一种狼疮性肾炎的中药组合物及其用途

一种狼疮性肾炎的中药组合物及其用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种狼疮性肾炎的中药组合物及其用途。

背景技术

狼疮性肾炎是指系统性红斑狼疮(SLE)合并双肾不同病理类型的免疫性损害，同时伴 有明显肾脏损害临床表现的一种疾病。其发病与免疫复合物形成、免疫细胞和细胞因子等 免疫异常有关。除SLE全身表现外，临床主要表现为血尿、蛋白尿、肾功能不全等。它是 一种多因素包括遗传、性激素、环境、感染、药物、免疫反应等参与的特异性自身免疫病。 上述多种因素相互作用，引起机体免疫系统紊乱，其中最重要的特征是产生抗核抗体等多 种自身抗体，后者与抗原形成免疫复合物，并伴有免疫细胞、细胞因子等免疫异常，这是 SLE多组织、器官损伤的共同机制。

狼疮性肾炎的发病机制可能与以下因素有关：①循环免疫复合物在肾脏沉积；②原位 免疫复合物形成；③局部补体激活；④自身抗体的直接作用；⑤T细胞介导的免疫反应等。 狼疮性肾炎的全身表现为间断发热，颧部红斑(蝶形红斑)，盘状红斑，光过敏，口腔溃疡， 关节炎，浆膜炎，神经系统异常(抽搐或精神病)。肾脏表现为单纯性血尿或蛋白尿，血尿、 蛋白尿伴水肿、腰酸或高血压，即肾炎样表现；大量蛋白尿、低蛋白血症、水肿，即肾病 综合征样表现；血尿、蛋白尿伴肾功能急剧减退，呈急进性肾炎表现；肾间质病变；慢性 肾功能衰竭。

狼疮性肾炎目前仍是一种原因未明性疾病，的主要目的在于控制LN的活动，保护 肾脏功能，延缓肾组织纤维化的进程。对于靶器官功能正常或稳定的轻型SLE及狼疮性肾 炎患者，酌情用非甾体类抗炎药或抗疟药，可短期使用中、小剂量糖皮质激素(如强的松 20～40mg/d)，必要时加用免疫抑制剂。对于重要靶器官出现明显损伤的重型SLE及狼疮性 肾炎患者，肾小球肾炎持续不缓解、急进性肾小球肾炎、肾病综合征患者，应给予标准激 素(泼尼松1g/kg/d)以及免疫抑制剂，对于急性危及生命的重型狼疮患者应给予 激素冲击(甲泼尼龙0.5～1.0g/d)。当上述方法效果欠佳或病情较重时，可考虑血浆置 换疗法。伴有急性严重肾功能不全、严重高血容量、心力衰竭时应紧急透析，使其渡过危 险期。因此，总体而言目前临床上尚缺乏疗效可靠的药物，祖国医学在狼疮性肾 炎方面积累了丰富的临床经验，本发明旨在提供一种疗效确切地狼疮性肾炎药物。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明提供了一种狼疮性肾炎的中药组合物其疗效显 著、安全可靠，具有广阔的临床应用前景。

本发明的技术方案为：

一种狼疮性肾炎的中药组合物，该中药组合物由下列重量份的原料制成：女贞子 淫羊藿10-12份、天竺葵5-8份、大黄6-9份、金银花3-5份、鸢尾花10-12份、山海棠10-12 份、牛膝3-5份、制何首乌3-5份、黄连10-12份、怀地黄8-10份、远志6-9份、葛根10-12 份、赤芍提取物10-12份、延胡索10-12份、茯苓12-15份、茵陈9-12份，其中赤芍提取物 的制备方法为：取赤芍干燥品粉碎后过筛，使用50％的丙酮水溶液回流提取2h，过滤，滤 渣再用50％的丙酮水溶液回流提取两次，合并提取液，离心后将上清液减压浓缩至相对密 度1.05-1.10的浸膏，浸膏烘干至恒重后粉碎，即得赤芍提取物。

根据上述所述中药组合物对狼疮性肾炎患者的效果，所述的中药组合物由下列重 量份的原料制成：淫羊藿11份、天竺葵7份、大黄7份、金银花4份、鸢尾花11份、山 海棠11份、牛膝4份、制何首乌4份、黄连11份、怀地黄9份、远志8份、葛根11份、 赤芍提取物11份、延胡索11份、茯苓13份、茵陈10份。

上述所述的中药组合物中，还可以含有百合5-8份和菊花12-15份。该两中中药可以进 一步增强本发明上述中药组合物对狼疮性肾炎的效果。

本发明还提供了一种上述所述中药组合物的制备方法，其主要包含下述步骤：取处方 量上述中药材碎成粗粉，按照粗粉总重量的4～9倍加入体积浓度为40％～95％的乙醇溶液， 回流提取三次，回流时间为2～5h，滤过，滤液回收乙醇，冷却过滤，用水洗涤，干燥后即 得中药浸膏；将其粉碎制成干膏粉后加入处方量的赤芍提取物，即可得到本发明中药组合 物。本领域技术人员可在该制备方法技术上制备得到临床上常用中药药物剂型，优选地， 本发明中药组合物可以进一步制备成散剂、水剂、片剂或胶囊剂。

本发明还请求保护上述中药组合物在制备狼疮性肾炎药物中的用途。本发明实施 例7表明在T淋巴细胞亚分析试验中，与SLE模型组相比，本发明能使SLE样小鼠下降 的CD3+CD4+T细胞上升，使上升的CD3+CD8+T下降，纠正T细胞亚的失衡状态；在 血清IL-10、抗ds-DNA抗体含量测定试验中，与SLE模型组相比，本发明能显著降低SLE 小鼠血清IL-10和抗ds-DNA抗体水平的升高，其中中药组合物中剂量组与正常对照组无显 著性差异，说明本发明的药物对于SLE小鼠效果显著；在尿微量白蛋白的测定试验中， SLE模型组白蛋白含量明显升高，反映SLE小鼠肾脏有损伤，本发明能显著降低SLE小鼠 尿液中白蛋白的含量，中药组合物低、中剂量组效果尤为显著，优于阳，并且中药组 合物低、中剂量组与正常对照组无显著性差异，表明本发明的药物对于SLE小鼠肾脏损伤 具有突出的效果。

本发明中药组合物狼疮性肾炎的有效率高，疗效确切，适合狼疮性肾炎患者服用。

本发明中药组合物在狼疮性肾炎方面，与现有技术相比具有如下优势：

1)与当前的化学药物相比，本发明中药组合物为天然纯中药制剂，不良反应 和副作用显著降低，且本发明中药组合物作用全面，药物效果更佳，并提高了患者的 生活质量。

2)本发明中药组合物中含有多种药物组分，作用靶点众多，药理实验显示其在改善狼 疮性肾炎症状的同时，还可以调节免疫细胞的紊乱，从而对狼疮性肾炎起到标本兼治的作 用，且本发明中药组合物易于制备，费用低，患者的用药依从性高。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步描述本发明，但本领域技术人员应该知晓，所述实施例并 不以任何方式限制本发明。下述实施例中，赤芍提取物的制备方法为：取赤芍干燥品粉碎 后过筛，使用50％的丙酮水溶液回流提取2h，过滤，滤渣再用50％的丙酮水溶液回流提取 两次，合并提取液，离心后将上清液减压浓缩至相对密度1.05-1.10的浸膏，浸膏烘干至恒 重后粉碎，即得赤芍提取物。

(一)制剂实施例部分

实施例1本发明中药组合物及制备工艺

中药组分的重量份：淫羊藿10份、天竺葵5份、大黄6份、金银花3份、鸢尾花10 份、山海棠10份、牛膝3份、制何首乌3份、黄连10份、怀地黄8份、远志6份、葛根 10份、赤芍提取物10份、延胡索10份、茯苓12份、茵陈9份

取处方量上述中药材碎成粗粉，按照粗粉总重量的4～9倍加入体积浓度为40％～95％ 的乙醇溶液，回流提取三次，回流时间为2份～5h，滤过，滤液回收乙醇，冷却过滤，用 水洗涤，干燥后即得中药浸膏；将其粉碎制成干膏粉后加入处方量的赤芍提取物，即可得 到本发明中药组合物。本领域技术人员可在该制备方法技术上制备得到临床上常用中药药 物剂型，如片剂、胶囊剂等。

实施例2本发明中药组合物及制备工艺

中药组分的重量份：淫羊藿12份、天竺葵8份、大黄9份、金银花5份、鸢尾花12 份、山海棠12份、牛膝5份、制何首乌5份、黄连12份、怀地黄10份、远志9份、葛根 12份、赤芍提取物12份、延胡索12份、茯苓15份、茵陈12份。

制备方法同实施例1。

实施例3本发明中药组合物及制备工艺

中药组分的重量份：淫羊藿11份、天竺葵7份、大黄7份、金银花4份、鸢尾花11 份、山海棠11份、牛膝4份、制何首乌4份、黄连11份、怀地黄9份、远志8份、葛根 11份、赤芍提取物11份、延胡索11份、茯苓13份、茵陈10份。

制备方法同实施例1。

实施例4本发明中药组合物及制备工艺

中药组分的重量份：淫羊藿10份、天竺葵5份、大黄6份、金银花3份、鸢尾花10 份、山海棠10份、牛膝3份、制何首乌3份、黄连10份、怀地黄8份、远志6份、葛根 10份、赤芍提取物10份、延胡索10份、茯苓12份、茵陈9份、百合5份、菊花13份

制备方法同实施例1。

实施例5本发明中药组合物及制备工艺

中药组分的重量份：淫羊藿12份、天竺葵8份、大黄9份、金银花5份、鸢尾花12 份、山海棠12份、牛膝5份、制何首乌5份、黄连12份、怀地黄10份、远志9份、葛根 12份、赤芍提取物12份、延胡索12份、茯苓15份、茵陈12份、百合8份、菊花12份。

制备方法同实施例1。

实施例6本发明中药组合物及制备工艺

中药组分的重量份：淫羊藿11份、天竺葵7份、大黄7份、金银花4份、鸢尾花11 份、山海棠11份、牛膝4份、制何首乌4份、黄连11份、怀地黄9份、远志8份、葛根 11份、赤芍提取物11份、延胡索11份、茯苓13份、茵陈10份、百合6份、菊花15份。

制备方法同实施例1。

(二)药效实施例部分

实施例7中药组合物注射剂对系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠的影响

1.实验材料

1.1实验动物及分组

8周龄系统性红斑狼疮(SLE)MRL/lpr小鼠50只，雌性，由上海斯莱克实验动物有 限公司提供，适应性饲养一周后，按体重随机分为5组，每组10只。ICR小鼠10只，雌 性，作为正常对照组小鼠。

正常对照组：灌胃给予溶剂；

SLE模型组：灌胃给予溶剂；

泼尼松组：灌胃给予5mg/kg；

中药组合物低剂量组：灌胃给予本发明实施例1制备的药物0.5g/kg；

中药组合物中剂量组：灌胃给予本发明实施例1制备的药物1g/kg；

中药组合物高剂量组：灌胃给予本发明实施例1制备的药物4g/kg。

所有试验组每天给药1次，连续给药3周，于给药结束时取血备用，摘取脾脏。

1.2试剂

(1)IL-10、抗ds-DNA抗体试剂盒购自上海柯丰生物试剂有限公司，

(2)PBS:称取下列试剂8.5g NaCl，0.2g KCl，2.85g Na₂HPO₄·12H₂O，0.27g KH₂PO₄， 用1L双蒸水定容，以上试剂均是为市售分析纯

(3)红细胞裂解液:先配制0.83％NH₄Cl，再配制tris溶液(称取tris 20.594g溶于 500-700ml蒸馏水中，再用1M HCl调pH 7.65至1L)，把0.83％NH₄Cl与tris溶液按9:1比 例混合后即得。

(4)抗小鼠荧光标记单克隆抗体CD3(FITC)，为Beckman Coulter公司产品

(5)抗小鼠荧光标记单克隆抗体CD4(PE)、CD8a(PE)，Caltag laboratories产品

2.实验方法

2.1T淋巴细胞亚分析

脾细胞单细胞悬液的制备：把小鼠的脾脏放入盛有冷PBS液的培养皿中清洗，用玻璃 匀浆器中加入3mlPBS研磨，再用200目不锈钢网过滤，把脾匀浆液离心以转速1500rpm/min 离心7分钟，弃上清液，并加入红细胞裂解液2.5ml，混匀，静置2分钟后再加入PBS液 2ml终止裂解反应，再以1500rpm/min离心7分钟，弃去上清液，用PBS洗三次后加入PBS， 在荧光显微镜下计算细胞数。以上的操作均需在冰上。

用以上脾细胞单细胞悬液，计细胞数后，把细胞浓度调整浓度为5×10⁶cells/ml。每一 组取其中一只小鼠脾细胞样本做亚分析，把已调整浓度的小鼠脾细胞样本加入流式细胞 分析专用管，每只小鼠脾细胞样本制备两管，每管加入样本100μl。

在含有样品专用管的第一管加5μlCD3(FITC)和3μlCD4(PE)，第二管加5μl CD3(FITC) 和3μl CD8(PE)。室温闭光孵育20min，各管加入500μl鞘液，振荡混匀。准备上机分析。

2.2血清IL-10、抗ds-DNA抗体含量测定

按试剂盒操作说明操作即可。

2.3尿微量白蛋白的测定：

实验试剂：10％(v/v)的冰醋酸溶液(PH2.8)；0.303mol/L甘氨酸-冰醋酸缓冲液(PH3.0)： 称取22.72g甘氨酸，用10％冰醋酸溶液稀释成1000ml，加NaN₃100mg，室温密封可稳定1 年；溴酚蓝(1.924mmol/L)贮存液：精确称取257、36mgBPB，用无水乙醇溶至200ml，4℃ 冰箱可稳定1年；溴酚蓝(0.231mmol/L)显剂：取60mlBPB贮存液，加入2.5mlTriton X-100， 用甘氨酸-冰醋酸缓冲液稀释至500ml，室温密封可保存1年。

标本的采集和检测：于第20天将小鼠分别放于代谢笼中饲养，收集隔夜12小时尿， 准确记录尿量。叠氮钠处理后，离心(2000r/min)10min，量取储存的小鼠尿液2ml，各加 显剂1ml，混匀(防止产生气泡)，用紫外分光光度计于600nm下测定吸光度A。吸光度 A反映尿微量白蛋白的含量大小，A值越小，尿微量白蛋白含量越低。

实验数据按照以下方法进行统计学处理：采用SPSS10.0统计软件，计算数据以均数± 标准差()表示，多组资料比较采用方差分析，组内比较采用t检验。以p<0.05为有 统计学意义。

3.实验结果

3.1本发明对SLE小鼠T淋巴细胞亚的影响

CD3+CD4+淋巴细胞是辅助性T细胞(Th)，CD3+CD8+淋巴细胞主要起抑制性调节作 用，SLE小鼠模型组CD3+CD4+淋巴细胞水平比正常对照组的下降，SLE小鼠模型组 CD3+CD8+淋巴细胞水平比正常对照组的上升，本发明能使SLE小鼠下降的CD3+CD4+T 细胞上升，使上升的CD3+CD8+T下降，其中中药组合物中剂量组效果较好，这表明，本 发明的药物能够纠正SLE小鼠T细胞亚的失衡状态。试验结果见表1。

表1本发明对SLE小鼠T淋巴细胞亚的影响

组别 CD3 ⁺CD4 ⁺(％) CD3 ⁺CD8 ⁺(％)

正常对照组 14.80 4.00

SLE模型组 12.00 6.80

泼尼松组 12.50 6.60

中药组合物低剂量组 13.90 4.90

中药组合物中剂量组 14.20 4.20

中药组合物高剂量组 13.30 5.40

3.2本发明对血清IL-10、抗ds-DNA抗体含量的影响

与正常对照组比较，SLE模型小鼠的IL-10和抗ds-DNA抗体水平明显升高，与SLE 模型组相比，本发明能显著降低SLE小鼠血清IL-10和抗ds-DNA抗体水平，其中中药组 合物低、中剂量组效果尤为显著，优于阳，其中中药组合物中剂量组与正常对照组无 显著性差异。这表明，本发明的药物对于SLE小鼠效果显著。试验结果见表2。

表2本发明对SLE小鼠血清IL-10、抗ds-DNA抗体含量的影响

^*与正常对照组相比，p<0.05；^**与正常对照组相比，p<0.01；

^#与SLE模型组相比，p<0.05；^##与SLE模型组相比，p<0.01。

3.3本发明对SLE小鼠尿微量白蛋白含量的影响

微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质，正常对照组尿液中仅出现极少量白蛋白，SLE 模型组白蛋白含量明显升高，反映SLE小鼠肾脏有损伤；与模型组相比，本发明能显著降 低SLE小鼠尿液中白蛋白的含量，中药组合物低、中剂量组效果尤为显著，优于阳， 并且中药组合物低、中剂量组与正常对照组无显著性差异。这进一步表明，本发明的药物 对于SLE小鼠肾脏损伤具有突出的效果。试验结果见表3。

表3本发明对SLE小鼠尿微量白蛋白含量的影响()

组别 吸光度A(OD)

正常对照组 0.087±0.016

SLE模型组 0.785±0.214 ^**

泼尼松组 0.416±0.113 ^*#

中药组合物低剂量组 0.189±0.081 ^##

中药组合物中剂量组 0.177±0.049 ^##

中药组合物高剂量组 0.481±0.205 ^*#

^*与正常对照组相比，p<0.05；^**与正常对照组相比，p<0.01；

^#与SLE模型组相比，p<0.05；^##与SLE模型组相比，p<0.01。

在T淋巴细胞亚分析试验中，与SLE模型组相比，本发明能使SLE样小鼠下降的 CD3+CD4+T细胞上升，使上升的CD3+CD8+T下降，纠正T细胞亚的失衡状态；在血 清IL-10、抗ds-DNA抗体含量测定试验中，与SLE模型组相比，本发明能显著降低SLE 小鼠血清IL-10和抗ds-DNA抗体水平的升高，其中中药组合物中剂量组与正常对照组无显 著性差异，说明本发明的药物对于SLE小鼠效果显著；在尿微量白蛋白的测定试验中， SLE模型组白蛋白含量明显升高，反映SLE小鼠肾脏有损伤，本发明能显著降低SLE小鼠 尿液中白蛋白的含量，中药组合物低、中剂量组效果尤为显著，优于阳，并且中药组 合物低、中剂量组与正常对照组无显著性差异，表明本发明的药物对于SLE小鼠肾脏损伤 具有突出的效果。