶G薄层板上，以氯仿‑丙酮(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰，供试品谱中，在与对照药材谱 相应位置上，显相同颜的主斑点；

(5)取本品20ml，以醋酸乙酯30ml振摇提取，分取醋酸乙酯层，蒸干，残渣 加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，加水30ml，煎煮 30分钟，滤过，滤液加水至20ml，同供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液； 照薄层谱法试验，参见中国药典2000年版一部附录Ⅵ B，吸取上述两种溶液各 5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯‑ 氯仿‑甲酸(3∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检 视。供试品谱中，在与对照药材谱相应位置上，显相同颜的荧光主斑点；

(6)取本品20ml，加水20ml，摇匀，以正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合 并正丁醇溶液，水洗三次，正丁醇液蒸干，残渣加2ml甲醇溶解，作为供试品溶液； 另取甘草对照药材1g，加水煎煮30分钟，超声10分钟，滤过，滤液同供试品溶液 的制备方法制成对照药材溶液；另取甘草酸铵盐对照品适量，加甲醇制成每1ml含 1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层谱法试验，参见中国药典2000年版附录Ⅵ B， 吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G 薄层板上，以正丁醇‑浓氨‑乙醇(5∶2∶1)为展开剂，平衡15分钟，饱和30分 钟；展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰，供 试品谱中，在与对照药材谱相应位置上，显相同颜的主斑点；在与对照品 谱相应位置上显相同颜的斑点；

检查相对密度：应不低于1.28，参见中国药典2000年版一部附录Ⅶ A项下方 法2测定；

pH 4.0～6.0参见中国药典2000年版一部附录Ⅶ G方法测定；

其他应符合糖浆剂项下有关的各项规定即：中国药典2000年一部附录ⅠH；

含量测定：在避光操作，照中国药典2000年一部附录VI D高效液相谱法测 定；

谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈‑水(21∶ 79)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑ 2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷峰计算应不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测 定，即得；

其中，所述的本品为无蔗糖型安眠补脑糖浆。

所述对照品溶液的制备：精密称取2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β ‑D‑葡萄糖苷对照品适量，加稀乙醇溶解制成每ml含80μg的溶液，即得。

所述供试品溶液的制备：精密吸取本品5ml，精密加入稀乙醇25ml，称定重量， 超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤 膜为0.45μm滤过，即得。

所述本品每ml含2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷 (C₂₀H₂₂O₉)不得少于0.20mg。

本发明的优点是：本发明的安眠补脑糖浆的质量检测方法，与原标准相比增加 了麦冬、枸杞、蜜炙甘草的薄层定性鉴别，增加了制何首乌的含量测定方法，更为 科学有效的对处方中有效成分进行定性、定量控制，对产品的监控更为严格，进一 步提高了产品的安全性及有效性。

具体实施方式

下面结合 具体实施例对本发明作进一步说明，但是不作为对本发明的限制。本实施例中没 有详细叙述的部分是采用现有技术，和行业标准或公知手段。

实施例1

1、处方：制何首乌67g、制远志40g、柏子仁40g、枸杞子40g、麦冬40g、 醋制五味子33g、桑椹67g、大枣40g、红参4g、蜜炙甘草33g，

2、制法：按上述处方量称取以上十味中药原料，先将红参加水煎煮三次，每次 2小时，合并滤液，静置，滤过，滤液备用。其余醋制五味子等九味加水煎煮三次， 每次2小时，合并煎液，静置，滤过，与上述红参滤液合并，浓缩至适量，加入山 梨醇500g及防腐剂适量，煮沸使溶解，滤过，放冷，加入香精适量，加水调整总量 至1000ml，搅匀，即得。本品为棕褐的粘稠液体；气香，味甜。

3、鉴别：

(1)取本品10ml，加醋酸乙酯10ml，振摇，分取醋酸乙酯液，置水浴上蒸干， 残渣加甲醇3ml使溶解，滤过，滤液加镁粉0.2‑0.5g和盐酸3‑8滴，置水浴中加热 5‑8分钟，显红；

(2)取本品1ml，加水10ml，强力振摇1分钟，应产生持久性泡沫，10分钟 内不消失。

(3)取本品10ml，加水5ml，加盐酸1ml，超声处理15分钟，放冷，用乙醚 提取2次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶 液。另取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄 层谱法(中国药典2000年版附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点 于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以甲苯‑醋酸乙酯‑甲酸 (15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试 品谱中，在与对照品谱相应位置上，显相同的橙荧光斑点；置氨气中熏后， 斑点变为红。

(4)取本品20ml，加盐酸1ml，水2ml，摇匀，煮沸10分钟，放凉，用氯仿 20ml振摇提取，分取氯仿层，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g， 照供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。照薄层谱法(中国药典2000年版附 录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂 的硅胶G薄层板上，以氯仿‑丙酮(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 ％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰，供试品谱中，在与对照药材谱相 应位置上，显相同颜的主斑点。

(5)取本品20ml，以醋酸乙酯30ml振摇提取，分取醋酸乙酯层，蒸干，残渣 加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，加水30ml，煎煮 30分钟，滤过，滤液加水至20ml，同供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。 照薄层谱法(中国药典2000年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯‑氯仿‑ 甲酸(3∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供 试品谱中，在与对照药材谱相应位置上，显相同颜的荧光主斑点。

(6)取本品20ml，加水20ml，摇匀，以正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合 并正丁醇溶液，水洗三次，正丁醇液蒸干，残渣加2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。 另取甘草对照药材1g，加水煎煮30分钟，超声10分钟，滤过，滤液同供试品溶液 的制备方法制成对照药材溶液；另取甘草酸铵盐对照品适量，加甲醇制成每1ml含 1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层谱法(中国药典2000年版附录Ⅵ B)试验， 吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G 薄层板上，以正丁醇‑浓氨‑乙醇(5∶2∶1)为展开剂，平衡15分钟，饱和30分 钟。展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰，供 试品谱中，在与对照药材谱相应位置上，显相同颜的主斑点；在与对照品 谱相应位置上显相同颜的斑点。

检查：相对密度应不低于1.28(中国药典2000年版一部附录Ⅶ A项下方法 2测定)。

pH 4.0～6.0(中国药典2000年版一部附录Ⅶ G方法测定)。

其他应符合糖浆剂项下有关的各项规定(中国药典2000年一部附录ⅠH)

4、含量测定：

避光操作。照中国药典一部高效液相谱法(中国药典2000年一部附录VI D) 测定。

谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈‑水(21∶ 79)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2 ‑O‑β‑D‑葡萄糖苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D ‑葡萄糖苷对照品适量，加稀乙醇溶解制成每ml含80μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密吸取本品5ml，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超 声处理20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜 (0.45μm)滤过，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪， 测定，即得。

本品每ml含2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉) 不得少于0.20mg。

用法用量：口服，一次15ml，一日3次；或临睡前服30～50ml。规格：每瓶装 150ml。

为了证明利用本发明提供的质量检测方法能更好的控制无蔗糖型安眠补脑糖浆 的质量，得到的药物具有有效的效果，我们进行了一系列试验：

1、主要检测仪器、试剂、标准物质

仪器：AB204‑S电子天平(梅特勒)、PL202电子天平(梅特勒)、三用紫外 仪(上海嘉鹏)、恒温培养箱(上海一恒)、水浴锅(上海一恒)、层析缸、超声清洗 器(上海科导)、高效液相谱仪(苏州岛津)、Delta320型酸度计(梅特勒)、比重 瓶。

研究所用对照品、对照药材均购自中国生物制品检定所，所用试剂均为分析纯。

标准物质(对照品和对照药材)批号：麦冬对照药材(批号：121013‑200405)； 枸杞子对照药材(批号：121072‑200404)，大黄素(批号：110756‑200110)；甘草对 照药材(批号：120904‑200410)；甘草酸铵(批号：110731‑200407)；远志对照药材 (批号：120989‑200304)；2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖 苷(批号：110844‑200404)。

2、【药品名称】、【处方】、【制法】均符合《中药成方制剂》第十五册WS₃‑B‑1933‑95 标准。

本制剂(实施例1)为便于临床肥胖病人及糖尿病患者用药，改原注册标准糖 浆剂(蔗糖)为未添加蔗糖的糖浆剂，参照国外及国内同类型制剂用法用量，用蔗 糖的替代品山梨醇、蛋白糖制成未添加蔗糖的糖浆剂，性状符合标准规定，辅料不 影响本品含量测定。

3、【性状】根据三批中试产品20050412、20050415、20050420的实际性状而描 述。

4、【鉴别】列入标准的鉴别试验：

(1)为制剂中黄酮类成分的理化鉴别反应。处方中麦冬、桑椹、蜜炙甘草均 含有黄酮类成分。试验以盐酸‑镁粉反应对制剂中总黄酮进行定性分析，按正文所 述的方法试验，结果呈正反应。此项鉴别试验为原标准中收载，继续保留。

(2)为制剂中皂苷类成分的理化鉴别反应。处方中人参、大枣、制远志、麦 冬均含皂苷类成分。试验以泡沫反应对制剂中总皂苷进行定性分析，按正文所述的 方法试验，结果呈正反应，此项鉴别试验为原标准中收载，继续保留。

(3)为制何首乌的薄层鉴别试验。按正文所述的方法制备供试品溶液和对照品 溶液。再取缺制何首乌的阴性对照品适量，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对 照溶液。照薄层谱法(中国药典2000年版附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各 6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以甲苯‑醋酸乙 酯‑甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。 供试品谱中，在与对照品谱相应位置上，显相同的橙荧光斑点；置氨气中熏 后，斑点变为红。而阴性对照谱相应位置上，无相应斑点。此项鉴别试验为原 标准收载，本法特异性好，灵敏度高，继续保留。

(4)为麦冬的薄层鉴别试验。试验以麦冬对照药材为对照，加酸水解后以醋酸 乙酯提取皂苷元，按正文所述的方法制备供试品溶液和对照药材溶液。再取缺麦冬 的阴性对照品适量，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。照薄层谱法 (中国药典2000年版附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以 羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿‑丙酮(8∶2)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰，供试品 谱中，在与对照药材谱相应位置上，显相同颜的主斑点。而在阴性对照谱相 应位置上，无相应斑点，提示阴性对照无干扰。本法特异性好，灵敏度高，因此纳 入标准正文。

(5)为枸杞子的薄层鉴别试验。以枸杞子对照药材为对照。按正文所述的方法 制备供试品溶液和对照药材溶液。再取缺枸杞子的阴性对照品适量，按供试品溶液 的制备方法，制成阴性对照溶液。照薄层谱法(中国药典2000年版附录ⅥB)试 验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G 薄层板上，以醋酸乙酯‑氯仿‑甲酸(3∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置 紫外光灯(365nm)下检视。供试品谱中，在与对照品谱相应位置上，显相同 颜的荧光主斑点。而在阴性对照谱相应位置上，无相应斑点，提示阴性对照无 干扰。本法特异性好，灵敏度高，因此纳入标准正文。

(6)为蜜炙甘草的薄层鉴别试验。按正文所述的方法制备供试品溶液、对照药 材溶液、对照品溶液。再取缺甘草的阴性对照品适量，按供试品溶液的制备方法， 制成阴性对照溶液。照薄层谱法(中国药典2000年版附录Ⅵ B)试验，吸取上述 四种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上， 以正丁醇‑浓氨‑乙醇(5∶2∶1)为展开剂，饱和30分钟。展开，取出，晾干， 喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰，供试品谱中，在与对照药 材谱相应位置上，显相同颜的主斑点；在与对照品谱相应位置上显相同颜 的斑点。而阴性对照谱相应位置上，无相应斑点，提示阴性对照无干扰，因此纳 入标准正文。

未列入标准的薄层鉴别试验：

(1)制远志的鉴别制远志为方中臣药，取本品20ml，加盐酸‑无水乙醇溶 液(10→100)20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥去乙醇，用氯仿振摇提取2 次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。 另取制远志对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层谱法(中国药典2000 年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一羧甲基纤维 素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯‑醋酸乙酯‑甲酸(14∶4∶0.5)为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰，供 试品谱中，在与对照药材谱相应位置上，显不相同颜的斑点。

(2)红参的鉴别红参为贵细药，但因其在处方中所占比例太小，因此取样 量较大。取本品50ml，以水饱和的正丁醇30ml萃取2次，合并正丁醇液，蒸干， 残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。以人参皂苷Rg1、Re、Rb1的混合液为对 照品溶液。薄层谱法(中国药典2000年版附录Ⅵ B)试验，吸取上述2种溶液各 10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿‑醋酸 乙酯‑甲醇‑水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取 出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰，供试品谱中， 在与对照品谱相应位置上隐约可见相同颜的斑点。但因其检测灵敏度较低，层 析效果不理想，因而未纳入标准正文。

5、【检查】三批中试样品，按中国药典2000年版一部附录ⅠH糖浆剂项下的有 关规定对其装量差异、相对密度、pH和微生物限量进行检查。 装量差异：照中国药典2000年版附录Ⅻ C‑最低装量检查法进行检查，均大于标示 装量的95％；结果见表1。

表1  装量差异检查结果

相对密度：照中国药典2000年版附录Ⅶ A项下方法2测定，应不低于1.28(25℃ 测)；结果见表2。

pH：照中国药典2000年版附录Ⅶ G方法测定，应在4.0～6.0之间。结果见表 2。

表2  三批样品检查结果

【含量测定】

无蔗糖型安眠补脑糖浆是由制何首乌、制远志、柏子仁、枸杞子、麦冬、醋制 五味子、桑葚、大枣、红参、蜜炙甘草共十味药组成的复方制剂，制何首乌为方中 君药，为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thumb的块根的炮制品。因其炮制 方法不同又有生首乌和制首乌之分。制首乌味苦、甘、涩、性温、具有补肝肾、益 精血、壮筋骨、乌须发之功效。主要含2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β ‑D‑葡萄糖苷、磷脂类物质、蒽醌类化合物等成分。根据处方中所含药味的化学 成分及剂型特点，参考《中国药典》2000年版一部何首乌药材测定方法，以药材何 首乌2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷含量测定方法，制 定糖浆剂中2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷含量测定。

1.谱条件及选择

1.1谱条件

谱柱  Shimpack ODS 5μm，ID4.6×150mm

流动相  乙腈‑水(21∶79)

流速  1.0ml/min

检测波长  320nm

柱温  30℃

进样量  10μL

理论板数  按2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷峰计， 应不低于1500。

2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷对照品由中国药品生 物制品检定所提供，乙腈为谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

1.2谱条件的选择

流动相检测波长参照相关文献资料及《中国药典》一部制首乌材标准项下的有 关内容选定。柱温则由实际实验选定。

2.对照品溶液的制备

取2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷对照品适量，加 稀乙醇溶液，配制成每1ml含2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡 萄糖苷0.08mg的溶液，即得。

3.供试品溶液制备

精密吸取本品5ml，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理20分钟，放 冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即 得。

4.制首乌阴性溶液的制备与测定

按处方比例称取除制何首乌外其余各味药材1/100重量，按注册标准正文制法 及供试品溶液制备方法制得阴性(空白)溶液，并按供试品分析方法测试。结果表 明，阴性溶液中在2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷保留 时间无相应的峰响应，阴性对照供试品液中的其它成分山梨醇等对成品制首乌药材 中2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的测定不产生干扰。

5.检测波长的确定

取2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷对照品适量，加 稀乙醇溶解，制成每1ml含2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄 糖苷对照品0.08mg的溶液，在200～400nm波长范围扫描，结果在320nm波长处有 最大吸收，并与供试品溶液最大吸收波长一致，参考相关文献，中国药典2000版一 部及实验结果，确定320nm波长为本品2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β ‑D‑葡萄糖苷含量测定最大吸收波长。

6.流动相的选择

参照文献资料制首乌药材中2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑ 葡萄糖苷的含量测定项下的流动相配置方法制备，经实验后确认该流动相稳定，对 供试品和对照品分析效果良好，故选用流动相为乙腈‑水(21∶79)。

8.线性关系考察

精密称取2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷对照品， 加稀乙醇溶液，制成浓度为0.2mg/ml的溶液。分别精密吸取对照品溶液1ml、2ml、 4ml、6ml、8ml、10ml制得2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄 糖苷浓度分别为0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.08mg/ml、0.012mg/ml和0.16mg/ml、0.20 mg/ml的溶液，分别取10μL按含量测定要求进样，结果见表3。

表3  2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷 对照品标准曲线绘制

表3中2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷进样量与其响 应值(0.2μg～2.0μg)之间呈良好线性关系。

9.精密度试验

取对照品溶液，精密吸取同一进样量，重复进样6次，测试数据见表4。

表4  精密度试验数据统计

数据统计结果表明，该方法完全可满足分析测试的精度要求。

10.供试品溶液稳定性试验

精密吸取供试品溶液(批号：20050412，中试产品按注册质量标准草案中含量 测定项下供试品溶液制备方法制备的供试品溶液)，按正文中的液相谱条件，按表 5中规定时间间隔进样，结果表明供试品溶液中2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2 ‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的含量在8小时之内响应峰面积无明显变化，证明供试品溶 液稳定。数据统计见表5。

表5  溶液稳定性试验数据统计

11.重现性试验

取本品(批号20050412)，精密称取6份供试品，分别按注册质量标准草案中 含量测定项下的供试品溶液制法制备供试品溶液，依法进样分析，计算其含量。数 据统计见表6。

表6  重复性试验数据统计

上述试验表明，该方法重现性良好。

12.回收率试验

取已知含量的供试品(批号：20050412)，精密定量加入2，3，5，4′‑四羟 基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷对照品，摇匀，制成待测回收率的供试品溶液 按注册标准含量测定项下测试，按下式计算回收率，结果见表7。

表7  回收率试验数据统计

经上述试验的统计数据可见，被测成分2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O ‑β‑D‑葡萄糖苷回收率高且稳定，满足本品中2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑ 2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷含量测定的分析要求。

13.三批中试产品含量测定

取中试产品三批(批号：20050412、20050415、20050420)，按注册质量标准草 案中含量测定项下的要求制备供试品溶液，按对照品溶液制备方法制备对照品溶液， 依本方法测试。并对本企业生产的安眠补报糖浆上市产品任取三批同法测定含量测 定，结果见表8。

表8  三批中试产品2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑ 葡萄糖苷含量测定数据统计

依据三批中试产品中2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖 苷含量测定结果，并比较上市产品“安眠补脑糖浆”含量测定结果，2，3，5，4′ ‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷含量没有明显差异，暂定本品“每1ml 含制首乌以2，3，5，4′‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉) 计不得少于0.20mg”。

【功能与主治】舒肝活血，软坚散结，用于经期乳胀痛有块，月经不调或是少， 紫成块及乳腺增生。与原标准【功能与主治】叙述一致。

【用法与用量】与原标准【用法与用量】叙述一致。

【注意】与原标准【注意】叙述一致。

【规格】每瓶100ml、150ml。

【贮藏】与原标准【贮藏】叙述完全一致。