一种基于高通量靶标代谢组学技术的对BDTT及EHCC快速分型的方法

一种基于高通量靶标代谢组学技术的对BDTT及EHCC快速分型的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及利用代谢组学技术对疾病进行分型方面。

背景技术

本发明是一种适用于对原发性肝癌伴胆管癌栓（BDTT）与胆管癌（EHCC）进行分型的方法。适用于生物医学研究或辅助临床进行两种疾病的诊断。

代谢组学是继基因组学和蛋白质组学之后新近发展起来的一门学科，是系统生物学的重要组成部分。基因组学和蛋白质组学分别从和蛋白质层面探寻生命的活动，而实际上细胞内许多生命活动是与代谢物相关的，如细胞信号（cell signaling），能量传递等都是受代谢物调控的。代谢组学正是研究代谢组（metabolome）——在某一时刻细胞内所有代谢物的集合——的一门学科。基因与蛋白质的表达紧密相连，而代谢物则更多地反映了细胞所处的环境，这又与细胞的营养状态，药物和环境污染物的作用，以及其它外界因素的影响密切相关。因此有人认为，基因组学和蛋白质组学能够说明可能发生的事件，而代谢组学则反映确实已经发生了的事情。

新陈代谢网络是十分复杂的网络，特别是人体的代谢网络，一直被认为是最复杂的代谢网络。现在多数信号通路的研究都是集中在代谢网络的一个很小的领域。基因组学、蛋白组学研究已经揭示了部分调节通路，但是和代谢网络直接相关的是代谢产物。

代谢组学主要研究的是作为各种代谢路径的底物和产物的小分子代谢物（MW<1000）。其样品主要是尿液，血浆或血清，唾液，以及细胞和组织的提取液。主要技术手段是核磁共振（NMR ），液-质联用（LC-MS），气-质联用（GC-MS），谱（HPLC，GC）等。通过检测一系列样品的谱图，再结合化学模式识别方法，可以判断出生物体的病理生理状态，基因的功能，药物的毒性和药效等，并有可能出与之相关的生物标志物（biomarker）。

高通量靶标代谢组学是利用液相谱三重四极杆（LC-QQQ-MS）技术手段，采用质谱多反应检测（multiple reaction monitoring, MRM）技术同时对多种生物标志物进行定量分析，并构建判别分析模型的一门技术。

原发性肝癌伴胆管癌栓（BDTT）除了会与原发性肝癌伴胆管压迫所混淆外，其最容易发生误诊的疾病为胆道的恶性疾病胆管癌（EHCC）。肝癌伴胆管癌栓（BDTT）是肝癌的一个亚型，其病理特点是肝癌细胞在肝实质内生长的同时，还转移进入邻近的胆管内生长，并引起胆道系统不同程度的阻塞，其恶性程度高，总体疗效差，生物学特性与不伴胆管癌栓的肝细胞癌有较大差异。由于胆管癌栓的存在，这类患者也会具有胆道疾病的典型临床表现，所以非常容易误诊为胆管癌等疾病。误诊会导致手术方案设计失误，进而严重影响效果。目前用于鉴别诊断的手段主要是影像学MRCP/ ERCP、B超、肝脏CTMRI、CT等手段。本发明利用高通量的靶标代谢组学技术，构建BDTT与EHCC的分型Golden Model，从而有效的从分子水平对两种疾病进行区分，具有重要的生物学及临床意义。

发明内容

本发明通过前期基础生物学研究，发明了一种基于高通量靶标代谢组学技术的对BDTT及EHCC快速分型的方法。

其实施步骤如下：

步骤一：获取临床BDTT标本37例及EHCC标本31例。

步骤二：采用高通量的靶标代谢组学技术对标本进行检测。

步骤三：通过判别分类模型的反复验证，确定两种疾病分型的Golden Model，确定14个分型因变量。

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步骤四：通过Golden Model对新样本进行预测，从而指导生物医学研究或辅助临床诊断。

附图说明

图1. BDTT和EHCC判别分析模型，BDTT的准确率为100%，EHCC准确率为96.8%。

图2. 判别分析模型200次permutation test。

图3. 判别模型所确定的14个物质。