干细胞外泌体在制备用于铀中毒的药物中的应用的制作方法

1.本发明涉及化学制药技术领域，具体涉及干细胞外泌体在制备用于铀中毒的药物中的应用。

背景技术：

2.铀(u)是一种天然的放射性重金属，其释放的α和β粒子具有较高的线性能量转移，主要用于核能生产。贫铀(depleted uranium,du)主要由
238
u和0.2％-0.3％的
235
u组成，是天然铀精制浓缩后用于核燃料的残余产物。一旦进入人体，表现出重金属毒性和放射性毒性的双重作用。铀被人体吸收后，进入血液后，主要形成最稳定的u(vi)形成铀酰离子(uo
22+
),铀酰离子[uo
22+
，u(vi)]与生物大分子(主要是转铁蛋白(50％)、白蛋白(胎球蛋白a,30％)和骨桥蛋白(20％)或小分子配体(如碳酸氢盐、柠檬酸和磷酸盐)络合，在生理ph值下形成稳定的络合物，其中，约35％的u(vi)与蛋白质结合，65％与碳酸盐结合。转铁蛋白(transferrin,tf)是一种对铀具有亲和力的关键蛋白质，铀酰离子与蛋白质形成的配合物进入细胞，主要受蛋白质的配位化学控制。在损伤早期，肾脏是du的关键靶器官。du肾毒性的特点是铀酰离子主要沉积在肾小管上皮细胞内，进入线粒体和溶酶体，导致细胞死亡和肾小管损伤；在损伤后期，骨骼是主要的靶器官。
[0003]
研究表明，大剂量的du污染会对人体健康造成严重危害，甚至导致肾功能衰竭，并具有致癌、致畸和诱变的潜力。但目前还没有到理想的铀中毒排出剂。大多数du的螯合剂都有一定的副作用，如欧盟和美国能源部推荐的碳酸氢钠(sodium bicarbonate,sb)，可能会引起酸碱平衡失调、低钾血症和碱中毒等副作用；二乙三胺五乙酸(dtpa)则具有不易穿透细胞膜、体内半衰期短、肝肾毒性等副作用。研究表明，血液中的大部分铀酰离子在进入人体后的3天内，通过肾脏、肠道等途径被排出体外。体内残留的贫铀是肾脏等靶器官严重受损的主要原因。
[0004]
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,mscs)是多向分化的多能干细胞，可通过分子粘附和识别靶向损伤的组织，具有重要的免疫调节能力，被广泛应用于组织修复、移植免疫调节等领域，特别是顺铂、甘油和缺血-灌注诱导的啮齿动物急性肾损伤具有显著的修复作用，增强了其功能和形态的恢复，但msc细胞的免疫排斥风险仍未解决。研究发现mscs主要定位于肾小管，仅在肾血管中短暂聚集，具有维持肾小管细胞分化和肾小管再生的作用。同时，可通过分泌机制提高受伤动物的存活率。除了mscs分泌的细胞因子具有修复和疾病的作用外，mscs的外泌体(exs)对急性肾损伤具有显著的修复作用，且其作用强于mscs单独。
[0005]
exs是直径在30-130纳米之间的单层囊泡，由细胞分泌到细胞外空间。exs可以将蛋白质、dna、rna、microrna等物质从亲代细胞转移到其他细胞。它们可以远距离、长期、多靶点有效作用于相应的组织。由于外泌体的纳米尺寸和脂质外层的特性，静脉注射后很容易通过血液循环到达损伤部位。外泌体与体细胞之间有三种作用机制:(1)外泌体通过粘附分子和受体与靶细胞连接，激活下游信号。如间充质干细胞和exs膜上有转铁蛋白受体
(transferrin receptor，tfr)，骨桥蛋白(osteopontin，opn)受体整合素和cd44，白蛋白(albumin)受体gp60。因此，推测转铁蛋白、opn和白蛋白与血液中的铀酰离子结合，再与msc exs膜上相应受体结合，可显著降低铀酰离子复合物与肾小管细胞的结合机会，减少肾铀沉积。mscs表达的tf受体数量为每个细胞10772
±
6626个，结合位点多。因此，msc-exs膜上对应的受体数量也应该比较大，对铀中毒应该有比较显著的效果，且可挤压、变形等通过泌尿系统排出体外。(2)此外，外泌体与靶细胞的直接融合促进了外泌体信号分子的转移；(3)外泌体通过内吞作用将内容物转移到细胞内。在这个过程中，exs的脂质双分子层结构可以防止内容物的降解，维持酶和遗传物质的活性，在不引起受体细胞排斥的情况下模拟亲本细胞的功能，甚至可以替代亲本细胞履行功能。多项研究发现外泌体在细胞凋亡、炎症反应、免疫反应、血管生成等过程中发挥重要作用。外泌体不仅对肾脏损伤有恢复作用，对各种器官损伤也有恢复作用，如心肌梗死和再灌注损伤、肢体缺血、肝损伤、缺氧肺损伤等。虽然如上所述的，msc-exs对多种肾损伤具有明显的修复和作用，但其机制尚不完全清楚。

技术实现要素：

[0006]
本发明提供了一种干细胞外泌体在制备用于铀中毒的药物中的应用。
[0007]
在根据本发明的一个实施方案中，其含有10-50μg/ml的干细胞外泌体。
[0008]
本发明还提供了一种用于铀中毒的药物，其含有有效量的干细胞外泌体。
[0009]
在根据本发明的一个实施方案中，所述干细胞外泌体含量为10-50μg/ml。
[0010]
在根据本发明的一个实施方案中，还含有有效量的间充质干细胞和/或碳酸氢钠。
[0011]
在根据本发明的一个实施方案中，碳酸氢钠用量为110μl浓度为5％的水溶液。
[0012]
在根据本发明的一个实施方案中，msc细胞用量为1
×
106。
[0013]
本发明的上述技术方案的有益效果如下：
[0014]
本发明中利用干细胞外泌体能够有效地减轻肾脏中的铀沉积，并加强修复作用，可保护人肾小管上皮hk-2细胞免受铀损伤，降低细胞内ros和mda水平，增加gsh水平，增强sod活性，减少细胞凋亡，改善肾脏和骨髓的病理形态，促进尿中铀排泄，减少铀在体内滞留。
附图说明
[0015]
图1为exs的表征图谱，其中，a:exs的nta尺寸图；b:exs透射电镜图；c:exs的western blot鉴定图；
[0016]
图2为exs对hk-2细胞du损伤的保护作用，其中，a:不同浓度du对hk-2细胞增殖率的影响；b:exs对hk-2细胞增殖率的提高；c:细胞内ros荧光强度；d:细胞内平均ros荧光强度；
[0017]
图3为exs对细胞抗氧化的作用检测，其中，a:exs对细胞内gsh含量的影响；b:exs对细胞内sod活性的影响；c:exs对细胞内mda含量的影响。*p《0.05,**p《0.01
[0018]
图4为exs对细胞凋亡的影响。其中，a:exs对细胞内线粒体膜电位的影响；b:exs对细胞中caspase3/7蛋白含量的影响；c:流式细胞仪检测exs对细胞凋亡的影响。*p《0.05,**p《0.01
[0019]
图5为exs改善贫铀损伤生化指标的效果；其中，a:不同铀剂量下小鼠的存活；b-c:肾功能指数，**p《0.01；d-f:肝功能指数；g-i:血常规指数；
[0020]
图6为exs改善du损伤形态作用；
[0021]
图7为exs对小鼠铀排泄的促排效应；其中，a:1-4d尿量；b:1-4d尿中铀含量；c:第20d时股骨中铀含量；d:第20d时肾脏中的铀含量；e:第20d时血液中的铀含量；
[0022]
图8为western blot和免疫组化检测小鼠肾脏中凋亡相关蛋白和与铀酰离子结合蛋白的表达，其中，a:western blot检测小鼠肾脏中凋亡相关蛋白电泳条形图；b:western blot检测小鼠肾脏与铀酰离子结合蛋白电泳条形图；c:免疫组化观察肾脏与铀酰离子结合蛋白的表达。
具体实施方式
[0023]
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。
[0024]
若未进行特别说明，本实施例中所用的试剂均为分析纯，所有化学反应进度均以薄层谱进行检测。
[0025]
实施例1材料与方法
[0026]
1.1exs的分离、提取和鉴定
[0027]
人脐带间充质干细胞(huc-mscs)由富美干细胞生物技术公司(中国重庆)分离和培养。实验中使用的mscs均来源于经流式细胞术彻底表征的5～10代。
[0028]
用福美生物提供的间充质干细胞无血清培养液培养huc-mscs至p6代，收集培养液后，差速离心分离exs提取。提取的外泌体用蛋白裂解液裂解，超声破碎10min，冰置30min，丙酮沉淀过夜，12000g离心20min,5m尿素重溶。然后用bradford蛋白浓度测定试剂盒(takara,aig1851a)测定exs蛋白浓度。
[0029]
exs的粒度由nanosight纳米颗粒粒度分析仪(malvern instruments,uk,ns300)测定，具体参数根据用户手册(nanosight ns300用户手册，man0541-01-en-00,2017)设置。为了测量exs尺寸分布，使用了malvern panalytical ltd公司的nanosight software nta3.3.301(malvern,uk)。透射电镜(hitachi,ht7700)观察外泌体的形态。western blot检测exs标记蛋白alix、tsg101、cd9。
[0030]
1.2细胞培养
[0031]
人近端肾小管(hk-2)细胞系(atcc crl-2190)购买自中国科学院(中国北京)。hk-2细胞在含有10％(vol/vol)fbs(hyclone,usa)、100单位/ml青霉素g和100μg/ml硫酸链霉素的rpmi 1640(gibco,usa)中生长。所有细胞均在空气中5％(vol/vol)co2的37℃加湿培养箱中培养。
[0032]
1.3exs对细胞增殖和抗氧化作用
[0033]
为确定du中毒的最佳浓度，使用cck-8试剂盒在du终浓度为62.5μm、125μm、250μm、500μm和1000μm培养24h后测定hk-2细胞活力。
[0034]
为了评价exs对du中毒细胞增殖活性的影响，分别用10μg/ml和50μg/ml的exs培养hk-2细胞24小时，然后分别用250μm、500μm du溶液污染24h。采用cck-8检测各组细胞增殖活性。各组血清ros、sod、gsh、mda水平分别按照活性氧(ros)测定试剂盒(beyotime,
s0033s)、总超氧化物歧化酶(wst-8)测定试剂盒(beyotime,s0101s)、还原性谷胱甘肽(gsh)测定试剂盒(南京建成生物工程学院，a-006-2-1)和脂质过氧化mda测定试剂盒(beyotime,s0131s的说明书进行测定。
[0035]
1.4exs的抗凋亡作用
[0036]
各组对hk-2细胞的处理与前次实验一致。流式细胞术检测annexinv-fitc和pi双染(bd,556547)后细胞凋亡情况。采用jc-1检测试剂盒(beyotime,c2006)和caspase
–
3/7活性检测试剂盒(beyotime,c1116)检测hk-2细胞线粒体膜电位和caspase-3活性。
[0037]
1.5动物和
[0038]
在实验中，areva-nc(法国)提供了六水合硝酸尿素(uo2(no3)
2-6h2o)，由99.74％的
238
u、0.255％的
235
u和0.0055％的
234
u组成。du的比活度为2.4
×
104bq/g。所用试剂均为微量元素分析级试剂，水为玻璃蒸馏水。
[0039]
根据陆军医科大学动物伦理委员会批准的方案，雄性balb/c小鼠(6周大，18
±
0.37g)购自陆军医科大学动物中心(中国重庆)。研究设计和所有动物实验程序均按照实验动物指南和使用(实验动物资源研究所)进行，陆军军医大学医学研究机构动物护理和使用委员会(iacuc)特别批准了该研究设计。
[0040]
将60只小鼠随机分成六组。五组分别腹腔注射0.5mg du/kg、1.0mg du/kg、2.0mg du/kg、4.0mg du/kg和6.0mg du/kg。正常对照组腹腔注射溶剂。每天观察小鼠的存活率，最终确定生物效应的最佳du暴露剂量为2mg/kg。
[0041]
30只小鼠随机分为5组。4组均腹腔注射贫铀溶液2.0mg/kg(du组)。贫铀暴露后立即向尾静脉注射100μg msc-exs(exs组)、1
×
106msc细胞(msc组)，1组腹腔注射110μl 5％ sb(sb组)。对照组不做任何。每天测定尿量和尿中du含量并记录。第5天检测血常规及肝肾功能。取小鼠肝、肾、脾、骨髓进行he染。第20天用icp-ms 7800(agilent,usa)根据文献(hao y,ren j,liu j,yang z,liu c,li r,su y.immunological changes of chronic oral exposure to depleted uranium in mice.toxicology.2013 jul 5；309:81-90.)测定血、肾和骨的铀含量。
[0042]
1.6蛋白质印迹分析
[0043]
根据常规程序从外泌体和肾组织中提取总蛋白。将所有蛋白质样品与sds-page上样缓冲液(碧云天)混合，加热至95℃10分钟，在8-12％ sds-page凝胶(碧云天)上分离，电转移到聚偏二氟乙烯膜(碧云天)上，并用quickblock封闭
tm
封闭缓冲液(碧云天)1小时。随后使用了以下抗体：抗alix(1:2000，3a9，abcam)，tsg101(1:2000，3a9，abcam)，cd9(1:2000，epr2949，abcam)，β-actin(1:2000，beyotime),caspase-3(1:2000,5a1e,cell signaling technology),bax(1:2000,d2e11,cell signaling technology)，caspase-9(1:2000,cell signaling technology)。
[0044]
1.7免疫组织化学
[0045]
肾组织样本经福尔马林固定、石蜡包埋和切片。将载玻片脱蜡，并在微波炉中用1mmol/l edta和热介导抗原回收溶液预处理。在室温下，在水合室中进行进一步的步骤。将载玻片在山羊血清中预培养15分钟。应用白蛋白(1:200,66051-1-1g，proteintech)、骨桥蛋白(1:200,12952-1-ap，proteitetech)、转铁蛋白(1:200，17435-11ap，protientech)过夜孵育。然后将载玻片在pbs中清洗，并用hrp偶联抗小鼠igg聚合物(pv-6002，zsgb bio)或
hrp偶联抗兔igg共聚物(pv-6002,zsgb bio)检测。所有载玻片均用苏木精复染。
[0046]
1.8统计分析
[0047]
所有数据均以平均值
±
标准差(mean
±
sd)表示，数据结果采用spss 24.0、graphpad prism 8.0和image j软件进行统计学分析。数据采用单因素方差分析，进一步采用duncan's multiple range分析测试。当p《0.05时认为有统计学意义。
[0048]
2.1分离出的exs特征
[0049]
bca法测定exs蛋白浓度为0.943mg/ml。透射电镜观察到尺寸不均匀的exs，呈现典型的碟状双层膜结构(图1b)。粒径结果显示，主峰在134nm左右，两侧峰分别在199nm和297nm处(图1a)。由于exs可以通过内吞或胞饮作用被细胞摄取，外泌体大小的增加可能是由于团聚和融合。western blot检测显示huc-mscs中有标志性蛋白alix、tsg101和cd9的表达(图1c)。结合粒度分析和外观分析结果，证实样品中含有exs组分。
[0050]
实施例2msc-exs对du中毒肾小管上皮细胞的保护作用
[0051]
62.5μm-1000μm的du作用于hk-2细胞，观察细胞活力。通过cck-8实验，确定du对hk-2细胞的半致死剂量为500μm(图2的a)，因此本研究选择铀的剂量分别为250μm和500μm。用浓度为10μg/ml和50μg/ml的exs对hk-2细胞进行预处理，24h后加入250μm和500μm的铀溶液。与对照组相比，低浓度(250μm)du组中，exs对细胞活力的提高从80％至100％。500μmdu组细胞存活率降低至50％，高浓度exs可有效提高细胞存活率从50％提高至90％，提高程度达40％(图2b)。
[0052]
du暴露会引起细胞的应激反应，导致ros水平显著增加。而10μg/ml和50μg/ml exs均能显著降低细胞内ros水平(图2c和2d)(p＜0.05)，说明exs能减少du引起的ros生成。
[0053]
实施例3msc-exs对du中毒细胞的抗氧化作用
[0054]
exs对du诱导的hk-2细胞具有抗氧化应激活性。hk-2细胞经外泌体预处理24h后，再经250μm du处理。与du组相比，50μg/ml exs组内源性抗氧化剂gsh含量显著升高50％(图3a)，sod活性显著升高(图3b)(p＜0.05)，mda含量显著降低至对照组(图3c)，且优于10μg/ml exs组(p＜0.01)。
[0055]
进一步检测与细胞凋亡密切相关的线粒体膜电位(mmp)。发现250μm du降低了mmp，而mmp的显著丢失可能导致线粒体凋亡通路的激活。但exs可维持线粒体正常的膜电位(图4a)，50μg/ml组效果优于10μg/ml组(p＜0.01)。
[0056]
用流式细胞仪检测细胞凋亡和caspase 3/7水平。发现250μm du显著诱导细胞凋亡率增加达10％,并增加caspase 3/7表达水平，而exs显著降低细胞凋亡率达5％，并降低caspase 3/7的表达水平(图4b和4c)，50μg/ml exs组优于10μg/ml组(p＜0.01)。结果表明，exs可以通过增强细胞的抗氧化能力，维持正常的线粒体膜电位，并通过降低caspase3/7的活性来减少细胞的凋亡来保护细胞免受du。
[0057]
实施例4exs对du中毒小鼠的效果
[0058]
为确定du暴露的剂量，将balb/c雄性小鼠腹腔注射不同剂量的du，观察其存活率。结果发现，6mg/kg du组和4mg/kg du组在第5天开始死亡，第9天存活率仅为30％和40％。0.5mg/kg和1mg/kg组小鼠均无死亡，因此确定贫铀暴露的最佳剂量为2mg/kg(图5a)
[0059]
结果表明，2mg/kg du暴露小鼠血清中尿素升高至86mmol/l，exs、msc、sb组(图5b和5c)分别降低至40、43、19mmol/l；du组肌酐含量升高至220μmmol/l，exs、msc、sb组分别降
低至90μmol/l、60μmol/l、50μmol/l，有效缓解du所致的肾功能损伤。反映肝功能指数的alt和alp含量在各组间差异不显著(图5d和5f)，ast在du组略有升高(图5e)，估计与使用的铀剂量相对较小，尚未损伤肝功能有关。反映血液学改变的wbc、rbc和plt在各组与对照组比较不显著(图5g、5h和5i)。
[0060]
du、exs、msc和sb处理的小鼠的肾、骨髓、肝和脾的he染示于图7。简而言之，在du组中，观察到肾充血、近曲小管坏死、蛋白小管类型、肾小球增大。exs、msc和sb后，充血明显改善，肾小球形态恢复正常，肾小管坏死减少。铀中毒导致骨髓中的血管增生，细胞分散，排列不紧密，有核细胞数量减少。exs导致血管增殖显著减少，细胞排列更紧密，有核细胞增加。与对照组相比，2mg/kg的贫化铀对小鼠肝脏和脾脏的形态没有明显影响(图6)，exs、msc和sb组也没有。
[0061]
实施例5exs促进小鼠排除du
[0062]
通过测量小鼠的总尿量发现，从接触du的第2天开始，du组和组均高于对照组。经exs和sb处理后，第3天尿量明显减少(图7a)。在第1
ꢀ‑
3天，exs、msc和sb能显著增加du中毒小鼠尿液中的铀排泄量(p《0.01)(图7b)，减少铀在血液、肾脏和骨骼中的滞留量。第20天，du组骨骼、肾脏、血液中铀含量显著高于对照组，但exs、msc和sb组各器官的铀含量显著降低，exs组与sb组相近(图7c、7d和7e)。结果表明，exs能有效促进铀通过尿液排出，减少铀在血液、肾脏和骨骼中的滞留。
[0063]
实施例6western blotting和免疫组化验证exs对du中毒小鼠肾脏凋亡相关蛋白和与铀酰离子结合蛋白表达情况
[0064]
western blotting验证exs对du中毒小鼠肾脏凋亡相关蛋白表达的影响。du中毒后caspase3、caspase9和bax的表达水平显著升高(p《0.01)。然而，msc和exs可以逆转这一现象。特别是与msc和sb相比，exs处理后的抑制作用更明显(图8a)。
[0065]
western blotting验证了exs对du中毒小鼠肾脏中与铀酰离子结合相关蛋白表达的影响。发现du中毒后transferrin、osteopontin和albumin的表达水平显著升高(p《0.01)。然而，msc和exs可以逆转这一现象。特别是与msc和sb组相比，exs组处理后的抑制作用更明显(图8b)。粘附分子cadm的表达与转铁蛋白的表达类似(图8b)。
[0066]
实施例7免疫组化验证
[0067]
免疫组化验证exs对du中毒小鼠肾脏与铀酰离子结合蛋白表达的影响。与对照组相比，du组transferrin、osteopontin和albumin的表达水平显著升高，推测是铀酰离子增多，进入肾脏的几种结合蛋白增多所致。但msc、exs和sb可以使肾小管细胞膜、胞浆或周围间质中相关蛋白的表达减少。与msc和sb组相比，exs组处理后的抑制作用更明显(图8c)。
[0068]
转铁蛋白与肾小管细胞膜上的转铁蛋白受体tfr结合后进入细胞内。转铁蛋白在肾小管细胞染呈深棕，棕物质分布于胞膜和胞浆中，周围间质免疫染阴性。
[0069]
opn主要表达于肾小管、间质及球旁器。osteopontin与肾小管细胞膜上的opn受体整合素和cd44结合，也可与周围间质如纤连蛋白或玻连蛋白的整合素αvβ1结合。磷酸化后的opn与细胞表面整合素受体结合，而去磷酸化opn则能与cd44受体结合，从而引起不同的效应。肾小管细胞opn染呈深棕，棕物质分布于胞膜和胞浆中，周围间质免疫染阳性。
[0070]
肾小管上皮细胞是肾小球血管内皮细胞的延伸，也表达白蛋白受体gp60。因此，白蛋白的整体结构显示了4个潜在的金属结合位点,与铀酰离子结合后，通过血液循环，与白蛋白受体结合特异途径，或胞吞等非特异途径进入肾小管上皮细胞。
[0071]
各组肾小管细胞相关蛋白表达减少的原因，推测是因mscs和msc-exs膜表达tf受体和opn受体整合素或cd44，通过与受体竞争性结合铀酰离子-tf、铀酰离子-opn复合物，减少铀与肾小管细胞膜的蛋白受体结合，减少铀的沉积。部分exs可能通过挤压、变形，经泌尿系统排出体外，降低了体内铀含量。mscs不表达白蛋白受体，但白蛋白-铀酰离子复合物在肾小管细胞内可降解成小分子片段，被再次利用等。sb组通过增加血液中的碳酸氢根离子水平，增加在血液和尿液中更稳定的三碳酸铀酰水平，生成稳定铀酰离子复合物，导致铀酰离子与肾小管细胞之间的相互作用减少。
[0072]
本发明通过研究msc-exs对小鼠铀中毒的作用，发现能显著促进尿铀排异，降低肾、骨铀含量，降低血清尿素、肌酐水平，表明exs可以减轻肾损伤，改善肾脏和骨髓的病理形态学。这种保护作用的主要机制是msc-exs上的蛋白受体通过与肾小管细胞上的受体的竞争性结合，显著减少与转铁蛋白、骨桥蛋白和白蛋白结合的铀酰离子在肾脏中的沉积。部分msc-exs通过挤压和变形排出体外。同时，减少粘附分子的表达，有助于减少蛋白质-铀酰离子复合物进入组织细胞，从而减少铀在血液、肾脏和骨骼中的滞留。此外，msc-exs降低ros水平，增加sod和gsh表达，减少膜脂质过氧化。bcl-2/bax比值升高可抑制细胞凋亡。这些结果表明msc-exs可能是du中毒的一种新的方法。
[0073]
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：

1.干细胞外泌体在制备用于铀中毒的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，含有10-50μg/ml的干细胞外泌体。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述干细胞外泌体为人脐带间充质干细胞来源。4.一种用于铀中毒的药物，其特征在于，含有有效量的干细胞外泌体。5.如权利要求4所述的药物，其特征在于，所述干细胞外泌体含量为10-50μg/ml。6.如权利要求4所述的药物，其特征在于，所述干细胞外泌体为人脐带间充质干细胞来源。7.如权利要求4所述的药物，其特征在于，还含有有效量的间充质干细胞和/或碳酸氢钠。8.如权利要求6所述的药物，其特征在于，碳酸氢钠用量为110μl浓度为5％的水溶液。9.如权利要求6所述的药物，其特征在于，msc细胞用量为1
×
106个。

技术总结

本发明提供了干细胞外泌体在制备用于铀中毒的药物中的应用。本发明利用人脐带间充质干细胞来源的外泌体(MSC-EXS)预给药可保护人肾小管上皮HK-2细胞免受铀损伤，降低细胞内ROS和MDA水平，增加GSH水平，增强SOD活性，减少细胞凋亡。少细胞凋亡。少细胞凋亡。

技术研发人员：

李蓉 王卫东 杨新瑞 殷娅茹 杨露勋 刘晶 卢丙慧 罗圣霖

受保护的技术使用者：

四川省肿瘤医院

技术研发日：

2022.12.21

技术公布日：

2023/3/10