一种用于脑血栓发作后恢复期的中药组合物

一种用于脑血栓发作后恢复期的中药组合物

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种用于脑血栓发作后恢复期的中药组合物及其 制备方法。

背景技术

缺血性脑血管病是指局部脑组织包括神经细胞、胶质细胞及联系纤维由于供血障碍发 生的变性、坏死或一过性的功能丧失。血管内血栓形成、栓塞、血管狭窄导致的脑动脉阻 塞是缺血性脑卒中的主要原因。缺血引起脑神经细胞损伤和死亡的作用机制多样、复杂， 缺血性脑卒中(即脑缺血)后，由于脑部缺乏血液和氧气的供应，导致大脑能量代谢失衡， 产生一系列病理性损伤，如氧化应激、兴奋性氨基酸毒性、钙超载、炎症反应等，从而导 致神经元的大量死亡。脑血栓是临床上的常见病、多发病，死亡率及致残率很高，现已经 成为世界公认的三大致死疾病之一。临床上主要是溶栓、挽救缺血区域(半暗带)的濒 临死亡的神经元和促进损伤后神经功能的恢复。防治缺血性脑血管疾病是目前人类迫切需 要解决的医学难题。

目前美国FDA仅批准了组织纤溶酶原活化因子(tPA)用于中风后的溶栓，但其治 疗时间窗很窄，只有在中风4.5小时内使用才有效；而且还存在出血以及缺血再灌加重脑 损伤的危险性。而目前针对缺血性中风的神经保护药包括钙通道阻断剂如尼莫地平、 谷氨酸受体拮抗剂如地佐环平(dizocilPine)、抗氧化剂或自由基清除剂如依达拉奉、NO信 号传导通路调节剂芦贝鲁哩(Iubeluzole)以及炎症抑制剂恩莫单抗(enlimomab)等。但它们 中有的作用不确切或特异性不强，有的毒副作用较大、耐受性小，有的还处于临床前 或临床研究阶段，很难在防治缺血性脑卒中发挥积极影响。因而，研发出快速有效、安全 稳定的防治脑缺血药物迫在眉睫。在此领域中医药发挥了不可忽视的积极作用。

纵观世界新药的研究方向，80年代以前主要是研究开发单一的化学药物及其制剂，80 年代以后开始发展生物技术和天然植物药物，药物研究方向趋于多样性。结合现代中医药 发展理论，从提高药物疗效、降低副作用的角度出发，经过对中药成分进行筛选提取和/或 配伍制得的制剂，其副作用小，安全性高，具有化学合成药不能比拟的优势。

发明内容

现有技术中化学药物治标不治本，且容易损伤胃肠道粘膜，药物毒副作用大，而中 药则存在疗效不确定，缺少相应药物制剂。为了克服现有脑血栓化学药物毒副作用大， 脑血栓效果难以持续的现有技术不足，本发明提供了一种用于脑血栓发作后恢复期治 疗的中药组合物，该中药组合物疗效好，副作用小，它主要由以下原料制得：桂枝10-50 份，赤芍10-20份，桑枝5-20份，牛膝5-15份，陈皮5-10份，银杏叶5-15份，仙茅5-15 份，丹参1-10份，枸杞5-15份，吴茱萸9-15份，葛根9-15份，麦冬5-15份，三七提取 物0.2-9份，生地5.5-15份，蒲黄6-9份，甘草10-15份,其中三七提取物的制备方法为： 取三七干燥品粉碎后过筛，使用50％的丙酮水溶液回流提取2h，过滤，滤渣再用50％的丙 酮水溶液回流提取两次，合并提取液，离心后将上清液减压浓缩至相对密度1.05-1.10的浸 膏，浸膏烘干至恒重后粉碎，即得三七提取物。

本发明中药组合物在中药组分选择上以活血化瘀为主要标准，本发明中药组合物组合 后具有显著的抗炎和活血化淤效果。本发明对上述诸味中药的重量份数进行了优选，优选 的条件是中西药配伍使用后药物对脑血栓效果的增强。作为本发明的一个优选实施例， 本发明中药组合物主要由以下重量份的原料制得：桂枝30份，赤芍15份，桑枝15份，牛 膝10份，陈皮8份，银杏叶10份，仙茅10份，丹参6份，枸杞10份，吴茱萸12份，葛 根12份，麦冬10份，三七提取物5.5份，生地10份，蒲黄8份，甘草12份。

优选地，本发明的中药组合物还进一步含有丁香5份，紫草9份。上述两味中药的加 入可以进一步增强本发明中药组合物对脑血栓的效果。

为了更好地表达本发明的中药组合物，本发明的中药组合物可以制备成临床上常用的 剂型。比如，粉状制剂、散剂、丸剂、丹剂、膏剂、颗粒剂、口服液、糖浆、片剂、胶囊 剂等制剂。优选地，本发明中药组合物按照常规制备工艺制备成合剂、片剂或胶囊剂。

本发明还提供了一种上述所述中药组合物的制备方法，其主要包含下述步骤：取处方 量上述中药材碎成粗粉，按照粗粉总重量的4～9倍加入体积浓度为40％～95％的乙醇溶液， 回流提取三次，回流时间为2～5h，滤过，滤液回收乙醇，冷却过滤，用水洗涤，干燥后即 得中药浸膏；将其粉碎制成干膏粉后加入处方量的三七提取物即可得到本发明中药组合物。 本领域技术人员可在该制备方法技术上制备得到临床上常用中药药物剂型，如片剂、胶囊 剂等。

本发明还请求保护上述中药组合物在制备用于脑血栓发作后恢复期药物中的用 途。本发明药物组合物在用于脑血栓发作后恢复期时，显示出显著的抗炎镇痛、活血 化淤活性。本发明药效实施例19显示，与模型组比较，本发明中药组合物低中高三个剂量 组均可以显著降低二甲苯所致小鼠的耳肿胀值(P＜0.01)，表明本发明中药组合物具有显著 抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀的作用，且其对耳肿胀的降低效果存在显著的量效关系。同 样实验条件下，阳性对照药血栓通胶囊组也显著降低耳肿胀值(P＜0.05)，但其抗炎效果明 显不及本发明中药组合物。本发明本发明药效实施例20显示，模型组与正常对照比较，全 血低切指数、红细胞聚集指数、卡松粘度和血浆粘度均有显著增高(P<0.05)。与模型组比 较，本发明中药组合物低、中、高各个剂量组均显著或极显著地降低了全血低切指数、红 细胞聚集指数、卡松粘度和血浆粘度，降低幅度存在量效关系，其中高剂量有显著差异 (P<0.05)。同样实验条件下，阳性对照药天欣泰心脉宁片组也降低了全血高切指数、全血 低切指数、红细胞聚集指数，但其对血液流变学指数的改善效果均不及本发明中药组合物。。

总之，本发明药物组合物在用于脑血栓发作后恢复期方面，与现有技术相比具有 如下优势：

1)与阳性对照药天欣泰心脉宁片或血栓通胶囊相比，本发明药物组合物中药物成分不 仅在抗炎和镇痛方面更为显著，而且在活血化淤方面也显著优于阳物，这表明本发明 组合物在脑血栓中具有显著的协同作用，不仅能够显著改善脑血栓的症状，还能延缓 脑血栓的发展，有助于脑血栓患者的痊愈过程。

2)与当前用于脑血栓发作后恢复期的化学药物相比，本发明中药组合物为天 然纯中药制剂，不良反应和副作用显著降低，特别是其对于肠道黏膜不产生任何破坏作用， 且本发明中药组合物作用全面，药物效果更佳，显著提高了脑血栓患者的用药依从性， 并提高了患者的生活质量。

3)现有的化学药物在脑血栓初期效果尚可，但随着时间的延长均出现明 显的药物耐受问题，其对于脑血栓的效果下降。本发明中药组合物中含有多种药物组 分，作用靶点众多，有效地解决了脑血栓药物的耐受问题，其对脑血栓的效果不 因时间延长而下降。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步描述本发明，本发明不仅仅限于以下实施例。在本发明的 范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明进行的变更、组合或替换， 对于本领域的技术人员来说是显而易见的，且包含在本发明的范围之内。下述实施例中， 三七提取物的制备方法为：取三七干燥品粉碎后过筛，使用50％的丙酮水溶液回流提取2h， 过滤，滤渣再用50％的丙酮水溶液回流提取两次，合并提取液，离心后将上清液减压浓缩 至相对密度1.05-1.10的浸膏，浸膏烘干至恒重后粉碎，即得三七提取物。

第一部分 本发明中药组合物制剂、制备及其使用方法

实施例1-6 中药组合物合剂

表1 本发明中药组合物合剂处方

实施例1制备方法：取处方中各药材，按照常规中药煎煮工艺操作，滤除药渣后加入 处方量的三七提取物即得。该合剂(或称汤剂)用于脑血栓时，每日服用2-3次。实施 例2-6制备方法和使用方法同实施例1。

实施例7-12 本发明中药组合物片剂/胶囊剂

表2 本发明中药组合物片剂/胶囊剂处方

实施例7制备工艺：取处方量的各中药材粉碎成粗粉，按照粗粉总重量的5倍加入体 积浓度为80％的乙醇溶液，回流提取三次，回流时间每次3h，滤过，滤液回收乙醇，冷却 过滤，用水洗涤，干燥后即得中药浸膏；将中药浸膏经干燥、粉碎制成干膏粉，向干膏粉 中加入处方量的三七提取物，再加入常规辅料成分利用现有技术制备成片剂或胶囊剂。

实施例8-12制备工艺同实施例7。

第二部分 本发明中药组合物药效学研究

实施例13 本发明中药组合物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

取健康ICR小鼠72只，♀♂各半，分6组，12只/组，即模型组、天欣泰心脉宁片(海 南三叶制药厂有限公司，下同)、血栓通胶囊组(海口康力元制药有限公司)、本发明中药 组合物(按实施例1所述中药组合物处方和制备工艺制得)低剂量组、中剂量组和高剂量 组。每只ig给药1次/d；给药14d，末次药后60min，小鼠右耳均匀涂抹二甲苯0.03mL/ 只致肿，2h后剪下双耳打耳片称重，计算耳肿胀值(mg)。肿胀值＝右耳重量-左耳重量。

结果显示，与模型组比较，本发明中药组合物低中高三个剂量组均可以显著降低二甲 苯所致小鼠的耳肿胀值(P＜0.01)，表明本发明中药组合物具有显著抑制二甲苯诱导的小鼠 耳肿胀的作用，且其对耳肿胀的降低效果存在显著的量效关系。同样实验条件下，阳性对 照药血栓通胶囊组也显著降低耳肿胀值(P＜0.05)，但其抗炎效果明显不及本发明中药组合 物。

表3 本发明中药组合物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

实施例14 本发明中药组合物对大鼠血瘀模型的改善作用

取健康SD大鼠，体重180-200g，70只，雌雄各半，按体重随机分为7组：正常对照 组、模型组、天欣泰心脉宁片组、血栓通胶囊组、以及本发明中药组合物(按实施例1所 述中药组合物处方和制备工艺制得)低、中、高组，每组10只。灌胃给药，连续给药14 天，正常对照组和模型组给0.5％CMC，其余给对应的药物，给药剂量如表14所示。给药 第13天、14天，除正常对照组外，其余组动物按1mg/Kg皮下注射盐酸肾上腺素，2次/ 天，间隔4h，第一次注射后2h将动物放进4℃冰水中15min。给药第15天取4-5ml血肝素 抗凝测定血液流变学参数，取肝脏称重折算脏器系数。

结果显示，模型组与正常对照比较，全血低切指数、红细胞聚集指数、卡松粘度和血 浆粘度均有显著增高(P<0.05)。与模型组比较，本发明中药组合物低、中、高各个剂量组 均显著或极显著地降低了全血低切指数、红细胞聚集指数、卡松粘度和血浆粘度，降低幅 度存在量效关系，其中高剂量有显著差异(P<0.05)。同样实验条件下，阳性对照药天欣泰 心脉宁片组和血栓通胶囊组也降低了全血高切指数、全血低切指数、红细胞聚集指数，但 其对血液流变学指数的改善效果均不及本发明中药组合物。肝脏指数的结果统计显示，模 型组与正常对照比较，肝脏指数显著增高。而与模型组比较，本发明中药组合物低、中、 高各个剂量组显著降低了肝脏指数(P<0.01)，阳性对照药天欣泰心脉宁片和本发明中药组 合物本发明中药组合物高剂量组能够显著的降低肝脏指数(P<0.05)，但效果不及本发明中 药组合物。

表4 本发明中药组合物对大鼠血瘀模型血流变的影响

注：与正常对照比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

实验例15：本发明中药组合物对RHRSP脑血栓后血脑屏障(BBB)通透性的影响

1试验方法

2.1.1动物模型的制备：

取2～3个月龄、体重(100±20)g的雄性SD大鼠用双肾双夹法狭窄肾动脉建立RHRSP 模型：大鼠腹腔麻醉，经剑突下腹正中纵行约5cm长切口，切开皮肤、腹肌，钝性分离双 侧肾动脉，用内径为0.3mm的环形银夹分别夹住双侧肾动脉起始部。于手术前测血压一次， 手术后每周测一次，连续12周。另取10只体重相当的SD大鼠，测其血压作为正常对照。 剔除：手术中及术后死亡，术后12周血压低于160mmHg大鼠，有卒中症状及体征、解剖 见左基底节区小的软化灶及蛛网膜下腔出血的大鼠。16周后血压≥160mmHg、且无脑卒中 症状的RHRSP为成功模型。将制备成功的RHRSP用光化学方法造成大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型致大脑中动脉(MCA)血栓形成：2％钠按40mg/kg体重腹腔注射麻醉 后，经左颞侧入路，在颧弓和颞骨鳞部结合处前下方1mm处，用牙科钻钻一直径为5mm 的骨窗，透过硬脑膜可清楚看到左MCA主干及其分支。经股静脉按40mg/kg体重的剂量注 射2.5％虎红，5min后用YAG激光仪发生的532nm的绿激光束(光斑直径2mm，光照强 度0.37W)持续照射MCA主干15min，可见该MCA远端及各分支血流中断，并在手术显微 镜下见局部白血栓提示该MCA血栓形成、MCAO模型复制成功。术中大鼠肛温保持在 (37±0.3)℃。局部伤口缝合前用青霉素稀释液冲洗，术后常规肌注青霉素8万U/只。剔除术 中及术后1d死亡的以及出血多或手术显微镜下未明确供血是否中断的大鼠。

将动物随机分6组：假手术组、模型对照组、本发明中药组合物高、中、低剂量组、 尼莫地平组。假手术组仅开骨窗，不作激光照射；模型手术成功后的4.5h，各组分别灌胃 给药本发明中药组合物1.8g/kg、0.6g/kg、0.1g/kg，尼莫地平20mg/kg；假手术组和模型组 灌胃给药同体积的生理盐水。各组大鼠分别分批于MCAO术后(即脑血栓缺血后)6h、12h、 24h处死取脑组织标本，并于处死前1h灌胃给药2％伊文思蓝(EvansBlue，EB)生理盐水溶 液2ml/kg体重，待充分循环后，深麻动物，剖胸经心脏灌注生理盐水冲洗血管内染料，断 头取脑。

各组随机抽取3只大鼠的脑组织，立即冰冻切片，连续行厚约30um的冠状切片，用 70％甘油PBS缓冲液(pH8.5～9.0)封片，于Bio-RadRadiance2100激光扫描共聚焦显微镜下 观察脑组织中EB的渗出情况，观察BBB开放区域及程度。未观察时切片置4℃冰箱避光 保存。各组随机另取5只大鼠的脑组织，吸干表面水分后称量脑湿重；将脑组织置于匀浆 器中，加入50％三制成组织匀浆，移入试管密封静置60min以上；3000rpm/min离 心10min，取上清液，荧光分光光度计测荧光值：激发波长620nm，发射波长680nm；按标 准曲线计算出上清液中EB含量，再计算出每克脑组织EB含量，以此反应各大鼠BBB通 透性。

2实验结果

2.1激光扫描共聚焦显微镜观察结果

EB在激发光状态下呈鲜艳明亮的红荧光。激光显微镜下观察到各组动物脑组织无 BBB脑区(如松果体、最后区和脑垂体)呈现均一、弥漫性EB浸染，边界清晰，脑膜可见红 荧光勾勒出的线样轮廓。而在BBB脑区，除假手术组之外的其他各组脑组织均可见光斑， 且主要分布在丘脑、下丘脑、小脑、海马等处，光斑大小不一，荧光强度从光斑的中心向 外周逐渐减弱，边界模糊。各组的光斑数和分布明显不同：模型组光斑最多，约有120个 左右直径约100～200um的光斑，密集处呈片状。各本发明中药组合物药物组光斑数目较模 型组显著减少，各剂量组比较，呈现显著剂量差异性；其中以低剂量组光斑较多，在相同 平面上光斑约有50个，但是融合成片状的较少；中剂量组光斑较少，散在分布；高剂量组 光斑很少而散在，且荧光很弱。

2.2大鼠脑组织EB含量检测血脑屏障的通透性结果

各组大鼠脑组织标本由测得的荧光值计算出EB含量，数据统计分析见表5。

表5 本发明中药组合物对RHRSP脑血栓后血脑屏障通透性的影响

注：与假手术组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.01,**P＜0.01

2.3结论

EB为水溶性染料，入血后能百分之百迅速与白蛋白结合，正常情况下不能透过血脑屏 障。由2.1及2.2结果可见，假手术组BBB脑区，脑组织显微镜下未见EB渗出光斑；而模 型组大鼠脑组织显微镜下有大量EB渗出光斑，且脑组织荧光分光光度计检出高含量的EB， 较假手术组有显著差异(P＜0.01)，表明脑血栓后脑组织血脑屏障破坏，通透性增加，EB结 合白蛋白可通过开放的BBB进入脑组织。实验结果显示本发明中药组合物各剂量组大鼠脑 组织显微镜下EB光斑数以及脑组织EB检出含量明显减少，与模型组比较均有显著差异(P ＜0.01)，提示本发明中药组合物对脑损伤后血脑屏障通透性增加具有抑制作用，能保护血 脑屏障，而保护脑组织进一步受损伤。