(氮杂-)异喹啉酮衍生物

(氮杂-)异喹啉酮衍生物

发明背景

本发明的目的是发现具有有价值特性的新化合物，特别是可用来制备药物的那些化合物。

本发明涉及双环吡嗪酮衍生物，其抑制端锚聚合酶(TANK)和聚(ADP-核糖)聚合酶PARP-1的活性。本发明的化合物因此可用于疾病，诸如癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。本发明还提供用于制备这些化合物的方法、包含这些化合物的药用组合物和利用包含这些化合物的药用组合物疾病的方法。

核酶聚(ADP-核糖)聚合酶-1 (PARP-1)是PARP酶家族的一个成员。酶的这个不断扩大的家族由PARP例如：PARP-1、PARP-2、PARP-3和Vault-PARP；和端锚聚合酶(TANK)，例如：TANK-1和TANK-2组成。PARP也称为聚(腺苷5'-二磷酸-核糖)聚合酶或PARS (聚(ADP-核糖)合成酶)。

对于有丝分裂纺锤体-相关的聚(ADP-核糖)的聚合，TANK-1似乎是需要的。TANK-1的聚(ADP-核糖基化)作用活性对于纺锤体双极性(spindle bipolarity)的精确形成和维持可能是至关重要的。此外，已表明在分裂后期之前，TANK-1的PARP活性对于正常的端粒分离是需要的。干扰端锚聚合酶PARP活性导致畸形有丝分裂，这造成短暂性细胞周期停滞，可能是由于纺锤体检查点激活，接着是细胞死亡。因而预期端锚聚合酶的抑制对增殖性肿瘤细胞具有细胞毒性作用(WO 2008/107478)。

PARP抑制剂由M. Rouleau等在Nature Reviews, 第10卷, 293-301在临床癌症研究(表2, 第298页)中描述。

根据Horvath和Szabo的综述(Drug News Perspect 20(3), April 2007, 171-181)，大多数最近的研究证实PARP抑制剂促进癌症细胞死亡，主要因为它们在各种水平上干扰DNA修复。更多的最近研究还已证实PARP抑制剂通过抑制生长因子表达，或者通过抑制生长因子-诱导的细胞增殖反应来抑制血管生成。这些结果还可具有关于PARP抑制剂的体内抗癌作用模式的暗示。

Tentori等(Eur. J. Cancer, 2007, 43 (14) 2124-2133)的研究也表明PARP抑制剂消除VEGF或胎盘生长因子-诱导的迁移和防止基于细胞的系统中细管样网络的形成，并削弱体内的血管生成。研究还证实生长因子-诱导的血管生成在PARP-1敲除小鼠中是缺乏的。研究的结果提供将PARP作为靶标用于抗-血管生成的证据，为PARP抑制剂在癌症中的用途增添新的提示。

众所周知，保守的信号传导途径的缺乏在基本上所有癌症的起源和表现中起着关键作用(E.A.Fearon, Cancer Cell, Vol. 16, Issue 5, 2009, 366-368)。Wnt途径是抗癌疗法的靶标。Wnt途径的关键特征是通过β-联蛋白破坏复合体调控的β-联蛋白的蛋白水解(降解)。蛋白样WTX、APC或Axin参与降解过程。β-联蛋白的正确降解对避免在许多癌症中已经观察到的Wnt途径的不适当的活化是重要的。端锚聚合酶抑制Axin的活性并因此抑制β-联蛋白的降解。从而，端锚聚合酶抑制剂增加β-联蛋白的降解。在期刊Nature中的一篇最近的论文不仅提出对调节Wnt信号传导的蛋白的重要的新理解，而且还进一步支持拮抗β-联蛋白水平和经由小分子定位的方法(Huang等, 2009；Nature, Vol 461, 614-620)。化合物XAV939抑制DLD-1-癌症细胞的生长。他们发现XAV9393通过增加AXIN1和AXIN2蛋白的水平，阻断Wnt-刺激的β-联蛋白的聚集。该作者的后续工作确立XAV939通过端锚聚合酶1和2 (TNKS1和TNKS2)的抑制作用，调节AXIN水平，端锚聚合酶1和2均为聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)蛋白家族的成员(S.J. Hsiao等, Biochimie 90, 2008, 83-92)。

已经发现根据本发明的化合物及其盐具有非常有价值的药理学性质，同时是良好耐受的。

本发明特别地涉及抑制端锚聚合酶1和2的式I化合物，涉及包含这些化合物的组合物，和涉及其用于TANK-诱导的疾病和病痛的方法。

式I化合物可进一步用于TANK的分离及其活性或表达的研究。此外，它们特别适合用于与失调的或扰乱的TANK活性有关的疾病的诊断方法。

宿主或患者可属于任何哺乳动物物种，例如灵长类物种，特别是人；啮齿类动物，包括小鼠、大鼠和仓鼠；兔；马、牛、狗、猫等。动物模型具有用于实验研究的益处，其为人类疾病提供模型。

具体细胞对用依据本发明的化合物的易感性可通过体外试验确定。典型地，将细胞培养物与各种浓度的依据本发明的化合物合并一定的时间段(通常在约1小时和1周之间)，其足以使得活性剂例如抗IgM诱导细胞应答例如表面标记物的表达。体外试验可采用来自血或来自活组织检查样本的培养的细胞进行。所表达的表面标记物的量通过流式细胞仪，使用识别所述标记物的特异性抗体来评价。

所述剂量根据所用的特定化合物、特定疾病、患者状态等而变化。剂量典型地足以显著减少靶组织中的不需要的细胞体，同时维持患者的生存能力。一般持续至出现显著减少，例如细胞负荷减少至少约50%，和可持续至在体内基本上未检测出更多的不需要的细胞。

现有技术

其它(氮杂-)异喹啉酮衍生物在EP 1020445中被描述为中间体。其它异喹啉酮衍生物在WO 2010/133647中被描述为PARP抑制剂。

其它异喹啉酮衍生物描述于以下文献中：

Won-Jea Cho等, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1998), 8, 41-46;

Sung Hoon Cheon等, Archives of Pharmacal Research (1997), 20, 138-143;

Sung Hoon Cheon等, Archives of Pharmacal Research (2001), 24, 276-280。

E. Wahlberg等在Nature Biotechnology (2012), 30(3), 283中将喹唑啉酮衍生物描述为端锚聚合酶抑制剂。

发明概述

本发明涉及式I化合物及其药学上可接受的溶剂合物、盐、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物

其中

R¹表示F、Cl、CH₃、OCH₃、CF₃、CHF₂或CH₂F，

R²表示H或具有1-6个C-原子的非支链或支链烷基，

X表示C或N，条件是只有一个X表示N，

Y表示A、Cyc、[C(R²)₂]_qOA、[C(R²)₂]_qN(R²)₂、[C(R²)₂]_pHet¹、[C(R²)₂]_pCOOR²、[C(R²)₂]_pCON(R²)₂或[C(R²)₂]_pSO₂N(R²)₂，

Ar表示苯基，其为未取代的，或被Hal、A、[C(R²)₂]_pOR、[C(R²)₂]_pN(R²)₂、[C(R²)₂]_pHet²、NO₂、CN、[C(R²)₂]_pCOOR、[C(R²)₂]_pN(R²)₂、N(R²)₂COA、NR²SO₂A、[C(R²)₂]_pSO₂N(R²)₂、S(O)_nA、COHet²、O[C(R²)₂]_mN(R²)₂、O[C(R²)₂]_pHet²、NHCOOA、NHCON(R²)₂或COA一或二取代，

Het¹表示吡咯烷基、氮杂环丁烷基、四氢咪唑基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基、四氢吡唑基、四氢吡喃基、基、吗啉基、六氢哒嗪基、六氢嘧啶基、[1,3]二氧戊环基、哌嗪基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、喹啉基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、咪唑并吡啶基或呋喃并[3,2-b]吡啶基，其中的每一个为未取代的或被Hal、A、[C(R²)₂]_pOR²、[C(R²)₂]_pN(R²)₂、[C(R²)₂]_pHet²、[C(R²)₂]_pOHet² [C(R²)₂]_pAr、NO₂、CN、[C(R²)₂]_pCOOR²、[C(R²)₂]_pCON(R²)₂、NR²COA、NR²SO₂A、[C(R²)₂]_pSO₂N(R²)₂、S(O)_nA、COHet²、O[C(R²)₂]_mN(R²)₂、O[C(R²)₂]_pAr、O[C(R²)₂]_pHet²、NHCOOA、NHCON(R²)₂、CHO、COA、=S、=NR和/或=O一或二取代，

Het²表示二氢吡咯基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢咪唑基、二氢吡唑基、四氢吡唑基、四氢呋喃基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、基、吗啉基、六氢哒嗪基、六氢嘧啶基、[1,3]二氧戊环基、四氢吡喃基或哌嗪基，其中的每一个为未取代的或被Hal、CN、OR²、COOR²、CON(R²)₂、S(O)_nA、S(O)_nAr、COA、A和/或=O一或二取代，

A表示具有1-10个C-原子的非支链或支链烷基，其中两个相邻的碳原子可形成双键和/或一个或两个非相邻的CH-和/或CH₂-基团可被N-、O-和/或S-原子替代和其中1-7个H-原子可被F或Cl替代，

Cyc表示具有3-7个C-原子的环烷基，其为未取代的或被OH、Hal或A一取代，

Hal表示F、Cl、Br或I，

n表示0、1或2，

m表示1、2或3，

p表示0、1、2、3或4，

q表示1、2、3或4，

前提是，如果R¹不存在或为甲基或甲氧基，则Y不是甲基、三氟甲基、子基甲基、丁基、3-甲氧基-1-丙基或4-吗啉基。

本发明还涉及这些化合物的任选的活性形式(立体异构体)、对映体、外消旋体、非对映体和水合物和溶剂合物。

本发明涉及式I化合物及其式Ia的互变异构体

。

此外，本发明涉及式I化合物的药学上可接受的衍生物。

采用术语化合物的溶剂合物意指由于它们的相互吸引力而形成的惰性溶剂分子加合到化合物上。溶剂合物是，例如，一水合物或二水合物或醇盐。

应理解本发明还涉及盐的溶剂合物。

采用术语药学上可接受的衍生物意指，例如，根据本发明的化合物的盐，并且也称为前药化合物。

如在本文所用的并且除非另外指明，术语"前药"意指式I化合物的衍生物，其可在生物学条件下(体外或体内)水解、氧化或以其它方式反应以提供活性化合物，特别是式I化合物。前药的实例包括，但不限于式I化合物的衍生物和代谢产物，其包括可生物水解的部分例如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯类似物。在某些实施方案中，具有羧基官能团的化合物的前药是羧酸的低级烷基酯。羧酸酯通过酯化存在于分子上的任何羧酸部分而常规地形成。前药可典型地使用熟知的方法，例如通过Burger 's Medicinal Chemistry and Drug Discovery第6版(Donald J. Abraham编辑, 2001, Wiley)和Design and Application of Products (H.Bundgaard编辑, 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh)中所述的那些方法制备。

表达"有效量”表示药物或药用活性成分在组织、系统、动物或人中引起生物学或医学反应的量，所述反应是例如研究者或临床医师所寻或想得到的。

此外，表达"有效量”表示与没有接受该量的相应受试者比较，具有以下结果的量：

改善、治愈、预防或消除疾病、综合征、病况、病痛、病症或副作用或亦减慢疾病、病痛或病症的发展。

表达"有效量”还涵盖有效增加正常生理学功能的量。

本发明还涉及式I化合物的混合物，例如两种非对映异构体的混合物的用途，所述两种非对映异构体的比例例如为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:10、1:100或1:1000。

特别优选存在立体异构化合物的混合物。

"互变异构体"指彼此处于平衡状态的化合物的异构形式。异构形式的浓度将取决于发现化合物所处的环境并可根据，例如，是否化合物是固体或是在有机或水性溶液中而不同。

本发明涉及式I化合物及其盐并涉及制备式I化合物及其药学上可使用的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体的方法，其特征在于

a) 使式II化合物

其中R¹、X、Y和n具有在权利要求1中指定的意义，

与NH₃反应，

或

b) 通过以下使基团Y转化为另一个基团Y：

i) 使卤原子转化为酯基，

ii) 使酯基转化为醇基，

iii) 以Suzuki偶联使卤化苯环转化为芳化苯环，

和/或

使式I的碱或酸转化为其盐中的一种。

在上下文中，基团R¹、X、Y和n具有对式I指定的意义，除非另外明确地说明。

A表示烷基，这是非支链(线性)或支链的，并具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个C原子。A优选地表示甲基、此外表示乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲-丁基或叔丁基，此外还表示戊基、1-、2-或3-甲基丁基、1,1-、1,2-或2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、1-、2-、3-或4-甲基戊基、1,1-、1,2-、1,3-、2,2-、2,3-或3,3-二甲基丁基、1-或2-乙基丁基、1-乙基-1-甲基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-或1,2,2-三甲基丙基，此外优选地表示，例如，三氟甲基。

A更特别优选地表示具有1、2、3、4、5或6个C原子的烷基，优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲-丁基、叔丁基、戊基、己基、三氟甲基、五氟乙基或1,1,1-三氟乙基。

而且，A优选地表示CH₂OCH₃、CH₂CH₂OH或CH₂CH₂OCH₃。

Cyc表示环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基，优选未取代的或被OH、Hal或A一取代。

R¹特别优选地表示H、F、Cl、CH₃、OCH₃或CF₃。

R²优选地表示H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、戊基或己基，特别优选地H或甲基。

Ar优选地表示o-、m-或p-甲苯基、o-、m-或p-乙基苯基、o-、m-或p-丙基苯基、o-、m-或p-异丙基苯基、o-、m-或p-叔丁基苯基、o-、m-或p-羟基苯基、o-、m-或p-硝基苯基、o-、m-或p-氨基苯基、o-、m-或p-(N-甲基氨基)苯基、o-、m-或p-(N-甲基氨基羰基)苯基、o-、m-或p-甲氧基苯基、o-、m-或p-乙氧基苯基、o-、m-或p-乙氧基羰基苯基、o-、m-或p-(N,N-二甲基氨基)苯基、o-、m-或p-(N,N-二甲基氨基羰基)苯基、o-、m-或p-(N-乙基氨基)苯基、o-、m-或p-(N,N-二乙基氨基)苯基、o-、m-或p-氟代苯基、o-、m-或p-溴代苯基、o-、m-或p-氯代苯基、o-、m-或p-(甲基磺酰胺基)苯基、o-、m-或p-(甲基磺酰基)苯基、o-、m-或p-氰基苯基、o-、m-或p-羧基苯基、o-、m-或p-甲氧基羰基苯基、o-、m-或p-甲酰基苯基、o-、m-或p-乙酰基苯基、o-、m-或p-氨基磺酰基苯基、o-、m-或p-[2-(吗啉-4-基)乙氧基]苯基、o-、m-或p-[3-(N,N-二乙基氨基)丙氧基]苯基，更优选地2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-或3,5-二氟苯基、2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-或3,5-二氯苯基、2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-或3,5-二溴苯基、2,4-或2,5-二硝基苯基、2,5-或3,4-二甲氧基苯基、3-硝基-4-氯代苯基、3-氨基-4-氯-、2-氨基-3-氯-、2-氨基-4-氯-、2-氨基-5-氯-或2-氨基-6-氯代苯基、2-硝基-4-N,N-二甲基氨基-或3-硝基-4-N,N-二甲基氨基苯基、2,3-二氨基苯基、2,3,4-、2,3,5-、2,3,6-、2,4,6-或3,4,5-三氯苯基、2,4,6-三甲氧基苯基、2-羟基-3,5-二氯苯基、p-碘代苯基、3,6-二氯-4-氨基苯基、4-氟-3-氯代苯基、2-氟-4-溴代苯基、2,5-二氟-4-溴代苯基、3-溴-6-甲氧基苯基、3-氯-6-甲氧基苯基、3-氯-4-乙酰氨基苯基、3-氟-4-甲氧基苯基、3-氨基-6-甲基苯基、3-氯-4-乙酰氨基苯基或2,5-二甲基-4-氯代苯基。

Ar更优选地表示苯基，其被Hal、A、[C(R²)₂]_pHet²或[C(R²)₂]_pCOOR²一取代。

Het¹优选地表示吡咯烷基、氮杂环丁烷基、四氢咪唑基、四氢呋喃基、四氢吡唑基、四氢吡喃基、基、吗啉基、六氢哒嗪基、六氢嘧啶基、[1,3]二氧戊环基、哌嗪基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、喹啉基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、咪唑并吡啶基或呋喃并[3,2-b]吡啶基，其中的每一个为未取代的或被A和/或[C(R²)₂]_pOR²一或二取代。

Het¹特别优选地表示吡咯烷基、基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基或吡唑基，其中的每一个为未取代的或被A或[C(R²)₂]_pOR²一取代。

Het²特别优选地表示吡咯烷基、基或吡唑基，其中的每一个被A一取代。

Hal优选地表示F、Cl或Br，但还表示I，特别优选F或Cl。

贯穿本发明，出现一次以上的所有基团可以是相同的或不同的，即是彼此独立的。

式I化合物可以具有一个或多个手性中心并因此可以多种立体异构形式出现。式I涵盖所有这些形式。

因此，本发明特别涉及式I化合物，其中至少一种所述基团具有以上指定的优选意义之一。化合物的一些优选的基团可以通过以下的子式Ia-Id表示，其符合式I和其中未更详细地指定的基团具有对式I指出的意义，但是其中

在Ia中，Ar表示苯基，其被Hal、A、[C(R²)₂]_pHet²或[C(R²)₂]_pCOOR²一取代；

在Ib中，Het¹表示吡咯烷基、氮杂环丁烷基、四氢咪唑基、四氢呋喃基、四氢吡唑基、四氢吡喃基、基、吗啉基、六氢哒嗪基、六氢嘧啶基、[1,3]二氧戊环基、哌嗪基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、喹啉基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、咪唑并吡啶基或呋喃并[3,2-b]吡啶基，其中的每一个为未取代的或被A和/或[C(R²)₂]_pOR²一或二取代；

在Ic中，Het²表示吡咯烷基、基或吡唑基，其中的每一个被A一取代；

在Id中，R¹表示F、Cl、CH₃、OCH₃、CF₃、CHF₂或CH₂F，

R²表示H或具有1-6个C-原子的非支链或支链烷基，

X表示C或N，条件是只有一个X表示N，

Y表示A、Cyc、[C(R²)₂]_qOA、[C(R²)₂]_qN(R²)₂、[C(R²)₂]_pHet¹、[C(R²)₂]_pCOOR²、[C(R²)₂]_pCON(R²)₂或[C(R²)₂]_pSO₂N(R²)₂，

Het¹表示吡咯烷基、氮杂环丁烷基、四氢咪唑基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基、四氢吡唑基、四氢吡喃基、基、吗啉基、六氢哒嗪基、六氢嘧啶基、[1,3]二氧戊环基、哌嗪基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、喹啉基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、咪唑并吡啶基或呋喃并[3,2-b]吡啶基，其中的每一个为未取代的或被A和/或[C(R²)₂]_pOR²一或二取代，

A表示具有1-10个C-原子的非支链或支链烷基，其中两个相邻的碳原子可形成双键和/或一个或两个非相邻的CH-和/或CH₂-基团可被N-原子替代和其中1-7个H-原子可被F或Cl替代，

Cyc表示具有3-7个C-原子的环烷基，其为未取代的或被OH、Hal或A一取代，

n表示0、1或2，

p表示0、1、2、3或4，

q表示1、2、3或4，

前提是，如果R¹不存在或为甲基或甲氧基，则Y不是甲基、三氟甲基、子基甲基、丁基、3-甲氧基-1-丙基或4-吗啉基，

及其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物。

此外，式I化合物以及还有制备它们的起始原料通过本身已知的方法，如在文献中描述的(例如在标准教科书中，例如Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [有机化学的方法]，Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart)的方法制备，确切地说在已知的和适用于所述反应的反应条件下。此处亦可以利用本文未更详细地提及的本身已知的变体。

式II的起始化合物是通常已知的。然而，如果它们是新的，它们可通过本身已知的方法制备。

式I化合物可优选地通过使式II化合物与NH₃反应而获得。

取决于所用的条件，反应时间在数分钟和14天之间，反应温度在约-10°和140°之间，通常在30°和130°之间，特别是在约60°和约120°之间。反应在惰性溶剂中进行。

合适的惰性溶剂的实例是烃，例如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；卤代烃，例如三氯乙烯、1,2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲烷；醇，例如甲醇、乙醇、异丙醇、n-丙醇、n-丁醇或叔-丁醇；醚，例如乙醚、二异丙醚、四氢呋喃(THF)或二氧杂环己烷；二醇醚，例如乙二醇单甲基或单乙基醚、乙二醇二甲基醚(二甘醇二甲醚)；酮，例如丙酮或丁酮；酰胺，例如乙酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺(DMF)；腈，例如乙腈；亚砜，例如二甲亚砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸，例如甲酸或乙酸；硝基化合物，例如硝基甲烷或硝基苯；酯，例如乙酸乙酯，或所述溶剂的混合物。

特别优选DMF。

此外，式I化合物可通过以下将基团Y转化为另一个基团Y而获得：

i) 使卤原子转化为酯基，

ii) 使酯基转化为醇基，

iii) 以Suzuki偶联使卤化苯环转化为芳化苯环。

步骤i)：

使卤原子转化为酯基优选地在标准条件下，优选地在有机溶剂中，优选地在甲醇和甲苯中用一氧化碳进行。

优选地，该反应优选在2-4巴的压力下进行。

优选地加入钯-和/或铁-复合物，优选的复合物是(1,1'-双(二苯基膦基)-二茂铁)二氯化钯(II)或1,1'-双(二苯基膦基)-二茂铁。

取决于所用的条件，反应时间在数分钟和14天之间，反应温度在约40°和140°之间，通常在60°和130°之间，特别是在约90°和约110°之间。

步骤ii)：

使酯基转化为醇基，优选地在氯化铈(III)的存在下，在THF中在标准条件下用烷基氯化镁(alkylmagnesiumchloride)或在THF中用氢化锂铝进行。

步骤iii)：

将卤代苯环转化为酰化苯环，在用于Suzuki偶联的标准条件下进行。

步骤iv)

使卤代烷基转化为烷基优选地在标准条件下用LiAlH₄在THF中或用锌在乙酸中进行。

酯可例如使用乙酸或使用NaOH或KOH在水、水/THF或水/二氧杂环己烷中，在0和100°之间的温度下皂化。

药学上的盐及其它形式

根据本发明的所述化合物可以其最终非盐形式使用。另一方面，本发明还涵盖以其药学上可接受的盐的形式的这些化合物的用途，所述药学上可接受的盐可通过本领域已知的方法得自各种有机和无机的酸和碱。所述式I化合物的药学上可接受的盐形式大部分通过常规方法制备。如果所述式I化合物含有羧基，则其合适盐中的一种可通过使所述化合物与合适的碱反应得到相应的碱加成盐来形成。所述碱例如为碱金属氢氧化物，包括氢氧化钾、氢氧化钠和氢氧化锂；碱土金属氢氧化物，诸如氢氧化钡和氢氧化钙；碱金属醇盐，例如乙醇钾和丙醇钠；和各种有机碱，诸如、二乙醇胺和N-甲基谷氨酰胺。同样包括所述式I化合物的铝盐。在所述式I的某些化合物的情况下，酸加成盐可通过用以下药学上可接受的有机和无机酸处理这些化合物来形成：例如卤化氢，诸如氯化氢、溴化氢或碘化氢；其它无机酸及其相应盐，诸如硫酸盐、硝酸盐或磷酸盐等；和烷基和单芳基磺酸盐，诸如乙烷磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐；及其它有机酸及其相应盐，诸如乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等。因此，所述式I化合物的药学上可接受的酸加成盐包括以下：乙酸盐、已二酸盐、海藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)(苯磺酸盐(besylate))、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、二氢磷酸盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、甲酸盐、半乳糖二酸盐(由粘酸得到)、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲烷磺酸盐、甲基苯甲酸盐、单氢磷酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐、邻苯二甲酸盐，但这不代表限制。

另外，根据本发明的化合物的碱式盐包括铝、铵、钙、铜、铁(III)、铁(II)、锂、镁、锰(III)、锰(II)、钾、钠及锌盐，但这并非意欲代表限制。在上述盐之中，优选铵、碱金属钠和钾盐及碱土金属钙和镁盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的所述式I化合物的盐包括以下的盐：伯、仲和叔胺；被取代的胺，还包括天然存在的被取代的胺；环胺；和碱离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、、氯普鲁卡因、胆碱、N,N-二苄基乙二胺(苄星青霉素)、二环己胺、二乙醇胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、利多卡因(lidocaine)、赖氨酸、葡甲胺、N-甲基-D-葡糖胺、吗啉、哌嗪、、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和三(羟甲基)甲胺(氨丁三醇)，但这并非意欲代表限制。

含有碱性含氮基团的本发明化合物可使用例如以下试剂季胺化：(C₁-C₄)烷基卤化物，例如甲基、乙基、异丙基和叔丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二(C₁-C₄)烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二戊酯；(C₁₀-C₁₈)烷基卤化物，例如癸基、十二烷基、月桂基、肉豆寇基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物；和芳基(C₁-C₄)烷基卤化物，例如苄基氯和苯乙基溴。根据本发明的水溶性和油溶性化合物两者都可使用所述盐制备。

优选的上述药学上的盐包括乙酸盐、三氟乙酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、半琥珀酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、羟乙基磺酸盐、扁桃酸盐、葡甲胺、硝酸盐、油酸盐、膦酸盐、新戊酸盐、磷酸钠、硬脂酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、硫代苹果酸盐、甲苯磺酸盐和氨丁三醇，但这并非意欲代表限制。

特别优选盐酸盐、、氢溴酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐、硫酸盐和琥珀酸盐。

所述式I碱性化合物的酸加成盐通过使游离碱形式与足够量的所要酸接触，促使以常规形式形成所述盐来制备。所述游离碱可通过使所述盐形式与碱接触并以常规方式分离所述游离碱而再生。所述游离碱形式在某方面关于某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性而与相应盐形式不同；然而，对于本发明的目的，所述盐在其它方面与其相应游离碱形式一致。

如所提到的，所述式I化合物的药学上可接受的碱加成盐用金属或胺如碱金属和碱土金属或有机胺形成。优选的金属有钠、钾、镁和钙。优选的有机胺有N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基-D-葡糖胺和普鲁卡因。

根据本发明的酸性化合物的碱加成盐通过使所述游离酸形式与足够量的所需要的碱接触，促使以常规方式形成所述盐来制备。所述游离酸可通过使所述盐形式与酸接触并以常规方式分离所述游离酸而再生。所述游离酸形式在某方面关于某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性而与其相应盐形式不同；然而，对于本发明的目的，所述盐在其它方面与其相应游离酸形式一致。

如果根据本发明的化合物含有多于一个能够形成该类型的药学上可接受的盐的基团，本发明则还涵盖多重盐。典型的多重盐形式例如包括酒石酸氢盐、二乙酸盐、富马酸氢盐、二甲葡胺、磷酸氢盐、二钠和三盐酸盐，但这并非意欲代表限制。

关于上文所述，可见在本上下文中的表述“药学上可接受的盐”用以指活性成分，其包含以其盐中的一种的形式的式I化合物，特别是如果与活性成分的游离形式或先前使用的活性成分的任何其它盐形式相比较，该盐形式赋予活性成分改善的药代动力学性质。所述活性成分的药学上可接受的盐形式还可首次提供给该活性成分先前没有的所要的药代动力学性质，且关于其在体内的功效，甚至可以对该活性成分的药效学具有有利的影响。

同位素

另外预期式I化合物包括其同位素标记形式。除了所述化合物的一个或多个原子已经被具有与通常自然存在的原子的原子质量和质量数不同的原子质量或质量数的一个或多个原子置换的事实之外，式I化合物的同位素标记形式与该化合物相同。易于购得且可通过众所周知的方法掺入所述式I化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。含有一个或多个上述同位素和/或其它原子的其它同位素的式I化合物、其前药或任一个的药学上可接受的盐意指为本发明的一部分。式I的同位素标记化合物可以许多有益的方式使用。例如，已经掺入例如放射性同位素如³H或¹⁴C的式I的同位素标记化合物适合用于药物和/或底物组织分布测定。这些放射性同位素，即氚(³H)和碳-14(¹⁴C)由于制备简单和可检测性优异而特别优选。将重同位素如氘(²H)掺入式I化合物由于该同位素标记化合物的较高新陈代谢稳定性而具有优势。较高的新陈代谢稳定性直接转变为体内半寿期增加或剂量降低，其在大多数情况下将代表本发明的优选实施方案。式I的同位素标记化合物通常可通过进行在本文中的合成方案和相关描述、实施例部分和制备部分中公开的程序用易于得到的同位素标记反应物代替非同位素标记反应物来制备。

氘(²H)出于通过初级动力学同位素效应处理化合物的氧化新陈代谢的目的也可掺入式I的化合物中。所述初级动力学同位素效应是由同位素核的交换引起的化学反应的速率的改变，其依次由在该同位素交换之后共价键形成所必需的基态能量的改变引起。重同位素的交换通常引起化学键的基态能量降低且因此引起速率限制性键断裂的速率降低。如果键断裂在沿多产物反应的坐标的鞍点区域中或该区域附近发生，则产物分布比会明显地改变。为解释目的：如果氘在不可交换的位置键合到碳原子，则k_M/k_D = 2-7的率差是典型的。如果该率差成功地施用到对氧化敏感的式I化合物，则该化合物在体内的概况可剧烈改变并产生改善的药代动力学性质。

在发现和研发剂时，本领域技术人员试图优化药代动力学参数，同时保持合乎需要的体外性质。假定具有差的药代动力学概况的许多化合物对氧化新陈代谢敏感是合理的。目前可用的体外肝微粒体测定提供关于该类型的氧化新陈代谢过程的有价值的信息，这进而容许合理地设计经由抵抗所述氧化新陈代谢而具有改善的稳定性的式I的氘化化合物。由此获得在式I化合物的药代动力学概况方面的显著改善，且所述改善可根据体内半寿期(t/2)、在最大效应下的浓度(C_max)、在剂量响应曲线下的面积(AUC)和F的增加；及根据清除率、剂量和材料成本的降低来定量地表述。

以下意欲对上文进行说明：将具有多个氧化新陈代谢攻击的潜在位点如苄型氢原子和键合到氮原子的氢原子的式I化合物制备为一系列类似物，其中各种组合的氢原子由氘原子置换，以使得这些氢原子中的一些、大多数和全部被氘原子置换。半寿期测定能够实现有利且精确的测定改进对氧化新陈代谢的抵抗性的改善程度。以此方式，确定母体化合物的半寿期可由于该类型的氘-氢交换而延长到高达100%。

在式I化合物中的氘-氢交换还可用以实现起始化合物的代谢物谱的有利改进，以减少或消除不想要的毒性代谢物。例如，如果毒性代谢物经由氧化碳-氢(C-H)键断裂产生，则可合理地假设氘化类似物将大大减少或消除不必要代谢物的产生，即使特定的氧化不是一个速度确定步骤。在现有技术水平上关于氘-氢交换的另外信息可在例如以下文献中见到：Hanzlik等，J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990；Reider等，J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987；Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985；Gillette等，Biochemistry 33(10) 2927-2937, 1994；和Jarman等，Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993。

本发明另外涉及药物，所述药物包含至少一种式I化合物和/或其药学上可接受的衍生物、溶剂合物及立体异构体，包括其以所有比率的混合物，及任选的赋形剂和/或助剂。

药物制剂可以包含预定量的活性成分/剂量单位的剂量单位形式给予。所述单位可根据所的病况、给药方法及患者的年龄、体重和病况而包含例如0.5mg-1g、优选1mg-700mg、特别优选5mg-100mg的本发明的化合物，或者药物制剂可以包含预定量的活性成分/剂量单位的剂量单位形式给予。优选的剂量单位制剂为包含如上指出的日剂量或份剂量的那些或其相应分数的活性成分。另外，该类型的药物制剂可使用在制药领域中通常已知的方法制备。

药物制剂可适合经由任何需要的合适方法，例如经口(包括颊或舌下)、直肠、鼻、局部(包括颊、舌下或经皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内或皮内)方法给予。所述制剂可使用制药领域中已知的所有方法通过例如将活性成分与赋形剂或助剂组合来制备。

适合口服的药物制剂可作为独立单位如胶囊或片剂；粉剂或颗粒剂；在水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫或泡沫食品；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂来给予。

因此，例如，在以片剂或胶囊形式口服的情况下，可将活性成分组分与经口、无毒且药学上可接受的惰性赋形剂如乙醇、甘油、水等组合。粉剂通过将化合物粉碎成合适的小尺寸并将其与以类似方式粉碎的药用赋形剂如可食用的碳水化合物如淀粉或甘露糖醇混合来制备。同样可存在矫味剂、防腐剂、分散剂和染料。

胶囊通过制备如上所述的粉末混合物并用其填充成型的明胶壳来生成。在填充操作之前可将诸如以固体形式的高度分散的硅酸、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或聚乙二醇等的助流剂和润滑剂加到所述粉末混合物中。同样可加入诸如琼脂、碳酸钙或碳酸钠等的崩解剂或增溶剂以改善服用胶囊之后的药物利用度。

另外，如果需要或必需，则同样可将合适的粘合剂、润滑剂和崩解剂以及染料掺入所述混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、由玉米制造的甜味剂、天然和合成橡胶如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。所述崩解剂包括(而不受此限制)淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。所述片剂通过例如制备粉末混合物、造粒或压干所述混合物、加入润滑剂和崩解剂并压制全部混合物以给出片剂来配制。粉末混合物通过混合以合适方式粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质和任选粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮；溶解延缓剂如石蜡；吸收加速剂如季盐；和/或吸收剂如膨润土、高岭土或磷酸二钙来制备。所述粉末混合物可通过用粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚胶浆或纤维素或聚合物材料的溶液将其润湿并挤压穿过筛网来造粒。作为造粒的替代，可使所述粉末混合物穿过制片机，给出不均匀形状的结块，将其破碎以形成颗粒剂。所述颗粒剂可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油润滑以免粘住片剂铸模模具。随后将润滑的混合物压制以给出片剂。根据本发明的化合物也可与自由流动的惰性赋形剂组合且随后直接压制给出片剂而不进行造粒或压干步骤。可存在由虫胶封闭层、糖或聚合物材料的层和石蜡的光泽层组成的透明或不透明的保护层。可将染料加到这些涂层中以能够区分开不同的剂量单位。

口服液体如溶液、糖浆和酏剂可以剂量单位形式制备，以使得给定的量包含预定量的所述化合物。糖浆可通过将所述混合物溶解于具有合适矫味剂的水溶液中来制备，而酏剂使用无毒醇媒剂制备。混悬剂可通过将所述化合物分散在无毒媒剂中来配制。同样可加入增溶剂和乳化剂，诸如乙氧化异十八醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚；防腐剂；调味添加剂，诸如薄荷油；或天然甜味剂或糖精；或其他人工甜味剂等。

如果需要，可将用于口服的剂量单位制剂封装在微囊中。所述制剂还可以延迟释放或阻释方式来制备，例如通过将微粒材料涂布或包埋在聚合物、蜡等中。

式I化合物及其盐、溶剂合物和生理学功能衍生物还可以脂质体传送系统如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体的形式给予。脂质体可由各种磷脂诸如胆固醇、十八胺或磷脂酰胆碱形成。

式I化合物及其盐、溶剂合物和生理学功能衍生物还可使用单克隆抗体作为化合物分子与其偶联的单独的载体来递送。所述化合物也可偶联到作为靶向药物载体的可溶性聚合物。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺基苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺基苯酚或被棕榈酰基取代的聚环氧乙烷聚赖氨酸。所述化合物可另外偶联到一类可生物降解的聚合物，所述可生物降解的聚合物适合用于实现药物的受控释放，例如聚乳酸、聚ε-己内酯、聚、聚原酸酯、聚缩醛、聚二羟基吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲的嵌段共聚物。

适合经皮施用的药物制剂可作为独立膏剂施用以便与受体的表皮扩展地紧密接触。因此，例如，活性成分可通过离子电渗从膏剂中递送，如在Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)的一般术语中所述。

可将适合局部给予的药物化合物配制为软膏、乳膏、混悬剂、洗液、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷剂、气溶胶或油剂。

为了眼睛或其它外部组织如口和皮肤，所述制剂优选施用为局部软膏或乳膏。在产生软膏的制剂的情况下，活性成分可与石蜡或水混溶的膏基一起使用。或者，活性成分可用水包油膏基或油包水基质一起配制以产生乳膏。

适合局部施用到眼睛的药物制剂包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适载体、特别是水性性溶剂中。

适合在口中局部施用的药物制剂包括锭剂、软锭剂和漱口剂。

适合直肠施用的药物制剂可以栓剂或灌肠剂的形式施用。

其中载体物质为固体的适合经鼻施用的药物制剂包括具有例如在20-500微米范围内的粒度的粗粉剂，其以采用嗅剂的方式，即通过从保持靠近鼻的含有粉剂的容器经鼻道迅速吸入来施用。用于作为具有液体作为载体物质的鼻喷剂或滴鼻剂施用的合适制剂包括在水或油中的活性成分溶液。

适合通过吸入施用的药物制剂包括细微粒粉尘或烟雾，其可通过各种类型的具有气溶胶的加压分配器、喷雾器或吹入器产生。

适合阴道施用的药物制剂可作为子宫托、棉塞、乳膏、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾制剂施用。

适合肠胃外施用的药物制剂包括水性和非水性无菌注射液，其包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，借助于所述无菌注射液使所述制剂与欲的受体的血液等渗；和水性和非水性无菌混悬液，其可包含悬浮介质和增稠剂。所述制剂可在单剂量或多剂量容器如密封安瓿和小瓶中施用并以冷冻干燥(冻干)状态储存，以使得仅需要紧接在使用之前加入无菌载液，例如用于注射目的的水。根据该配方制备的注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗粒剂和片剂制备。

不用说，关于特定制剂类型，除了以上特定提到的成分之外，所述制剂还可包含本领域中常用的其他试剂；因此，例如，适合口服的制剂可包含矫味剂。

式I化合物的有效量取决于许多因素，例如包括动物的年龄和体重、需要的精确病况及其严重性、制剂的性质和给药方法，且其最终由医师或兽医确定。然而，根据本发明的化合物的有效量通常在0.1-100mg/kg受体(哺乳动物)体重/日的范围内且特定典型地在1-10mg/kg体重/日的范围内。因此，对于体重为70kg的成年哺乳动物每日的实际量通常为70-700mg，其中该量可以每日单一剂量或通常以每日一系列多份剂量(诸如2、3、4、5或6份)给予，以使得日总剂量相同。盐或溶剂合物或其生理学功能衍生物的有效量可确定为本发明的化合物的有效量本身的分数。可以假定类似的剂量适合用于上述其它病症。

该类型的组合疗法可借助于同时、连续或单独分配该的单独组分来实现。该类型的组合产物采用根据本发明的化合物。

本发明另外涉及药物，其包含至少一种式I化合物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，及至少一种另外的药物活性成分。

本发明还涉及由以下单独包装组成的套盒(试剂盒)：

(a) 有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，

和

(b) 有效量的其它药物活性成分。

所述套盒包含合适的容器，诸如箱、单个瓶、袋或安瓿。所述套盒例如可包括单独的安瓿，其各自含有有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，

和有效量的以溶解或冻干形式的其它药物活性成分。

本文使用的“”是指完全或部分地减轻与疾病或病症相关的症状，或减慢或中止那些症状的进一步进展或恶化，或防止或预防处于发展该疾病或病症的危险之中的受试者的疾病或病症。

结合式(I)化合物的术语“有效量”可以指能够完全或部分地减轻与疾病或病症相关的症状，或减慢或中止那些症状的进一步进展或恶化，或防止或预防具有本文公开的疾病或处于发展本文公开的疾病的危险之中的受试者的疾病或病症的量，所述疾病诸如为炎性病况、免疫病况、癌症或新陈代谢病况。

在一个实施方案中，式(I)化合物的有效量为例如在体外或体内抑制细胞中的端锚聚合酶的量。在一些实施方案中，与在未的细胞中的端锚聚合酶的活性相比较，有效量的式(I)化合物抑制细胞中的端锚聚合酶达10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或99%。例如在药物组合物中的式(I)化合物的有效量可处于产生所需效果的水平；例如对于口服给药和肠胃外给药两者，在单位剂量中约0.005mg/kg受试者体重-约10mg/kg受试者体重。

用途

本发明化合物适合作为对于哺乳动物、特别是对于人类而言在癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症中的药物活性成分。

本发明包括式I化合物和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物用于制备用于或预防癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症的药物的用途。

炎性疾病的实例包括类风湿性关节炎、银屑病、接触性皮炎、迟发型超敏反应等。

还包括式I化合物和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物用于制备用于或预防哺乳动物的端锚聚合酶诱发的疾病或端锚聚合酶诱发的病况的药物的用途，其中对于该方法，将有效量的根据本发明的化合物施用到需要所述的患病哺乳动物。所述量根据具体疾病而不同，且可由本领域的技术人员确定而无需过度工作。

表述“端锚聚合酶诱发的疾病或病况”是指取决于一种或多种端锚聚合酶的活性的病理学病况。与端锚聚合酶活性相关的疾病包括癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。

本发明特别涉及式I化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，其用于其中对端锚聚合酶的抑制、调节和/或调制起作用的疾病。

本发明特别涉及式I化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，其用于抑制端锚聚合酶。

本发明特别涉及式I化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比例的混合物，其用于癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。

本发明特别涉及或预防癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症的方法，其包括向有需要的受试者给予有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体或溶剂合物。

式I化合物可用于或预防的代表性癌症包括，但不限于头、颈、眼、口腔、咽喉、食管、支气管、喉、咽、胸、骨、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、子宫颈、乳房、卵巢、睾丸或其它生殖器官、皮肤、甲状腺、血、淋巴结、肾、肝、胰腺、脑、中枢神经系统、实体瘤和血载肿瘤的癌症。

式I化合物可用于或预防的代表性心血管疾病包括，但不限于再狭窄、动脉粥样硬化及其后遗症例如中风、心肌梗塞、对心、肺、肠、肾、肝、胰腺、脾或脑的缺血性损害。

本发明涉及增殖、自体免疫、消炎或感染疾病病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的式I化合物。

优选本发明涉及其中所述疾病为癌症的方法。

特别优选本发明涉及其中所述疾病为癌症的方法，其中给药与至少一种其它活剂的施用同时、序贯或交替进行。

所公开的式I化合物可与包括抗癌剂的其它已知剂组合施用。如在此使用，术语“抗癌剂”涉及为癌症的目的施用到具有癌症的患者的任何药剂。

本文定义的抗癌可作为唯一疗法施用，或除了本发明的化合物之外还可包括常规手术或放射疗法或化学疗法。所述化学疗法可包括一种或多种以下类别的抗肿瘤剂：

(i) 抗增殖/抗肿瘤/DNA-杀伤剂及其组合，如在医学肿瘤学中使用，诸如烷基化剂(例如，顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚)；抗代谢物(例如，抗叶酸剂，诸如氟嘧啶，如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲赛、甲氨喋呤、胞嘧啶阿糖胞苷、羟基脲和吉西他宾)；抗肿瘤抗生素(例如，蒽环霉素，如阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、放线菌素D和普卡霉素)；抗有丝分裂剂(例如，长春花生物碱类，如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞宾，和紫杉烷类，如紫杉醇和泰索帝)；拓扑异构酶抑制剂(例如，表鬼臼毒素，如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康、伊立替康和喜树碱)和细胞分化剂(例如，全-反-视黄酸、13-顺-视黄酸和芬维A胺)；

(ii) 细胞生长抑制剂，诸如抗雌激素(例如，他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和依多昔芬)、雌激素受体下调剂(例如，氟维司)、抗雄激素(例如，比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如，戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、黄体酮(例如，乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如，阿纳托唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5α-还原酶的抑制剂，诸如非那雄胺；

(iii) 抑制癌症细胞入侵的药剂(例如，金属蛋白酶抑制剂抑制剂，如马马司他和尿激酶纤溶酶原激活物受体功能抑制剂)；

(iv) 生长因子功能抑制剂，例如所述抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体(例如抗-erbb2抗体曲妥单抗[Herceptin^TM]和抗-erbb1抗体西妥昔单抗[C225])、法呢基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，例如上皮生长因子家族的抑制剂(例如，EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，诸如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，AZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(尔洛替尼，OSI-774)和6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))，例如血小板衍生生长因子家族的抑制剂和例如肝细胞生长因子家族的抑制剂；

(v) 抗血管形成药剂，诸如抑制血管内皮生长因子的作用的那些，(例如，抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[Avastin^TM]；化合物，诸如在公布的国际专利申请案WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354中公开的那些和由其他机构研究的化合物(例如，利诺胺、整合素αvβ3功能抑制剂和血管他丁)；

(vi) 血管损伤剂，诸如考布他汀A4和在国际专利申请案WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO 02/08213中公开的化合物；

(vii) 反义疗法，例如针对上文所列的靶标的那些疗法，诸如ISIS 2503、抗-Ras反义；

(viii) 基因方法，例如包括替换诸如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的异常基因的方法；GDEPT(基因导向酶前药疗法)方法，诸如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法；和增加患者对化学疗法或放射疗法的耐受性的方法，诸如多重抗药性基因疗法；和

(ix) 免疫方法，例如包括用于增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离体或体内方法，诸如用诸如白细胞介素2、白细胞介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的细胞因子转染；降低T细胞无反应性的方法；使用转染的免疫细胞诸如细胞因子转染的树突细胞的方法；使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法；和使用抗特应性抗体的方法。

来自下表1的药物优选(但并不排他地)与式I化合物组合。

以下缩写分别是指以下定义：

aq (水性)、h (小时)、g (克)、L (升)、mg (毫克)、MHz (兆赫)、min. (分钟)、mm (毫米)、mmol (毫摩尔)、mM (毫摩尔浓度)、m.p. (熔点)、eq (当量)、mL (毫升)、L (微升)、ACN (乙腈)、AcOH (乙酸)、CDCl₃(氘化氯仿)、CD₃OD (氘化甲醇)、CH₃CN (乙腈)、c-hex (环己烷)、DCC (二环己基碳二亚胺)、DCM(二氯甲烷)、DIC (二异丙基碳二亚胺)、DIEA (二异丙基乙胺)、DMF (二甲基甲酰胺)、DMSO (二甲亚砜)、DMSO-d₆ (氘化二甲亚砜)、EDC (1-(3-二甲基-氨基-丙基)-3-乙基碳二亚胺)、ESI (电喷雾电离)、EtOAc (乙酸乙酯)、Et₂O (乙醚)、EtOH (乙醇)、HATU (二甲氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵六氟磷酸盐)、HPLC (高效液相谱)、i-PrOH (2-丙醇)、K₂CO₃ (碳酸钾)、LC (液相谱)、MeOH (甲醇)、MgSO₄ (硫酸镁)、MS (质谱)、MTBE (甲基叔丁基醚)、NaHCO₃ (碳酸氢钠)、NaBH₄ (硼氢化钠)、NMM (N-甲基吗啉)、NMR (核磁共振)、PyBOP (苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷基-六氟磷酸盐)、RT (室温)、Rt (保留时间)、SPE (固相萃取)、TBTU (2-(1-H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐)、TEA (三乙胺)、TFA (三氟乙酸)、THF (四氢呋喃)、TLC (薄层谱)、UV (紫外线)。

体外测定法的描述

缩写：

GST = 谷胱甘肽-S-转移酶

FRET= 荧光共振能量转移

HTRF? = (同质的时间分辨荧光)

HEPES = 4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸缓冲液

DTT = 二硫苏糖醇

BSA =  牛血清白蛋白

CHAPS =  去垢剂；

CHAPS = 3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵基]-1-丙烷磺酸盐。

链霉抗生物素-XLent?是高级链霉抗生物素-XL665缀合物，对于该缀合物而言，偶联条件已被优化以产生对一些测定，特别是需要高灵敏性那些测定具有改进性能的缀合物。

端锚聚合酶1和2的生物化学活性测试：自动聚ADP核糖化(Autoparsylation)测定

自动聚ADP核糖化测定以两个步骤进行：酶促反应(其中GST-标记的端锚聚合酶-1、resp端锚聚合酶-2将生物素化ADP-核糖由作为共底物的生物素化NAD转化为其自身)和检测反应(其中分析了结合于酶的GST标签的穴状化合物标记的抗-GST和结合生物素-聚ADP核糖化残基的Xlent?标记的-链霉抗生物素之间的时间分辨FRET)。自动聚ADP核糖化活性可经由HTRF信号的增加直接检测。

自动聚ADP核糖化测定按在Greiner低量nb 384-孔微量滴定板中的384-孔HTRF? (Cisbio, Codolet, France)测定格式进行并用于高通量筛选。在试验化合物(10倍稀释浓度)的存在或不存在下，将250 nM GST-标记的端锚聚合酶-1 (1023-1327 aa)、分别约250 nM GST-标记的端锚聚合酶-2 (873-1166 aa)和5 μM bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany)作为共底物以总体积5 μl (50 mM HEPES、4 mM氯化镁、0.05 % Pluronic F-68、1.4 mM DTT、0.5 % DMSO, pH 7.7)于30℃温育90 min。通过加入1 μl 50 mM EDTA溶液停止反应。加入2 μl检测溶液(1.6 μM SA-Xlent? (Cisbio, Codolet, France), 7.4 nM抗-GST-K? (Eu-标记的抗-GST, Cisbio, Codolet, France)在50 mM HEPES、800 mM KF、0.1 % BSA、20 mM EDTA、0.1 % CHAPS, pH 7.0中)。于室温下温育1小时后，用Envision多模阅读器(Perkin Elmer LAS Germany GmbH)以激发波长340 nm (激光模式)和发射波长615 nm和665 nm测量HTRF。检测发射信号的比率。所用的全部值为无抑制剂的反应。所用的药理学零值为在5 μM的最终浓度中的XAV-939 (Tocris)。抑制值(IC50)使用来自GeneData的程序Symyx Assay Explorer?或者Condosseo?测定。

端锚聚合酶的细胞抑制作用的测定

因为端锚聚合酶已被描述为调节Axin2的细胞水平(Huang等, 2009；Nature)，Axin2水平的增加被用作以基于Luminex的测定法测定端锚聚合酶的细胞抑制作用的读出。

将结肠癌细胞系DLD1的细胞以每孔1.5x10⁴个细胞接种于96孔板。第二天，用系列稀释的试验化合物以7个步骤，按0.3%的最终DMSO浓度一式三份处理细胞。24小时后，在溶胞缓冲液(20mM Tris/HCl pH 8.0、150mM NaCl、1% NP40、10%甘油)中溶解细胞并通过96孔过滤板(0.65μm)离心使溶胞产物澄清。通过与结合于荧光羧基珠粒(carboxybeads)的单克隆抗-Axin2抗体(R&D Systems #MAB6078)一起温育从细胞溶胞产物分离Axin2蛋白。然后，用多克隆抗-Axin2抗体(Cell Signaling #2151)和适宜的PE-荧光二次抗体特异性检测结合的Axin2。根据制造商的指示，在Luminex²⁰⁰机器(Luminex Corporation)上，通过计算每孔中100个事件，测定分离的Axin2蛋白的量。试验化合物对端锚聚合酶的抑制作用产生高水平的Axin2，其与可检测的荧光的增加正相关。作为对照，单用溶剂(中性对照)和用端锚聚合酶参考抑制剂IWR-2 (3E-06 M) (其称为对Axin2的最大增加的对照)处理细胞。为了分析，将获得的数据针对未处理的溶剂对照物标准化并使用Assay Explorer软件(Accelrys)对EC₅₀值的测定进行拟合。

PARP-1测定的描述

PARP-1的生物化学活性检测：自动聚ADP核糖化测定

自动聚ADP核糖化测定以两个步骤进行：酶促反应(其中His-标记的Parp-1将生物素化ADP-核糖/ADP-核糖由作为共底物的生物素化NAD/NAD转化为其自身)和检测反应(其中分析了结合于酶的His标签的穴状化合物标记的抗-His抗体和结合生物素-聚ADP核糖化残基的Xlent?标记的-链霉抗生物素之间的时间分辨FRET)。自动聚ADP核糖化活性可经由HTRF信号的增加直接检测。

自动聚ADP核糖化测定按Greiner低量nb 384-孔微量滴定板中的384-孔HTRF? (Cisbio, Codolet, France)测定格式进行。在试验化合物(10倍稀释浓度)的存在或不存在下，将35 nM His-标记的Parp-1 (人，重组体，Enzo Life Sciences GmbH, L?rrach, Germany)和作为共底物的125 nM bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany)和800 nM NAD的混合物以总体积6 μl (100 mM Tris/HCl、4 mM氯化镁、0.01 % IGEPAL? CA630、1mM DTT、0.5 % DMSO, pH 8、13 ng/μl激活的DNA (BPS Bioscience, San Diego, US))于23℃温育150 min。通过加入4 μl的停止/检测溶液(70 nM SA-Xlent? (Cisbio, Codolet, France)、2.5 nM抗-His-K? (Eu-标记的抗-His, Cisbio, Codolet, France)在50 mM HEPES、400 mM KF、0.1 % BSA、20 mM EDTA, pH 7.0中)停止反应。于室温下温育1小时后，用Envision多模阅读器(Perkin Elmer LAS Germany GmbH)以激发波长340 nm (激光模式)和发射波长615 nm和665 nm测量HTRF。检测发射信号的比率。所用的全部值为无抑制剂的反应。所用的药理学零值为在1 μM的最终浓度中的Olaparib (LClabs, Woburn, US)。抑制值(IC50)使用来自GeneData的程序Symyx Assay Explorer?或者Condosseo?测定。

TNKS1和TNKS 2 ELISA测定的描述

TNKS 1和2的生物化学活性测试：活性ELISA (自动聚ADP核糖化测定)

为分析TNKS 1和2的自动聚ADP核糖化活性，进行活性ELISA：在第一步中，在谷胱甘肽涂布的板上捕获GST标记的TNKS。然后在化合物的存在/不存在下，用生物素化NAD进行活性测定。在酶促反应期间，GST标记的TNKS将生物素化ADP-核糖由作为共底物的生物素化NAD转化为其自身。为了检测，加入结合于生物素化TNKS的链霉抗生物素-HRP缀合物，由此被捕获到板上。生物素化resp自动聚ADP核糖化TNKS的量用HRP的发光底物检测。发光信号的水平与自动聚ADP核糖化TNKS的量正相关，并由此与TNKS的活性正相关。

ELISA的活性在384孔谷胱甘肽涂布的微量滴定板(快速捕获谷胱甘肽涂布的板, Biocat, Heidelberg, Germany)上进行。用PBS预平衡各板。然后将板用50 μl 20 ng/孔GST-标记的Tnks-1 (1023-1327 aa, 室内制备)，分别GST-标记的Tnks-2 (873-1166 aa, 室内制备)在测定缓冲液(50 mM HEPES、4 mM氯化镁、0.05 % Pluronic F-68、2 mM DTT, pH 7.7)于4℃温育过夜。用PBS-Tween-20洗涤各板3次。通过于室温下用50 μl封闭液(PBS、0.05 % Tween-20、0.5 % BSA)温育20分钟封闭各孔。此后用PBS-Tween-20洗涤各板3次。酶促反应在试验化合物(10倍稀释浓度)的存在或不存在下，在50 μl反应溶液(50 mM HEPES、4 mM氯化镁、0.05 % Pluronic F-68、1.4 mM DTT、0.5 % DMSO, pH 7.7)中，用10 μM bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany)作为共底物于30℃进行1小时。通过用PBS-Tween-20洗涤3次停止反应。为了检测，加入在PBS/0.05%Tween-20/0.01%BSA中的50 μl 20ng/μl链霉抗生物素、HRP缀合物(MoBiTec, G?ttingen, Germany)并于室温下将各板温育30分钟。用PBS-Tween-20洗涤3次后，加入50 μl SuperSignal ELISA Femto最大灵敏性(Maximum sensitivity)底物溶液(ThermoFisherScientific (Pierce), Bonn, Germany)。于室温下温育1分钟后，用Envision多模阅读器(Perkin Elmer LAS Germany GmbH)于700 nm测量发光信号。所用的全部值为无抑制剂的反应。所用的药理学零值为在5 μM的最终浓度中的XAV-939 (Tocris)。抑制值(IC50)使用来自GeneData的程序Symyx Assay Explorer?或者Condosseo?测定。

在上文和下文中，所有温度都以℃指出。在以下实施例中，“常规处理”是指：如果需要，则加入水，如果需要，则根据最终产物的构成将pH调节到2-10的值，将混合物用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，分离各相，将有机相在硫酸钠上干燥并蒸发，且残留物通过硅胶谱法和/或通过结晶纯化。在硅胶上的R_f值；洗脱液：乙酸乙酯/甲醇9:1。

HPLC/MS条件A

柱：Chromolith PerformanceROD RP-18e, 100 x 3 mm²

梯度：A:B = 99:1-0:100, 在1.8 min内

流速：2.0 ml/min

洗脱液A：水+ 0.05 %甲酸

洗脱液B：乙腈 + 0.04 %甲酸

波长：220 nm

质谱：正模式

HPLC/MS条件B

柱：Chromolith PerformanceROD RP-18e, 100 x 3 mm²

梯度：A:B = 99:1 to 0:100在3.5 min内

流速：2.0 ml/min

洗脱液A: 水+ 0.05 %甲酸

洗脱液B: 乙腈 + 0.04 %甲酸

波长：220 nm

质谱：正模式

¹H NMR在Bruker DPX-300、DRX-400或AVII-400分光计上记录，使用氘化溶剂的残留信号作为内标。化学位移(δ)以相对于残留溶剂信号的ppm报告(对于在DMSO-d₆中的¹H NMR，δ = 2.49 ppm)。¹H NMR数据报告如下：化学位移(多重性，偶合常数和氢原子数)。多重性缩写如下：s (单峰)，d (双峰)，t (三重峰)，q (四重峰)，m (多重峰)，br (宽峰)。

微波化学在得自Personal Chemistry的单一模式的微波反应器EmrysTM Optimiser上进行。

实施例1

3-(4-叔丁基-苯基)-2H-[2,6]二氮杂萘-1-酮("A1")的合成

向3-溴-异烟酸甲酯(648 mg, 3.00 mmol)的DMF (6 ml)溶液中加入双(三苯膦)-氯化钯(II) (210 mg, 0.30 mmol)、碘化亚铜(I) (17.1 mg, 0.090 mmol)、三乙胺(1.25 ml, 9.00 mmol)和1-叔丁基-4-乙炔基-苯(570 mg, 3.60 mmol)。生成的深棕溶液用氮气吹洗，加热至80℃并在密闭的反应小瓶中，于该温度下搅拌3小时。使反应混合物冷却至室温并在真空下减少体积。残留物经硅胶柱谱，用环己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，得到3-(4-叔丁基-苯基乙炔基)-异烟酸甲酯，为棕油状物；HPLC/MS 2.28 min (A), [M+H] 294。

将3-(4-叔丁基-苯基乙炔基)-异烟酸甲酯(786 mg, 2.68 mmol)和聚磷酸(10 g)的混合物加热至80℃并于该温度下搅拌3天。使反应混合物冷却至室温并加入水。滤出产生的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到3-(4-叔丁基-苯基)-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮，为橄榄绿粉末；HPLC/MS 2.16 min (A), [M+H] 280;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 9.08 (s, 1H), 8.76 (d, J=5.2, 1H), 8.00 (d, J=5.1, 1H), 7.86 (d, J=8.6, 2H), 7.58 (d, J=8.6, 2H), 7.55 (s, 1H), 1.33 (s, 9H)。

向3-(4-叔丁基-苯基)-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮(556 mg, 1.99 mmol)在DMF (2 ml)中的悬浮液中加入氨水(25%重量, 2 ml)并将该混合物于80℃搅拌44小时。用水稀释反应混合物。滤出产生的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到3-(4-叔丁基-苯基)-2H-[2,6]二氮杂萘-1-酮和3-(4-叔丁基-苯基)-3-羟基-3,4-二氢-2H-[2,6]二氮杂萘-1-酮的混合物。向该物质在二氯甲烷(4 ml)中的悬浮液中加入甲酸(0.5 ml)并将生成的溶液于室温下搅拌2小时。然后加入饱和碳酸氢钠溶液。滤出产生的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到3-(4-叔丁基-苯基)-2H-[2,6]二氮杂萘-1-酮，为灰白粉末；HPLC/MS 1.88 min (A), [M+H] 279。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.83 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.59 (d, J=5.3, 1H), 7.98 (d, J=5.3, 1H), 7.76 (d, J=8.5, 2H), 7.53 (d, J=8.5, 2H), 7.00 (s, 1H), 1.33 (s, 9H)。

实施例2

4-(1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基)-苯甲酸甲酯("A2")和3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A3")的合成

向2-碘-苯甲酸甲酯(1.31 g, 5.00 mmol)的DMF (10 ml)溶液中加入双(三苯膦)-氯化钯(II) (351 mg, 0.50 mmol)、碘化亚铜(I) (28.5 mg, 0.15 mmol)、三乙胺(2.08 ml, 15.0 mmol)和1-溴-4-乙炔基-苯(905 mg, 5.00 mmol)。生成的深棕溶液用氮气吹洗，加热至80℃并在密闭的反应小瓶中，于该温度下搅拌16小时。使反应混合物冷却至室温并分配于水和二氯甲烷之间。用1 N HCl洗涤有机相，经硫酸钠干燥并真空蒸发。残留物经硅胶柱谱，用环己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，得到2-(4-溴-苯基乙炔基)-苯甲酸甲酯，为棕油状物；HPLC/MS 3.46 min (B), [M+H] 315/317。

将2-(4-溴-苯基乙炔基)-苯甲酸甲酯(1.24 g, 3.95 mmol)和聚磷酸(16 g)的混合物加热至80℃并于该温度下搅拌20小时。使反应混合物冷却至室温并加入水。滤出产生的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到3-(4-溴-苯基)-异苯并吡喃-1-酮，为棕粉末；HPLC/MS 2.18 min (A), [M+H] 301/303。

向3-(4-溴-苯基)-异苯并吡喃-1-酮(1.05 g, 3.50 mmol)在DMF (7 ml)中的悬浮液中加入氨水(25%重量, 7 ml)并将该混合物于80℃搅拌3天。用水稀释反应混合物。滤出产生的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到3-(4-溴-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，为棕粉末；HPLC/MS 1.96 min (A), [M+H] 300/302;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.53 (s, 1H), 8.21 (d, J=7.7, 1H), 7.72 (m, 6H), 7.50 (ddd, J=8.2, 5.4, 2.9, 1H), 6.95 (s, 1H)。

在高压釜中，用氮气吹洗3-(4-溴-苯基)-2H-异喹啉-1-酮(942 mg, 3.14 mmol)和三乙胺(0.70 ml, 5.04 mmol)在甲醇(10 ml)和甲苯(10 ml)中的溶液。加入(1,1'-双(二苯基膦基)-二茂铁)二氯化钯(II) (77 mg, 0.09 mmol)和1,1-双-(二苯基膦基)-二茂铁(70 mg, 0.13 mmol)。然后用一氧化碳充满高压釜并加热至100℃。将高压釜在2-3巴的一氧化碳压力下，于该温度下保持16小时。使高压釜处于大气压下并使反应混合物冷却至室温。形成沉淀，将其滤出，用甲醇洗涤并真空干燥，得到4-(1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基)-苯甲酸甲酯，为灰白针状物；HPLC/MS 2.47 min (B), [M+H] 280;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.61 (s, 1H), 8.22 (d, J=7.9, 1H), 8.05 (d, J=8.4, 2H), 7.95 m, 2H), 7.75 (d, J=3.8, 2H), 7.53 (m, 1H), 7.06 (s, 1H), 3.89 (s, 3H)。

类似地制备4-(7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基)-苯甲酸甲酯("A4")：

HPLC/MS 1.84 min (A), [M+H] 298;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.75 (s, 1H), 8.05 (d, J=8.6, 2H), 7.94 (d, J=8.6, 2H), 7.86 (m, 2H), 7.65 (td, J=8.7, 2.8, 1H), 7.10 (s, 1H), 3.89 (s, 3H)。

向4-(1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基)-苯甲酸甲酯(494 mg, 1.77 mmol)在THF (7 ml)中的悬浮液中加入氯化铈(III) (481 mg, 1.95 mmol)。将该混合物于室温下搅拌1小时。然后加入甲基氯化镁(20%在THF中的溶液, 2.70 ml, 7.44 mmol)并将反应混合物于室温下搅拌另外1小时。小心地将水加入该反应混合物中。混合物通过硅藻土垫过滤并分配于水和二氯甲烷之间。有机相经硫酸钠干燥并蒸发。用叔丁基甲醚研磨残留物，得到3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮，为淡黄粉末；HPLC/MS 1.66 min (A), [M+H] 280;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.46 (s, 1H), 8.20 (dd, J=7.8, 0.6, 1H), 7.72 (m, 4H), 7.58 (d, J=8.6, 2H), 7.48 (ddd, J=8.2, 5.2, 3.1, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.11 (s, 1H), 1.46 (s, 6H)。

类似地制备以下化合物：

6-氟-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A5")

HPLC/MS 1.72 min (A), [M+H] 298;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.51 (s, 1H), 8.25 (dd, J=8.9, 6.0, 1H), 7.72 (d, J=8.5, 2H), 7.58 (d, J=8.5, 2H), 7.50 (dd, J=10.0, 2.5, 1H), 7.30 (td, J=8.8, 2.6, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 1.46 (s, 6H);

7-氟-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A6")

HPLC/MS 1.71 min (A), [M+H] 298;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.58 (s, 1H), 7.85 (dd, J=9.5, 2.8, 1H), 7.80 (dd, J=8.8, 5.3, 1H), 7.72 (d, J=8.5, 2H), 7.62 (m, 1H), 7.57 (d, J=8.5, 2H), 6.95 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 1.46 (s, 6H);

3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-7-甲基-2H-异喹啉-1-酮("A7")

HPLC/MS 1.76 min (A), [M+H] 294;

¹H NMR (300 MHz, DMSO) δ = 11.35 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.72 (d, J=8.5, 2H), 7.56 (m, 4H), 6.86 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 2.45 (s, 3H), 1.46 (s, 6H);

3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)苯基]-2H-2,6-二氮杂萘-1-酮("A23")

HPLC/MS 1.42 min (A), [M+H] 281;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.83 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.61 (d, J=5.3, 1H), 8.00 (d, J=5.3, 1H), 7.75 (m, 2H), 7.60 (m, 2H), 7.02 (s, 1H), 5.11 (s, 1H), 1.47 (s, 6H);

3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)苯基]-2H-2,7-二氮杂萘-1-酮("A24")

HPLC/MS 1.27 min (A), [M+H] 281;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.78 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 8.69 (d, J=5.5, 1H), 7.75 (m, 2H), 7.60 (m, 3H), 6.89 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 1.46 (s, 6H);

7-氯-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A25")

HPLC/MS 1.83 min (A), [M+H] 314;

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ [ppm] 11.65 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.80 – 7.69 (m, 4H), 7.62 – 7.54 (m, 2H), 6.94 (s, 1H), 5.11 (s, 1H), 1.46 (s, 6H);

3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)苯基]-5-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮("A26")

；

8-氟-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A27")

HPLC/MS 1.67 min (A), [M+H] 298;

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ [ppm] 11.42 (s, 1H), 7.82 – 7.70 (m, 2H), 7.67 (td, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 7.62 – 7.53 (m, 2H), 7.50 (dd, J = 8.1, 1.0 Hz, 1H), 7.16 (ddd, J = 11.9, 8.0, 1.1 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.10 (s, 1H), 1.46 (s, 6H);

5-氟-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A28")

HPLC/MS 1.75 min (A), [M+H] 298;

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ [ppm] 11.69 (s, 1H), 8.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.80 – 7.72 (m, 2H), 7.64 – 7.54 (m, 3H), 7.48 (td, J = 8.0, 5.3 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 1.46 (s, 6H);

5,7-二氟-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A33")

HPLC/MS 1.82 min (A), [M+H] 316;

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.82 (s, 1H), 7.80 – 7.68 (m, 4H), 7.63 – 7.54 (m, 2H), 6.83 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 1.46 (s, 6H)。

实施例3

3-(4-羟基甲基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮("A8")的合成

在氮气下，将氢化锂铝(22.8 mg, 0.60 mmol)加入4-(1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基)-苯甲酸甲酯(83.8 mg, 0.301 mmol) (对于制备，参见前述实施例)在THF (3 ml)中的悬浮液中。将反应混合物于室温下搅拌16小时。将几滴甲醇和HCl (2 N含水溶液, 0.5 ml)先后缓慢加入到该反应混合物中。然后经硅藻土垫过滤。蒸发滤液且残留物用叔丁基甲醚研磨，得到3-(4-羟基甲基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，为棕粉末；HPLC/MS 1.55 min (A), [M+H] 252;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.49 (s, 1H), 8.20 (dd, J=7.8, 0.6, 1H), 7.76 (d, J=8.3, 2H), 7.71 (m, 2H), 7.48 (ddd, J=8.2, 4.8, 3.6, 1H), 7.43 (d, J=8.4, 2H), 6.91 (s, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.56 (s, 2H)。

实施例4

7-氟-3-对甲苯基-2H-异喹啉-1-酮("A9")的合成

向2-溴-5-氟-苯甲酸甲酯(466 mg, 2.00 mmol)的DMF (4 ml)溶液中加入双(三苯膦)-氯化钯(II) (104 mg, 0.20 mmol)、碘化亚铜(I) (11.4 mg, 0.060 mmol)、三乙胺(0.83 ml, 6.00 mmol)和1-乙炔基-4-甲基-苯(279 mg, 2.40 mmol)。生成的深棕溶液用氮气吹洗，加热至80℃并在密闭的反应小瓶中，于该温度下搅拌16小时。使反应混合物冷却至室温并分配于水和二氯甲烷之间。用1 N HCl洗涤有机相，经硫酸钠干燥并真空蒸发。残留物经硅胶柱谱，用环己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，得到5-氟-2-对甲苯基乙炔基-苯甲酸甲酯，为棕油状物；HPLC/MS 2.29 min (A), [M+H] 269。

将5-氟-2-对甲苯基乙炔基-苯甲酸甲酯(359 mg, 1.34 mmol)和聚磷酸(4 g)的混合物加热至80℃并于该温度下搅拌20小时。使反应混合物冷却至室温并加入水。使该混合物分配于水和二氯甲烷之间。有机相经硫酸钠干燥并蒸发。残留物经硅胶柱谱，用环己烷/二氯甲烷作为洗脱液，得到7-氟-3-对甲苯基-异苯并吡喃-1-酮，为灰白固体；HPLC/MS 2.16 min (A), [M+H] 255。

向7-氟-3-对甲苯基-异苯并吡喃-1-酮(200 mg, 0.79 mmol)在DMF (1.5 ml)中的悬浮液中加入氨水(25%重量, 1.5 ml)并将该混合物于80℃搅拌3天。用水稀释反应混合物。滤出产生的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到7-氟-3-对甲苯基-2H-异喹啉-1-酮和7-氟-3-羟基-3-对甲苯基-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-酮的混合物。向该物质在二氯甲烷中的悬浮液中(2 ml)加入甲酸(100 μl)并将生成的溶液于室温下搅拌8小时。溶液蒸发至干，得到7-氟-3-对甲苯基-2H-异喹啉-1-酮，为白固体；HPLC/MS 1.92 min (A), [M+H] 254;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.60 (s, 1H), 7.85 (dd, J=9.5, 2.8, 1H), 7.80 (dd, J=8.8, 5.3, 1H), 7.68 (d, J=8.2, 2H), 7.62 (td, J=8.7, 2.8, 1H), 7.30 (d, J=8.0, 2H), 6.94 (s, 1H), 2.37 (s, 3H)。

类似地制备以下化合物：

6-氟-3-对甲苯基-2H-异喹啉-1-酮("A10")

HPLC/MS 1.93 min (A), [M+H] 254;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.51 (s, 1H), 8.24 (dd, J=8.9, 6.0, 1H), 7.68 (d, J=8.2, 2H), 7.49 (dd, J=10.0, 2.5, 1H), 7.30 (m, 3H), 6.87 (s, 1H), 2.37 (s, 3H);

8-氟-3-对甲苯基-2H-异喹啉-1-酮("A11")

HPLC/MS 1.87 min (A), [M+H] 254;

¹H NMR (300 MHz, DMSO) δ = 11.40 (s, 1H), 7.67 (m, 3H), 7.49 (d, J=7.3, 1H), 7.30 (d, J=8.0, 2H), 7.16 (ddd, J=12.0, 8.0, 1.0, 1H), 6.88 (d, J=2.3, 1H), 2.37 (s, 3H);

5-氟-3-对甲苯基-2H-异喹啉-1-酮("A12")

HPLC/MS 1.98 min (A), [M+H] 254;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.66 (s, 1H), 8.03 (d, J=7.9, 1H), 7.72 (d, J=8.2, 2H), 7.58 (ddd, J=10.3, 8.0, 1.1, 1H), 7.47 (td, J=8.0, 5.3, 1H), 7.31 (d, J=7.9, 2H), 6.82 (s, 1H), 2.37 (s, 3H);

5-甲基-3-(对甲苯基)-2H-异喹啉-1-酮("A29")

HPLC/MS 1.98 min (A), [M+H] 250;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.47 (s, 1H), 8.07 (ddt, J=8.0, 1.5, 0.7, 1H), 7.72 (m, 2H), 7.55 (ddd, J = 7.2, 1.4, 0.9, 1H), 7.35 (dd, J = 8.0, 7.2, 1H), 7.31 (m, 2H), 6.82 (s, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.37 (s, 3H);

3-(对甲苯基)-5-(三氟甲基)-2H-异喹啉-1-酮("A30")

HPLC/MS 2.11 min (A), [M+H] 304;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.92 (s, 1H), 8.51 (d, J=8.0, 1H), 8.13 (d, J=7.1, 1H), 7.64 (m, 3H), 7.34 (d, J=7.9, 2H), 6.72 (m, 1H), 2.38 (s, 3H)。

实施例5

3-[4-(1-氟-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A13")的合成

将3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮(55.8 mg, 0.20 mmol)在二氯甲烷(0.5 ml)中的悬浮液冷却至-78℃。加入二乙氨基三氟化硫(105 μl, 0.80 mmol)。使反应混合物在30分钟内达到室温(形成澄清溶液)。蒸发反应混合物且残留物用水和饱和碳酸氢钠溶液处理。滤出固体并经硅胶柱谱，用环己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，得到3-[4-(1-氟-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮，为精细白粉末；HPLC/MS 1.94 min (A), [M+H] 282;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.49 (s, 1H), 8.22 (d, J=8.1, 1H), 7.83 (d, J=8.2, 2H), 7.73 (m 2H), 7.54 (d, J=8.4, 2H), 7.50 (ddd, J=8.2, 5.0, 3.3, 1H), 6.94 (s, 1H), 1.70 (d, J=22.2, 6H)。

实施例6

3-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-2H-[2,7]二氮杂萘-1-酮("A14")的合成

向4-溴-烟腈(1.10 g, 6.00 mmol)的DMF (20 ml)溶液中加入双(三苯膦)-氯化钯(II) (211 mg, 0.30 mmol)、碘化亚铜(I) (34 mg, 0.18 mmol)、三乙胺(1.66 ml, 12.0 mmol)和1-溴-4-乙炔基-苯(1.19 g, 6.6 mmol)。混合物用氮气吹洗，加热至80℃并在密闭的反应小瓶中于该温度下搅拌4小时。使反应混合物冷却至室温并分配于水和二氯甲烷之间。用1 N HCl洗涤有机相，经硫酸钠干燥并真空蒸发。残留物经硅胶柱谱，用环己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，得到4-(4-溴-苯基乙炔基)-烟腈，为淡黄粉末；HPLC/MS 2.09 min (B), [M+H] 283/285。

将4-(4-溴-苯基乙炔基)-烟腈(546 mg, 1.93 mmol)和聚磷酸(8 g)的混合物加热至80℃并于该温度下搅拌20小时。使反应混合物冷却至室温并加入水。滤出产生的沉淀，用水洗涤并用饱和碳酸氢钠溶液研磨。滤出固体，用水洗涤并真空干燥，得到3-(4-溴-苯基)-吡喃并[3,4-c]吡啶-1-酮，为浅米固体；HPLC/MS 1.92 min (A), [M+H] 302/304。

向3-(4-溴-苯基)-吡喃并[3,4-c]吡啶-1-酮(378 mg, 1.25 mmol)在DMF (3 ml)中的悬浮液中加入氨水(25%重量, 3 ml)并将该混合物于80℃搅拌20小时。用水稀释反应混合物。滤出产生的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到3-(4-溴-苯基)-2H-[2,7]二氮杂萘-1-酮，为黄固体；HPLC/MS 1.48 min (A), [M+H] 301/303。

用氮气吹洗3-(4-溴-苯基)-2H-[2,7]二氮杂萘-1-酮(63.2 mg, 0.210 mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(65.5 mg, 0.32 mmol)和碳酸氢钠(21.2 mg, 0.25 mmol)在DMF (1 ml)和水(0.25 ml)中的悬浮液并加热至40℃。然后加入双(三苯膦)-氯化钯(II) (3.0 mg, 0.004 mmol)。将反应混合物加热至80℃并于该温度下搅拌20小时。使该混合物冷却至室温并加入过量的水。滤出产生的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到3-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-2H-[2,7]二氮杂萘-1-酮，为橄榄绿固体；HPLC/MS 1.33 min (A), [M+H] 303;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.80 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 8.69 (d, J=5.5, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.82 (d, J=8.5, 2H), 7.72 (d, J=8.5, 2H), 7.59 (d, J=5.1, 1H), 6.94 (s, 1H), 3.89 (s, 3H)。

实施例7

3-[4-(1-甲氧基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮("15")的合成

向3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮(83.8 mg, 0.30 mmol)的甲醇(1 ml)中的悬浮液中加入甲苯-4-磺酸一水合物(5.2 mg, 0.030 mmol)。将反应混合物于室温下搅拌5天。蒸发反应混合物(白悬浮液)，残留物经硅胶柱谱，用环己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，得到3-[4-(1-甲氧基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮，为白晶体；HPLC/MS 2.66 min (B), [M+H] 294;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.45 (s, 1H), 8.22 (dd, J=7.8, 0.7, 1H), 7.81 (d, J=8.6, 2H), 7.73 (m, 2H), 7.50 (m, 3H), 6.94 (s, 1H), 3.04 (s, 3H), 1.50 (s, 6H)。

实施例8

7-氟-3-{4-[1-(2-羟基-乙氧基)-1-甲基-乙基]-苯基}-2H-异喹啉-1-酮("A16")和7-氟-3-(4-异丙烯基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮("A17")的合成

向7-氟-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮(29.7 mg, 0.10 mmol)在乙烷-1,2-二醇(0.9 ml)中的悬浮液中加入甲苯-4-磺酸一水合物(3.8 mg, 0.020 mmol)。将反应混合物于室温下搅拌11天。使反应使该混合物分配于水和二氯甲烷之间。有机相经硫酸钠干燥并蒸发。残留物经硅胶柱谱，用环己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，得到两种产物：

7-氟-3-{4-[1-(2-羟基-乙氧基)-1-甲基-乙基]-苯基}-2H-异喹啉-1-酮，为白固体；HPLC/MS 1.73 min (A), [M+H] 342;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.60 (s, 1H), 7.86 (dd, J=9.5, 2.8, 1H), 7.81 (dd, J=8.8, 5.4, 1H), 7.77 (d, J=8.4, 2H), 7.63 (td, J=8.7, 2.8, 1H), 7.55 (d, J=8.5, 2H), 6.98 (s, 1H), 4.56 (t, J=5.4, 1H), 3.50 (q, J=5.3, 2H), 3.19 (t, J=5.6, 2H), 1.50 (s, 6H)

和

7-氟-3-(4-异丙烯基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，为白固体；HPLC/MS 2.05 min (A), [M+H] 280;

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 11.64 (s, 1H), 7.86 (dd, J=9.5, 2.8, 1H), 7.82 (dd, J=8.9, 5.4, 1H), 7.79 (d, J=8.5, 2H), 7.63 (m, 3H), 7.01 (s, 1H), 5.54 (s, 1H), 5.18 (m, 1H), 2.15 (s, 3H)。

实施例9

7-氟-3-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A18")的合成

用氮气吹洗3-(4-溴-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮(159 mg, 0.50 mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(114 mg, 0.55 mmol)和碳酸氢钠(50.4 mg, 0.60 mmol)在DMF (1 ml)和水(0.5 ml)中的悬浮液并加热至40℃。然后加入双(三苯膦)-氯化钯(II) (7.0 mg, 0.01 mmol)。将反应混合物加热至80℃并于该温度下搅拌20小时。使该混合物冷却至室温并加入过量的水。滤出生成的沉淀并用水洗涤。残留物经使用甲醇/二氯甲烷的硅胶柱谱，得到7-氟-3-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮，为赭固体；HPLC/MS 2.43 min (B), [M+H] 320;

¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ = 11.60 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.96 (d, J=0.4, 1H), 7.86 (dd, J=9.4, 2.8, 1H), 7.80 (m, 3H), 7.69 (d, J=8.5, 2H), 7.62 (td, J=8.7, 2.8, 1H), 7.00 (s, 1H), 3.88 (s, 3H)。

实施例10

3-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-2H-[2,6]二氮杂萘-1-酮("A19")的合成

向3-碘-异烟腈(911 mg, 3.96 mmol)的DMF (10 ml)溶液中加入双(三苯膦)-氯化钯(II) (139 mg, 0.20 mmol)、碘化亚铜(I) (22.6 mg, 0.12 mmol)、三乙胺(1.10 ml, 7.9 mmol)和1-溴-4-乙炔基-苯(716 mg, 3.96 mmol)。将该混合物用氮气吹洗，加热至80℃并在密闭的反应小瓶中，于该温度下搅拌18小时。使反应混合物冷却至室温并分配于二氯甲烷和1 N HCl之间。有机相经硫酸钠干燥并蒸发。残留物经硅胶柱谱，用环己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，得到3-(4-溴-苯基乙炔基)-异烟腈，为米固体；HPLC/MS 2.13 min (A), [M+H] 283/285。

将3-(4-溴-苯基乙炔基)-异烟腈(855 mg, 3.02 mmol)和聚磷酸(8 g)的混合物加热至80℃并于该温度下搅拌4天。使反应混合物冷却至室温并加入水。滤出产生的沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到3-(4-溴-苯基)-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮，为灰固体；HPLC/MS 1.98 min (A), [M+H] 302/304。

向3-(4-溴-苯基)-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮(622 mg, 2.06 mmol)在DMF (4 ml)中的悬浮液加入氨水(25%重量, 4 ml)并将该混合物于80℃搅拌20小时。用水稀释反应混合物。滤出产生的沉淀，用水洗涤，在真空下干燥并悬浮于二氯甲烷(4 ml)中。加入三氟乙酸(400 μl)并将混合物于室温下搅拌过夜。滤出固体并用二氯甲烷洗涤。残留物用饱和碳酸氢钠水溶液研磨。滤出固体，用水洗涤并真空干燥，得到3-(4-溴-苯基)-2H-[2,6]二氮杂萘-1-酮，为灰固体；HPLC/MS 1.66 min (A), [M+H] 301/303。

用氮气吹洗3-(4-溴-苯基)-2H-[2,6]二氮杂萘-1-酮(55.0 mg, 0.18 mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(57 mg, 0.27 mmol)和碳酸氢钠(18.4 mg, 0.22 mmol)在DMF (0.5 ml)和水(0.25 ml)的悬浮液并加热至40℃。然后加入双(三苯膦)-氯化钯(II) (2.6 mg, 0.004 mmol)。将反应混合物加热至80℃并于该温度下搅拌20小时。使该混合物冷却至室温并加入过量的水。滤出产生的沉淀，用水和2-丙醇洗涤并真空干燥，得到3-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-2H-[2,6]二氮杂萘-1-酮，为灰固体；HPLC/MS 1.47 min (A), [M+H] 303;

¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ = 11.84 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.61 (d, J=5.3, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.00 (d, J=5.3, 1H), 7.97 (d, J=0.4, 1H), 7.81 (d, J=8.5, 2H), 7.71 (d, J=8.5, 2H), 7.07 (s, 1H), 3.89 (s, 3H)。

实施例11

3-[4-(1-氨基-1-甲基-乙基)苯基]-7-氟-2H-异喹啉-1-酮("A20")的合成

在用冰外部冷却下，向7-氟-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮(149 mg, 0.50 mmol)和叠氮化钠(71.5 mg, 1.10 mmol)在二氯甲烷(1 ml)中的悬浮液中滴加三氟乙酸(316 μl, 4.1 mmol)的二氯甲烷(0.5 ml)溶液。将反应混合物于室温下搅拌2小时。加入水和25%氨水(0.5 ml)。分离有机相并用二氯甲烷提取水相。合并的有机相经硫酸钠干燥并蒸发，得到3-[4-(1-叠氮基-1-甲基-乙基)-苯基]-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，为白粉末；HPLC/MS 2.07 min (A), [M+H] 323。

向3-[4-(1-叠氮基-1-甲基-乙基)-苯基]-7-氟-2H-异喹啉-1-酮(141 mg, 0.44 mmol)的4 ml THF溶液中加入锌粉(143 mg, 2.19 mmol)和乙酸(250 μl, 4.37 mmol)并将混合物于室温下搅拌18小时。用THF稀释悬浮液并用少量25%盐酸酸化，以得到澄清溶液。加入更多的THF和甲醇。过滤混合物并蒸发滤液。残留物用水研磨，滤出固体，用水洗涤并真空干燥，得到3-[4-(1-氨基-1-甲基-乙基)-苯基]-7-氟-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐，为白固体；HPLC/MS 1.35 min (A), [M+H] 297;

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ [ppm] 11.70 (s, 1H), 8.79 (s, 3H), 7.91 – 7.78 (m, 4H), 7.73 – 7.68 (m, 2H), 7.64 (td, J = 8.7, 2.8 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 1.68 (s, 6H)。

实施例12

7-氟-3-[4-(2-甲基四氢呋喃-2-基)苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A21")的合成

按照M. McConville等., Org. Biomol. Chem., 2010, 8, 5614 – 5619制备。

将3-(4-溴-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮(159 mg, 0.50 mmol)、乙酸钯(II) (5.6 mg, 0.03 mmol)、1,3-双-(二苯基膦基)-丙烷(21.3 mg, 0.05 mmol)、4-戊烯-1-醇(51.7 mg, 0.60 mmol)和二异丙基铵-四氟硼酸盐(142 mg, 0.75 mmol)称重到反应小瓶中。加入1,4-二氧杂环己烷(1 ml)并用氮气吹洗反应小瓶。将生成的悬浮液搅拌1分钟，加入三乙胺(208 μl, 1.50 mmol)并用氮气吹洗反应小瓶并封闭。将反应混合物于110℃搅拌过夜。使反应混合物冷却至室温。加入正庚烷(1.5 ml)和四氟硼酸(0.21 ml, 54%在乙醚中的溶液, 1.5 mmol)并将生成的双相混合物于室温下剧烈搅拌3小时。加入三乙胺(69 μl, 0.5 mmol)，然后使反应混合物分配于水和二氯甲烷之间。有机相经硫酸钠干燥并蒸发。残留物经硅胶柱谱，用环己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，得到7-氟-3-[4-(2-甲基-四氢-呋喃-2-基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮，为白粉末；HPLC/MS 2.78 min. (B), [M+H] 324; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ [ppm] 11.58 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 9.5, 2.8 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.8, 5.3 Hz, 1H), 7.77 – 7.71 (m, 2H), 7.62 (td, J = 8.7, 2.8 Hz, 1H), 7.53 – 7.46 (m, 2H), 6.95 (s, 1H), 3.94 (td, J = 7.8, 6.4 Hz, 1H), 3.83 (td, J = 8.0, 5.7 Hz, 1H), 2.11 (ddd, J = 12.0, 8.0, 5.7 Hz, 1H), 2.04 (dt, J = 11.9, 7.4 Hz, 1H), 1.97 (dtt, J = 15.4, 7.7, 5.6 Hz, 1H), 1.74 (dqd, J = 12.0, 7.6, 6.4 Hz, 1H), 1.46 (s, 3H)。

实施例13

7-氟-3-[4-(3-羟基氧杂环丁烷-3-基)苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A22")的合成

类似地，制备以下化合物：

7-氟-3-[4-(1-羟基环丙基)苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A31")

。

实施例14

7-氯-3-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮("A32")的合成

如在实施例6 (最后步骤)中所述进行反应。

获得7-氯-3-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-2H-异喹啉-1-酮，为灰固体；HPLC/MS 1.87 min (A), [M+H] 336; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ [ppm] 11.66 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.84 – 7.77 (m, 2H), 7.75 (m, 2H), 7.69 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.99 (s, 1H), 3.88 (s, 3H)。

药理学数据

表2：一些代表性式I化合物的端锚聚合酶的抑制作用

IC₅₀: < 0.3μM = A  0.3-3μM = B  3-50μM = C

表3：一些代表性式I化合物的端锚聚合酶的抑制作用

IC₅₀: < 0.3μM = A  0.3 - 3μM = B  3-50μM = C

在表3中显示的化合物是根据本发明的特别优选的化合物。

在表1中显示的化合物为根据本发明的特别优选的化合物。

以下实施例涉及药物：

实施例A：注射小瓶

将100 g的式I活性成分和5 g磷酸氢二钠在3 l双蒸水中的溶液使用2N盐酸调节到pH 6.5，无菌过滤，转移到注射小瓶中，在无菌条件下冻干并在无菌条件下密封。各注射小瓶含有5 mg活性成分。

实施例B：栓剂

将20 g的式I活性成分与100 g大豆卵磷脂和1400 g可可脂的混合物熔融，注入模具中并允许冷却。各栓剂含有20 mg活性成分。

实施例C：溶液剂

溶液剂由1 g的式I活性成分、9.38 g NaH₂PO₄?2H₂O、28.48 g Na₂HPO₄?12H₂O和0.1 g苯扎氯铵在940 ml双蒸水中制备。将pH调节到6.8，且将溶液补充到1L并通过照射灭菌。该溶液可以滴眼剂形式使用。

实施例D：软膏

将500 mg的式I活性成分与99.5 g凡士林(Vaseline)在无菌条件下混合。

实施例E：片剂

将1 kg的式I活性成分、4 kg乳糖、1.2 kg马铃薯淀粉、0.2 kg滑石粉和0.1kg硬脂酸镁的混合物用以下方法以常规方式压制以给出片剂：所述方法使得每个片剂含有10 mg活性成分。

实施例F：锭剂

类似于实施例E压制片剂，且随后用蔗糖、马铃薯淀粉、滑石粉、黄蓍胶和染料的包衣以常规方式涂布片剂。

实施例G：胶囊剂

将2 kg的式I活性成分用以下方法以常规方式引入硬明胶胶囊中：所述方法使得各胶囊含有20 mg活性成分。

实施例H：安瓿

将1 kg的式I活性成分在60 L双蒸水中的溶液无菌过滤，转移到安瓿中，在无菌条件下冻干并在无菌条件下密封。各安瓿含有10 mg活性成分。