一种马齿苋子总黄酮树脂纯化方法

一种马齿苋子总黄酮树脂纯化方法

技术领域

本发明涉及维吾尔药成分纯化方法，主要涉及维吾尔药提取物的纯化方法，尤其涉及马齿苋子总黄酮的纯化方法，属于医药技术领域。

背景技术

在新疆，维吾尔传统医药至今广泛流传。新疆具有独特的地理环境和气候条件，因而蕴育了丰富的维吾尔药材资源。马齿苋子为马齿苋科植物马齿苋的干燥种子，夏秋果实成熟时采收全株晒干，抖动后收集落下的种子。本品扁圆形或因肾形，长约 0.94mm，宽 0.83mm，厚约 0.42mm。表黑，少数红棕，于解 剖镜下可见密布细小庇状突起。一端有一凹陷，凹陷旁有一白种脐。质坚硬，难破碎。味微酸。以粒饱满，黑者为佳。 清凉生津，利尿止渴，降低机体胆液质的偏旺。用于热性疾患，胃病，头痛，子宫炎症，脑膜炎，尿道炎及热性台甫。研究认为马齿苋子的这些 作用与黄酮类成分有密切关系。马齿苋子总提取物由于成分复杂而使制成的制剂不可避免地存在粗、大、黑的缺点，且总提取物中还因含有较多的糖类而具有较大的吸湿性，限制了 其剂型的选择。因此对马齿苋子总黄酮进行纯化，使纯化后的产品符合中药新剂型的需要具有重要的意义。

中药中黄酮类化合物的纯化，传统采用溶剂萃取法、聚酰胺和硅胶柱层析法，但是溶剂萃取法操作麻烦，萃取过程又易乳化，所有有机溶剂，如氯仿、乙酸乙醋、正丁醇有不同 程度的毒性，且用氯仿萃取，只能得到黄酮总量的 40%；用乙酸乙醋萃取，也只能得到总量的 50% ；用正丁醇萃取也仅得到总量的 40% 左右，因此需要用上述几种溶剂依次萃取才能使总黄酮基本萃取完全。聚田先肢纯化；去对马齿苋子总黄酮的不可逆吸附达 40% ，因此其率低，且洗脱麻烦。硅胶纯化法对黄酮的不可逆吸附达 60% ，得率更低。因此上述三种 法在马齿苋子总黄酮纯化中，均不理想。而同时基于大孔树脂在中药纯化中应用日渐广泛， 己用于纯化黄酮、皂苷、生物碱等中药成分，大孔树脂种类日益增多，在传统 DI0l 、DI02 树 脂的基础上，己开发了各种不同性能的大孔树脂，如，天津农药股份公司树脂分公司生产的 D-I0l 、DA201 、DM301 ，河北沧州宝恩化工有限公司的HPD 系列，以及南开大学化工厂生产的 AB-8 、D3520 等。可以考虑采用大孔树脂对其进行提纯。

发明内容

针对现有马齿苋子中总、黄酮的提取与纯化方法上存在的不足之处，本发明提供一种全新的马齿苋子中总黄酮的提取与纯化方法，主要用树脂对马齿苋子进行柱提纯，采用 这种方法，降低了有机溶剂在整个提纯过程中的应用，防止了有机溶剂对最终产物的影响， 本发明方法纯化马齿苋子，其总黄国同转移率可达 90% 以上，纯化物总黄酮含量可达 55% 以 上，且重现性好，树脂可重复使用。

本发明所述的技术方案如下：一种马齿苋子总黄酮树脂纯化方法，由以下具体步骤组成：

1) 取粉碎的马齿苋子，以体积分数为 40% 乙醇为溶剂，浸泡 12 小时，以药材质量10 倍体积量的体积分数为 40% 乙醇为提取剂，加热至回流提取，收集提取液，减压回收乙 醇，得浓缩液；

2)  将步骤 1 得到的提取液浓缩到每毫升含提取物 20mg，选用 HPD-400 或 HPD-600 或 AB-8 或 D101 大孔树脂，上样，上样吸附 0.1- 2.0 小时，先水洗，水洗体积为 1BV -3BV ， 水洗流速为 1BV/h -3BV/h ，然后用乙醇洗脱，洗脱用乙醇体积分数为50%-80% ，洗脱量 为 1BV -4BV ，洗脱速度为2BV/h -4BV/h ；

3)  收集步骤 2 的乙醇洗脱液，浓缩， 50℃ 真空干燥，得干燥的纯化产品。

本发明提供的马齿苋子总黄酮树脂纯化方法步骤  2  中优选 HPD-400  大孔树脂对 浓缩液进行纯化，优选工艺条件为：上样吸附时间为1. 0 小时，水洗体积为 l?V ，水洗流速为 2BV/h ，洗脱剂为乙醇，洗脱用乙醇浓度为60% ，乙醇洗脱量为2BV ，乙醇洗脱速度为2BV/h。本发明提供的马齿苋子总黄酮树脂纯化方法步骤  2  中提取液浓缩物为透明状棕 黄液体或含有悬浮态棕黄絮状颗粒的透明状棕黄液体。

本发明提供的马齿苋子总黄酮树脂纯化方法步骤 2 中浓缩液上样的方式是干法上样，上样体积与大孔树脂质量比值为 :5 : 1-10 : 1。优选浓缩液上样体积比大孔树脂质量为 :8 : 1。干法上样可以使未溶解的样品与树脂充分混合均匀，吸附的更加充分。上 样体积与大孔树脂质量比值太大树脂吸收饱和且有剩余，浪费浓缩液。上样体积与大孔树脂质量比值太小，大孔树脂利用不完全有浪费。

本发明具有以下优点：

1.本发明提供的马齿苋子总黄酮树脂纯化方法操作简单、快捷；

2. 所选的大孔树脂具有吸附量大、解吸率大的功能；

3.  浓缩液上样的方式是干法上样，使未溶解的样品与树脂充分混合均匀，吸附的 更加充分；

4.  以乙醇为溶剂和洗脱剂，价廉、无毒；

5.  本发明方法纯化马齿苋子，其总黄酮转移率可达 90% 以上，纯化物总黄酮含量可达 55% 以上，且重现性好，树脂可重复使用。

具体实施方式：

为了更好理解本发明的技术方案，以下通过具体的实施例进一步详细描述。

实施例 1

一种马齿苋子总黄酮树脂纯化方法，具体步骤如下:

1) 取粉碎的马齿苋子 50g ，以体积分数为40% 乙醇为溶剂，浸泡 12 小时，以药材质量 10 倍体积量的体积分数为 40% 乙醇为提取剂，加热至回流提取，收集提取液，减压回收 乙醇，得浓缩液；

2) 将提取液浓缩到每毫升含提取物 20mg，选用 D101 大孔树脂，上样体积与大孔树 脂质量比值为 8 : 1 干法上样，上样吸附1. 0 小时，先用 2BV 蒸馆水水洗，水洗流速为 2BV/ h ，然后用3BV 体积分数为 50% 乙醇洗脱，洗脱速度为 2BV/h ；

3) 将收集的乙醇洗脱液，浓缩， 50℃真空干燥，得干燥的纯化产品 3. 58g。

实施例 2     

四种树脂对马齿苋子总黄酮的静态吸附与解吸试验

称取1g干树脂，分别装入 100ml 锥形瓶中，各加入浓度为 10mg/ml  的样品溶液 20ml。每隔 10min 振荡 10s，持续2h，静止24h ，使其达到饱和吸附，抽滤，取滤液1.0ml ，按标准曲线项下操作，求得样品的黄酮含量。按下式计算树脂吸附量：

吸附量=[初始质量浓度 剩余质量浓度 ]×溶液体积/树脂量

将滤出的树脂另置 100ml 锥形瓶中，加入 70% 乙醇 20ml ，每隔10min 振荡 10s，持续2h，抽滤，取滤液1.0ml，按标准曲线项下操作，求得样品的黄酮含量。按下式计算解吸率 (% ) ：

解吸率=[解吸液浓度×解吸液体积]/ 吸附量×100% 

   表 1  四种树脂静态饱和吸附量及静态洗脱率测定结果

通过表 1 可知， D101 和 HPD-400  的解吸率接近，而 HPD-400  的吸附量更大，故选择HPD-400 型吸附树脂。