青鹏膏剂及其制剂的质量标准及检测方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物制剂的质量控制方法及检测方法，特别涉及 青鹏膏剂及其制剂的质量控制方法及其检测方法。

背景技术

青鹏膏剂为藏族传统经典验方，藏文名称“秀巴恰琼恩保”。该药成方 于公元16世纪，始载于五世达赖时期摄政王第司桑杰嘉措所著《藏医医诀补 遗》，迄今已有500多年的藏医临床用药历史，是藏族人民在长期的医疗实践 中摸索出来的止痛消肿良药。青鹏膏剂收载于藏药部颁标准，标准编号为 WS3～BC～0319～95，原料药组成为：镰形棘豆100g、亚大黄50g、铁棒锤 75g、诃子100g、毛诃子100g、余甘子100g、安息香35g、宽筋藤150g、麝 香25g，主要用于痛风、湿痹、“冈巴”、“黄水”病等引起的肿痛发烧， 疱疹，瘟疠发烧等。2001年列入国家基本医疗保险药品目录，但目前尚没有 明确的质量控制标准及检测方法，不能有效的控制产品质量。

发明内容

本发明的目的在于公开青鹏膏剂及其制剂的质量控制方法及其检测方 法。

本发明目的是通过如下技术方案实现：

本发明青鹏膏剂及其制剂的质量控制方法包括如下鉴别和/或含量测定 中的一种或几种：

鉴别：

A、显微鉴别：取本发明药物组合物制剂，加水合氯醛透化1～3次，制 片，置显微镜下观察：草酸钙簇晶众多，属亚大黄里的主要特征结构；韧皮 纤维成束，木化周围薄壁细胞含方晶成晶鞘纤维，为宽筋藤药材中的主要特 征结构；石细胞类圆形或卵形、长方形，孔沟明显，中央有纹孔，油滴浅黄 ，管状厚壁细胞木化，非腺毛1～4细胞，为药材毛诃子中的主要特征结 构；见附图1；

B、薄层鉴别：取本发明药物组合物制剂10～30重量份，加石油醚20～ 60体积份，充分振摇，弃去石油醚，残渣加乙酸乙酯10～30体积份，充分 振摇，取上清液，蒸干，残渣加水10～30体积份溶解，滤过；将滤液蒸干， 残渣加甲醇1～3体积份使溶解，作为供试品溶液；另取余甘子对照药材1～ 3重量份，加甲醇10～30体积份，超声处理20～40分钟，滤过，滤液作为 对照药材溶液；按照薄层谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各 0.01体积份，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为60～90℃石油 醚∶乙酸乙酯∶甲酸＝3～9∶2～6∶3～7的溶液为展开剂，展开，取出，晾干， 在254nm紫外光灯下观察；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上， 显相同颜的荧光斑点；见附图2；

含量测定：按照高效液相谱法：

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体 积比为甲醇∶水∶∶二乙胺＝60～80∶20～40∶2～4∶0.1～0.3的 溶液为流动相；检测波长为235nm；理论塔板数按峰计应不低于1000；

对照品溶液的制备：精密称取对照品，加二氯甲烷制成每1体积 份含0.00010～0.00030重量份地溶液，即得；

供试品溶液的制备：精密称定本发明药物组合物制剂10～30重量份， 加无水乙醇30～70体积份，置水浴上加热回流1～2小时，滤过，残渣用无 水乙醇3～7体积份多次洗涤，至洗净；合并无水乙醇液，挥干，残渣加0.5～ 2％盐酸20～40体积份溶解，置冰浴中放置10～30分钟，滤过，滤液加氨水 调pH至8～12，用乙醚提取两次，每次10～30体积份，合并乙醚提取液， 室温挥去乙醚，残渣用二氯甲烷使溶解并定容至1～3体积份，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各0.02体积份，注入 液相谱仪，测定，即得；

本发明药物组合物膏剂每100重量份含铁棒锤以C34H45O11N计，应 不得超过0.005重量份；

本发明药物组合物口服制剂按日服用剂量含铁棒锤以C34H45O11N 计，应不得超过0.005重量份。

本发明药物组合物制剂的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定中 的一种或几种：

鉴别：

A、显微鉴别：取本发明药物组合物制剂，加水合氯醛透化2次，制片， 置显微镜下观察：草酸钙簇晶众多，属亚大黄里的主要特征结构；韧皮纤维 成束，木化周围薄壁细胞含方晶成晶鞘纤维，为宽筋藤药材中的主要特征结 构；石细胞类圆形或卵形、长方形，孔沟明显，中央有纹孔，油滴浅黄， 管状厚壁细胞木化，非腺毛1细胞，为药材毛诃子中的主要特征结构；见附 图1；

B、薄层鉴别：取本发明药物组合物制剂12重量份，加石油醚35体积 份，充分振摇，弃去石油醚，残渣加乙酸乙酯25体积份，充分振摇，取上 清液，蒸干，残渣加水15体积份溶解，滤过；滤液蒸干，残渣加甲醇2体 积份使溶解，作为供试品溶液；另取余甘子对照药材2重量份，加甲醇25 体积份，超声处理25分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；按照薄层谱 法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各0.01体积份，分别点于同一硅 胶F254薄层板上，以体积比为60～90℃石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸＝8∶3∶6的溶液 为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外光灯下观察；供试品谱中， 在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点；见附图2；

含量测定：按照高效液相谱法：

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体 积比为甲醇∶水∶∶二乙胺＝70∶30∶3∶0.2的溶液为流动相；检 测波长为235nm；理论塔板数按峰计应不低于1000；

对照品溶液的制备：精密称取对照品，加二氯甲烷制成每1体积 份含0.00012重量份的溶液，即得；

供试品溶液的制备：精密称定本发明药物组合物制剂25重量份，加无 水乙醇35体积份，置水浴上加热回流1.5小时，滤过，残渣用无水乙醇4 体积份多次洗涤，至洗净；合并无水乙醇液，挥干，残渣加1.5％盐酸25体 积份溶解，置冰浴中放置25分钟，滤过，滤液加氨水调pH至9，用乙醚提 取两次，每次25体积份，合并乙醚提取液，室温挥去乙醚，残渣用二氯甲 烷使溶解并定容至1体积份，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各0.02体积份，注入 液相谱仪，测定，即得；

本发明药物组合物膏剂每100重量份含铁棒锤以C34H45O11N计，应 不得超过0.005重量份；

本发明药物组合物口服制剂按日服用剂量含铁棒锤以C34H45O11N 计，应不得超过0.005重量份。

本发明药物组合物制剂的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定中 的一种或几种：

鉴别：

A、显微鉴别：取本发明药物组合物制剂，加水合氯醛透化1次，制片， 置显微镜下观察：草酸钙簇晶众多，属亚大黄里的主要特征结构；韧皮纤维 成束，木化周围薄壁细胞含方晶成晶鞘纤维，为宽筋藤药材中的主要特征结 构；石细胞类圆形或卵形、长方形，孔沟明显，中央有纹孔，油滴浅黄， 管状厚壁细胞木化，非腺毛3细胞，为药材毛诃子中的主要特征结构；见附 图1；

B、薄层鉴别：取本发明药物组合物制剂20重量份，加石油醚30体积 份，充分振摇，弃去石油醚，残渣加乙酸乙酯20体积份，充分振摇，取上 清液，蒸干，残渣加水10体积份溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1体 积份使溶解，作为供试品溶液；另取余甘子对照药材1重量份，加甲醇20 体积份，超声处理30分钟，滤过；滤液作为对照药材溶液；按照薄层谱 法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各0.01体积份，分别点于同一硅 胶GF254薄层板上，以体积比为60～90℃石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸＝6∶4∶5的溶 液为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外光灯下观察；供试品谱中， 在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点；见附图2；

含量测定：按照高效液相谱法：

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体 积比为甲醇∶水∶∶二乙胺＝70∶30∶3∶0.2的溶液为流动相；检 测波长为235nm；理论塔板数按峰计应不低于1000；

对照品溶液的制备：精密称取对照品适量，加二氯甲烷制成每体 积份含0.00015重量份的溶液，即得；

供试品溶液的制备：精密称定本发明药物组合物制剂20重量份，加无 水乙醇50体积份，置水浴上加热回流1小时，滤过，残渣用无水乙醇5体 积份多次洗涤，至洗净；合并无水乙醇液，挥干，残渣加1％盐酸30体积份 溶解，置冰浴中放置20分钟，滤过，滤液加氨水调pH至10，用乙醚提取两 次，每次20体积份，合并乙醚提取液，室温挥去乙醚，残渣用二氯甲烷使 溶解并定容至2体积份，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各0.02体积份，注入 液相谱仪，测定，即得；

本发明药物组合物膏剂每100重量份含铁棒锤以C34H45O11N计，应 不得超过0.005重量份；

本发明药物组合物口服制剂按日服用剂量含铁棒锤以C34H45O11N 计，应不得超过0.005重量份。

其中，本发明所述的药物组合物制剂是按《卫生部药品标准》藏药的第 一册中所述的青鹏膏剂制剂的配方，按照常规方法加入常规辅料制成的片 剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓 释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

本发明所述的重量份与体积份的比例为克/毫升。本发明药物组合物质 量控制方法可以应用于组合物的各种剂型，如片剂、胶囊、口服液、滴丸、 喷雾剂、颗粒剂等临床可接受的剂型，由于不同剂型的制剂其中所含的相当 生药量是相同的，因此各个剂型在进行质量控制时，所选用样品量可统一折 算为相当生药量，本质量控制方法中外用膏剂每100重量份含相当生药量 10-50重量份，根据药用部分不同用量有所差异；口服制剂日服用剂量的相 当生药量为2-6g。

本发明所要解决的技术问题在发明一种本发明所述药物组合物制剂的 质量标准，提高产品质量的可控性。并建立了铁棒锤中以C34H45O11N的 限量检查。通过本发明的质量控制，提高了产品稳定性，有利于工业化生产 的质量控制。

下述实验例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例：的限度检查

按照国家对药品质量标准的相关规定，含有毒材的产品应建立相关 成分的限量控制，本发明药物组合物制剂中含有铁棒锤，因铁棒锤为毒 材，主含(C34H45O11N)，故成品中增加了限度检查，以为对照品， 用高效液相谱法测定制剂中的，结果表明，该方法简便可行、灵敏度 高。根据测定结果及进一步积累数据，制定更合理的限度，完善该标准。具体 如下：

1.仪器与材料

SP～1000型高效液相谱仪(美国SP公司)，SP100UV～VIS紫外检测 器，浙江智达N2000谱工作站，3300H型超声波振荡仪，METTLER AE240 电子天平，对照品(中国药品生物制品鉴定所提供，批号：03112～ 005)，供试品(本公司提供)；处方中其他药材由本公司提供，经检验鉴定， 符合原药材质量标准要求。

除甲醇为谱醇外，其余试剂均为分析纯。

2.实验方法与结果

2.1提取方法的选择  由于青鹏膏剂中水溶性基质成分比较大，采用 超声提取无法使基质完全溶解，这就影响了有效成分的提取，结果见表1。

表1  不同提取方法提取结果

通过以上结果比较，回流1小时与回流2小时区别不大，而回流与超声 区别较大。故采用回流1小时提取以提高提取率。

2.2不同溶媒溶解效果比较  标准品采用甲醇及二氯甲烷溶解 后放置24小时比较，甲醇溶解液极不稳定，进样后保留时间提前且杂质峰增 多，二氯甲烷溶解液放置后没有变化，故采用二氯甲烷作为溶媒溶解。

2.3最大吸收波长的选择  在流动相中最大吸收为230nm，但杂 质干扰大，故在235nm处检测。结果见附图3。

2.4供试品溶液的制备  取本发明药物组合物制剂20g，精密称定，加 无水乙醇50ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，残渣用5ml无水乙醇分次 洗涤，合并无水乙醇液，挥干，残渣加1％盐酸30ml溶解，置冰浴中20分钟， 滤过，滤液加氨水调pH至10，用乙醚提取两次，每次20ml，合并乙醚提取 液，室温挥干，残渣加二氯甲烷使溶解并定容至2ml量瓶中，即得。

2.5对照品溶液的制备  精密称取对照品适量，加二氯甲烷制 成每1ml含0.78mg的溶液，即得。

2.6铁棒锤阴性对照液的制备  按处方比例，另取缺铁棒锤的阴性对 照药材，同法制备阴性对照溶液。

2.7谱条件的选择  用十八烷基键合硅胶为填充剂；谱柱： Kromasil～C18柱(4.6×250mm，Zirchrom谱技术中心)；甲醇∶水∶三 氯甲烷∶二乙胺(70∶30∶3∶0.2)为流动相；检测波长为235nm，流速 1.0ml/min；进样体积为20ul，检测器灵敏度1.000mu。

2.8系统适用性试验

2.8.1理论塔板数(n)  n＝5.54(tR/W0.5h)2＝1000

规定理论塔板数应不低于1000。

2.8.2分离度(R)  R＝2(tR2～tR1)/(W1+W2)＝2.1

分离度大于1.5，符合规定要求。

2.8.3拖尾因子(T)  T＝W0.05h/2d1＝0.97

拖尾因子在0.95～1.05之间，符合规定要求。

2.8.4阴性干扰试验  精密吸取供试品溶液、阴性液和对照品溶液各 20ul注入液相谱仪中，由谱图可知，在与对照品谱峰保留时间相应的 位置上，供试品液具有相同保留时间的谱峰出现；而阴性液在此峰位无吸 收，对本发明药物组合物制剂中的含量测定无干扰。见附图4。

2.9标准曲线与线性范围  精密吸取对照品溶液1.0ml、2.0ml、 3.0ml、5.0ml、7.0ml、7.0ml至10ml量瓶中，分别用二氯甲烷制成78.0ug/ml、 156.0ug/ml、234.0ug/ml、390.0ug/ml、546.0ug/ml、780.0ug/ml的对照溶 液，各精密吸取20ul，注入液相谱仪，测定峰面积，结果见附图5。

以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，进行线形回归分析，回归方程 为Y＝6870.2X～343024，r＝0.9991，在78.0～780.0ug/ml范围内呈良 好的线形关系。

2.10精密度试验  精密吸取对照品溶液20ul，注入谱仪，连续进样5 次，测定峰面积，计算相对标准偏差，结果见表2。

表2  精密度试验

2.11重现性试验  取20011105批样品，按样品的制备方法制备6份， 同法制成供试品溶液，测定，记录峰面积，计算相对标准偏差，结果见表3。 结果表明该方法重复性较好，RSD％符合规定。

表3  重现性试验

2.11稳定性试验  取含量测定项下(20011105批)的样品溶液，放置0、 2h、4h、6h、8h、10h、12h，分别测定峰面积，计算相对标准偏差，结果见 表5，表明样品在12小时内稳定。

表4  稳定性试验

2.12加样回收试验  精密称定已知含量的20011105批(0.43mg/100g) 样品6份(每份约20g)，精密加入对照品溶液(78.0ug/ml)1ml，同 样品制备方法和含量测定方法操作，测定峰面积，计算回收率，结果 见表5。

表5  加样回收率试验结果

2.13样品的含量测定  精密吸取供试品溶液20ul，注入液相谱仪， 记录峰面积，计算，即得，结果见表6。

表6  样品含量测定

根据10批样品含量测定结果，本发明药物组合物制剂每100g含 量在0.26～0.78之间，故暂定样品中每100g含铁棒锤以C34H45O11N计， 应不得过1.0mg。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

附图说明：

图1：青鹏膏剂粉末鉴别图；

其中1为草酸钙簇晶、2为晶鞘纤维、3为石细胞、4为管状厚壁细胞、 5为油滴、6为非腺毛。

图2：余甘子薄层谱图；

从左到右斑点依次为样品、样品、样品、余甘子对照药材、余甘子对照 药材、余甘子对照药材、缺余甘子的阴性对照

图3：波长选择图谱；

其中图3-1为235nm波长图谱，图3-2为230nm波长图谱

图4：青鹏膏剂高效液相谱图；

其中图4-1为样品图谱、图4-2为对照品图谱

图4-3为铁棒锤阴性对照图谱、图4-4为铁棒棰药材图谱

图5：对照品浓度与峰面积。

具体实施方式

实施例1：本发明药物组合物膏剂的鉴别方法和含量测定方法

鉴别：

A、显微鉴别：取本发明药物组合物膏剂，加水合氯醛透化1次，制片， 置显微镜下观察：草酸钙簇晶众多，属亚大黄里的主要特征结构；韧皮纤维 成束，木化周围薄壁细胞含方晶成晶鞘纤维，为宽筋藤药材中的主要特征结 构；石细胞类圆形或卵形、长方形，孔沟明显，中央有纹孔，油滴浅黄， 管状厚壁细胞木化，非腺毛4细胞，为药材毛诃子中的主要特征结构；

B、薄层鉴别：取本发明药物组合物膏剂25g，加石油醚25ml，充分振 摇，弃去石油醚，残渣加乙酸乙酯15ml，充分振摇，取上清液，蒸干，残渣 加水25ml溶解，滤过；滤液蒸干，残渣加甲醇约1ml使溶解，作为供试品 溶液。另取余甘子对照药材2g，加甲醇15ml，超声处理30分钟，滤过；滤 液作为对照药材溶液。按照薄层谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶 液各10ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为60～90℃石油醚∶ 乙酸乙酯∶甲酸＝4∶5∶4的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外 光灯下观察。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜 的荧光斑点。

含量测定：按照高效液相谱法测定：

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体 积比为甲醇∶水∶∶二乙胺＝70∶30∶3∶0.2的溶液为流动相；检 测波长为235nm；理论塔板数按峰计应不低于1000。

对照品溶液的制备：精密称取对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml 含0.00020g的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物膏剂15g，精密称定，加无水 乙醇60ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，残渣用无水乙醇6ml多次洗涤， 至洗净；合并无水乙醇液，挥干，残渣加1％盐酸30ml溶解，置冰浴中放置 15分钟，滤过，滤液加氨水调pH至11，用乙醚提取两次，每次12ml，合并 乙醚提取液，室温挥去乙醚，残渣用二氯甲烷使溶解并定容至2ml，摇匀， 即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20ul，注入液相谱 仪，测定，即得。

每100g本发明药物组合物膏剂含生药量10-50g，含铁棒锤以 C34H45O11N计，应不得过0.005g。

实施例2：本发明药物组合物片剂的鉴别方法和含量测定方法

鉴别：

A、显微鉴别：取本发明药物组合物片剂，加水合氯醛透化2次，制片 置显微镜下观察：草酸钙簇晶众多，属亚大黄里的主要特征结构；韧皮纤维 成束，木化周围薄壁细胞含方晶成晶鞘纤维，为宽筋藤药材中的主要特征结 构；石细胞类圆形或卵形、长方形，孔沟明显，中央有纹孔，油滴浅黄， 管状厚壁细胞木化，非腺毛3细胞；

B、薄层鉴别：取本发明药物组合物片剂15g，加石油醚30ml，充分振 摇，弃去石油醚，残渣加乙酸乙酯25ml，充分振摇，取上清液，蒸干，残渣 加水15ml溶解，滤过；滤液蒸干，残渣加甲醇约2ml使溶解，作为供试品 溶液。另取余甘子对照药材1.5g，加甲醇25ml，超声处理25分钟，滤过， 滤液作为对照药材溶液。按照薄层谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材 溶液各10ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为60～90℃石油 醚∶乙酸乙酯∶甲酸＝8∶3∶5的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm 紫外光灯下观察。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同 颜的荧光斑点。

含量测定：

含量测定：按照高效液相谱法

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体 积比为甲醇∶水∶∶二乙胺＝70∶30∶3∶0.2的溶液为流动相；检 测波长为235nm；理论塔板数按峰计应不低于1000。

对照品溶液的制备：精密称取对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml 含0.00015g的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物片剂25g，精密称定，加无水 乙醇40ml，置水浴上加热回流2小时，滤过，残渣用无水乙醇4ml多次洗涤， 至洗净；合并无水乙醇液，挥干，残渣加1.5％盐酸25ml溶解，置冰浴中放 置25分钟，滤过，滤液加氨水调pH至9，用乙醚提取两次，每次25ml，合 并乙醚提取液，室温挥去乙醚，残渣用二氯甲烷使溶解并定容至1ml，摇匀， 即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20ul，注入液相谱 仪，测定，即得。

本发明药物组合物片剂按日服用剂量含铁棒锤以C34H45O11N计，应 不得过0.005g；日服用剂量的相当生药量为2-6g，每片重0.5g，每日口服 4-8片。

实施例3：本发明药物药物组合物口服液的鉴别方法：

A、显微鉴别：取本发明药物组合物口服液，加水合氯醛透化3次，制 片，置显微镜下观察：草酸钙簇晶众多，属亚大黄里的主要特征结构；韧皮 纤维成束，木化周围薄壁细胞含方晶成晶鞘纤维，为宽筋藤药材中的主要特 征结构；石细胞类圆形或卵形、长方形，孔沟明显，中央有纹孔，油滴浅黄 ，管状厚壁细胞木化，非腺毛1细胞；

B、薄层鉴别：取本发明药物组合物口服液25ml，加石油醚25ml，充分 振摇，弃去石油醚，残渣加乙酸乙酯15ml，充分振摇，取上清液，蒸干，残 渣加水25ml溶解，滤过；滤液蒸干，残渣加甲醇约1.5ml使溶解，作为供 试品溶液。另取余甘子对照药材2g，加甲醇15ml，超声处理30分钟，滤过， 滤液作为对照药材溶液。按照薄层谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材 溶液各10ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为60～90℃石油 醚∶乙酸乙酯∶甲酸＝4∶5∶4的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm 紫外光灯下观察。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同 颜的荧光斑点。

实施例4：本发明药物组合物颗粒剂的含量测定方法

含量测定：按照高效液相谱法测定：

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体 积比为甲醇∶水∶∶二乙胺＝70∶30∶3∶0.2的溶液为流动相；检 测波长为235nm；理论塔板数按峰计应不低于1000。

对照品溶液的制备：精密称取对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml 含0.00025g的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物颗粒剂15g，精密称定，加无 水乙醇60ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，残渣用无水乙醇6ml多次 洗涤，至洗净；合并无水乙醇液，挥干，残渣加1％盐酸30ml溶解，置冰浴 中放置15分钟，滤过，滤液加氨水调pH至10，用乙醚提取两次，每次12ml， 合并乙醚提取液，室温挥去乙醚，残渣用二氯甲烷使溶解并定容至2ml，摇 匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20ul，注入液相谱 仪，测定，即得。

本发明药物组合物颗粒剂按日服用剂量含铁棒锤以C34H45O11N计， 应不得过0.005g，日服用剂量为10g，日服用剂量的相当生药量为2-6g。

实施例5：本发明药物组合物胶囊制剂的鉴别方法：

A、显微鉴别：取本发明药物组合物胶囊制剂，加水合氯醛透化2次， 制片，置显微镜下观察：置显微镜下观察：草酸钙簇晶众多，属亚大黄里的 主要特征结构；韧皮纤维成束，木化周围薄壁细胞含方晶成晶鞘纤维，为宽 筋藤药材中的主要特征结构；石细胞类圆形或卵形、长方形，孔沟明显，中 央有纹孔，油滴浅黄，管状厚壁细胞木化，非腺毛3细胞；

B、薄层鉴别：本发明药物组合物胶囊制剂15g，加石油醚340ml，充分 振摇，弃去石油醚，残渣加乙酸乙酯20ml，充分振摇，取上清液，蒸干，残 渣加水20ml溶解，滤过；滤液蒸干，残渣加甲醇约2ml使溶解，作为供试 品溶液。另取余甘子对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理300分钟，滤过， 滤液作为对照药材溶液。按照薄层谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材 溶液各10ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为60～90℃石油 醚∶乙酸乙酯∶甲酸＝5∶4∶5的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm 紫外光灯下观察。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同 颜的荧光斑点。