一类核苷衍生物及其制备方法与用途

1.本发明属于生物医药领域，具体涉及一类索非布韦衍生物，本发明还涉及该类化合物的制备方法及其作为抗丙型肝炎病毒药物的医药用途。

背景技术：

2.核苷类药物已经成为癌症和病毒感染性疾病的有效方式。这类药物往往在体内需依次转化为单磷酸、二磷酸及三磷酸代谢物，并最终通过三磷酸核苷类似物(活性代谢物)发挥药效。然而上述磷酸化过程中，单磷酸核苷的生成往往是限速步骤，这导致核苷类药物的体内活性代谢物含量往往较低并影响药效。为了克服这一难题，mcguigan教授开发了一类protide前药技术，在提高化合物亲脂性的同时，增加药物代谢活化能力，大幅度的提高了核苷类前药的作用。protide前药助推了许多重磅核苷类药物的诞生，如索非布韦、替诺福韦艾拉酚胺以及瑞德西韦，这些药物分别在慢性丙肝、慢性乙肝以及covid-19中发挥了不可替代的作用。
3.protide前药已成为前药设计中的关键策略，进一步拓展该类前药结构的多样性则成为获得更多活性分子及构效关系信息的关键。在最为经典的protide前药制备方法中，手性磷酰胺是一类关键中间体；拓展结构及功能各异的手性磷酰胺中间体是丰富protide前药结构的主要方向之一。
4.现有技术cn110840907及cn111320650中记载了一类结构创新的protide前药，其合成也是借助磷酰胺中间体实现的。然而，两篇现有技术未披露手性磷酰胺中间体的具体制备与结构表征。
5.丙型肝炎病毒(hcv)感染后，60％-80％的患者会进展为慢性丙肝。丙型肝炎极易导致肝纤维化，10％-30％的感染者会发展为肝硬化，并伴有多种并发症、肝细胞癌甚至过早死亡的风险(world.j.gastroenterol.2020,26:2931)。据报道，2015年全球就有超过1.7亿人感染hcv，其中约7000万人为慢性感染。
6.慢性丙型肝炎的最初采用干扰素与利巴韦林联合，该方案疗效不佳且副作用严重。2001年，聚乙二醇化干扰素被引入；它有更长的半衰期，改善了病毒学应答率(srv)，而大多数不良反应仍然存在。2011年，直接抗病毒药物(daa)疗法问世，boceprevir和telaprevir是第一代daa；它们抑制病毒的ns3/4a蛋白酶，被批准作为已建立的聚乙二醇化干扰素和利巴韦林的附加药物。这些药物提高了svr的发生率，但患者出现贫血、胃肠道副作用和皮疹的发生率更高(n.engl.j.med.2011；364:1207)。索非布韦(sof)是第一个获准临床使用的丙型肝炎病毒ns5b聚合酶抑制剂，它有很强的直接抗病毒作用，并迅速成为各种抗hcv联合方案的中坚力量。
7.sof是一类前药，必须在体内经一系列代谢活化后，方可转化为三磷酸活性代谢物，进而抑制病毒的ns5b聚合酶。上述过程中，前药在肝脏及肝细胞中经组织蛋白酶a(cata)和羧酸酯酶1(ces1)水解并释放游离羧基是代谢活化的关键步骤。其中，药物被cata或ces1水解的程度以及不同生理或病理状态下该类水解酶功能活性的改变等，均是影响药
物体内命运及疗效的关键因素。为此，规避或减少酯酶对药物活化的影响，增加前药代谢活化效率是新型前药设计与研究的重要方向。

技术实现要素：

8.针对现有技术存在的问题，本发明的第一个目的是提供一种新型手性磷酰胺中间体。该中间体结构全新，利用该中间体可以丰富protide前药结构的多样性，有利于寻更好的活物分子。
9.本发明的第二个目的是提供前述中间体的制备方法，该方法简单易操作，纯化无需柱层析，产物非对映选择性高。
10.本发明的第三个目的是提供前述中间体的应用。
11.基于慢性丙肝患者肝脏组织及肝细胞内显著积累的活性氧物种(ros)，本发明的第四个目的是提供一种可被ros活化的索非布韦衍生物。
12.本发明的第五个目的是提供前述索非布韦衍生物的制备方法。
13.本发明的第六个目的是提供前述索非布韦的医药用途。
14.为了实现上述目的，本发明解决其技术问题采用的技术方案是：
15.第一方面，本发明提供一种手性磷酰胺中间体，其结构式如式(ⅵ)所示：
[0016][0017]
其中，r1选自：h或c
1-3
烷基；r2选自：h或c
1-3
烷基；x选自：s或o；ar选自：苯基、1-萘基或2-萘基。
[0018]
优选的，r1选自：h或甲基；r2选自：h或甲基；x选自：s或o；ar选自：苯基、1-萘基或2-萘基；
[0019]
更优选的，ar选自：苯基。
[0020]
在一些具体的实施方案中，本发明的手性磷酰胺中间体，其结构式如式(
ⅵ‑
a)所示：
[0021][0022]
其中，x选自：o或s；磷原子为s构型。
[0023]
第二方面，本发明提供一种式(ⅵ)所述的手性磷酰胺中间体的制备方法，其合成路线如下所示：
[0024][0025]
所述方法具体包括以下步骤：
[0026]
步骤a：将化合物ii、化合物iii与溶剂、碱混合，随后加入缩合剂，经酰化反应得到化合物iv；
[0027]
步骤b：化合物iv经脱保护得到化合物v；可选的，所述化合物v可以是：游离碱、盐酸盐或三氟醋酸盐；
[0028]
步骤c：将化合物v、二氯化磷酸苯酯与溶剂混合，随后依次加入碱与五氟苯酚，经磷酰化反应后，冷却、过滤、洗涤并干燥，得到化合物ⅵ。
[0029]
在一些具体的实施方案中，在步骤a中，所述缩合剂为新戊酰氯(特戊酰氯)、氯甲酸异丁酯、dcc、edci、hatu或hbtu；
[0030]
优选的，所述缩合剂为新戊酰氯。
[0031]
在一些具体的实施方案中，在步骤a中，还可以加入添加剂，所述添加剂为氯化锂、氯化镁、溴化镁或氯化铜；优选为氯化锂。
[0032]
优选的，所述缩合剂与添加剂的摩尔比例为1:0.5～5，优选为1:0.5～2，更具体如1:0.5，1:0.8，1:2等。
[0033]
在一些具体的实施方案中，在步骤a中，所述碱为三乙胺、二异丙基乙基胺、n-甲基吗啉、dmap或dbu；优选为三乙胺。
[0034]
在一些具体的实施方案中，在步骤a中，所述溶剂包括但不限于：二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或者用这些溶剂任选组成的混合溶剂，优选为四氢呋喃。
[0035]
在一些具体的实施方案中，在步骤a中，反应温度为-50℃至80℃，优选的，所述反应温度为-20℃至30℃，更优选为-20℃。
[0036]
在一些具体的实施方案中，在步骤b中，脱保护的方法是本领域技术人员众所周知的；其实例可参见peter g.m.wuts，greene's protective groups in organic synthesis(第5版)，johnwiley&sons，ny(2015)，在此将其全部引入作为参考。
[0037]
在一些具体的实施方案中，在步骤b中，化合物v可以是游离碱、盐酸盐或三氟醋酸盐。
[0038]
在一些具体的实施方案中，在步骤b中，化合物v的对映体过量程度(ee值)可使用本领域技术人员众所周知的方法，可以是手性hplc测定、培养单晶经单晶衍生测定及mosher法测定。
[0039]
在一些具体的实施方案中，在步骤b中，化合物v的对映体过量程度(ee值)为90～
99％。
[0040]
在一些具体的实施方案中，在步骤c中，所述碱为三乙胺、二异丙基乙基胺、dmap或dbu；优选为三乙胺。
[0041]
在一些具体的实施方案中，在步骤c中，所述溶剂为乙醚、甲基叔丁基醚、异丙醚、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、四氢呋喃、丙酮、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种的组合，优选为二氯甲烷。
[0042]
在一些具体的实施方案中，在步骤c中，反应温度为-80℃至50℃，优选的，所述反应温度为-50℃至0℃。
[0043]
在一些具体的实施方案中，在步骤c中，化合物二氯化磷酸苯酯与碱的摩尔比例为1:1～1:10；优选为1:2～1:5，更优选如1:2、1:3、1:5等。
[0044]
在一些具体的实施方案中，在步骤c中，经tlc监测反应接受后，反应液优选降温至0℃以下，进一步优选温度为-30℃至-10℃。
[0045]
第三方面，本发明还保护前文所述的手性磷酰胺中间体在制备索非布韦衍生物，或其药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物中的应用。
[0046]
优选的，所述索非布韦衍生物如式(i)所示：
[0047][0048]
其中，r1选自：h或c
1-3
烷基；r2选自：h或c
1-3
烷基；x选自：s或o；ar选自：苯基、1-萘基或2-萘基。
[0049]
第四方面，本发明还保护式(i)所示的索非布韦衍生物或其药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物，
[0050][0051]
其中，r1选自：h或c
1-3
烷基；r2选自：h或c
1-3
烷基；x选自：s或o；
[0052]
ar选自：苯基、1-萘基或2-萘基；
[0053]
优选的，r1选自：h或甲基；r2选自：h或甲基；x选自：s或o；ar选自：苯基、1-萘基或2-萘基；
[0054]
更优选的，ar选自：苯基。
[0055]
本发明还保护如下任一所述的索非布韦衍生物或其药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物：
[0056][0057]
第五方面，本发明还保护式(i)索非布韦衍生物的制备方法，其合成路线如下：
[0058][0059]
在上述合成路线中，r1、r2、x和ar的定义与所述式(i)衍生物中的定义一致，所述制备方法包括如下步骤：
[0060]
步骤a：将化合物ii、化合物iii与溶剂、碱混合，随后加入缩合剂，经酰化反应得到化合物iv；采用的溶剂包括但不限于：二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或者用这些溶剂任选组成的混合溶剂；采用的缩合剂为新戊酰氯、氯甲酸异丁酯、dcc或edci，所述缩合剂优选为新戊酰氯；所采用的碱为三乙胺、二异丙基乙基胺、n-甲基吗啉、dmap或dbu，所述碱优选为三乙胺；步骤a中还可以加入添加剂，所述添加剂为氯化锂、氯化镁、溴化镁或氯化铜，所述添加剂优选为氯化锂；反应温度为-50℃至80℃，优选的，所述反应温度为-20℃至30℃。
[0061]
步骤b：化合物iv脱保护生成化合物v。脱保护的方法是本领域技术人员众所周知的；其实例可参见peter g.m.wuts，greene's protective groups in organic synthesis(第5版)，johnwiley&sons，ny(2015)，在此将其全部引入作为参考；
[0062]
步骤c：将化合物v、二氯化磷酸苯酯与溶剂混合，随后依次加入碱与五氟苯酚，经磷酰化反应后，得到化合物ⅵ；所采用的碱为三乙胺、二异丙基乙基胺、dmap或dbu，所述碱优选为三乙胺；所采用的溶剂为乙醚、甲基叔丁基醚、异丙醚、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、四氢呋喃、丙酮、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述溶剂进一步优选为二氯甲烷；所采用的溶剂包括但不限于：二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚或者用这些溶剂任选组成的混合溶剂；反应温度为-80℃至50℃，优选的，所述反应温度为-50℃至0℃；
[0063]
步骤d：化合物vi与化合物vii发生取代反应，得到化合物i，所采用的溶剂包括但不限于：甲苯、四氢呋喃、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、n-甲基吡咯烷酮或者用这些溶剂任选组成的混合溶剂；所采用的碱为钠氢、叔丁醇钾、叔丁醇钠、叔丁基氯化镁、甲基氯化镁、苯基氯化镁、dmap或dbu，所述碱优选为甲基氯化镁；反应温度为-50℃至80℃，优选的，所述反应温度为-10℃至30℃。
[0064]
第六方面，本发明还保护一种药物组合物，包含前文所述的索非布韦衍生物或其
药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物，以及药学上可接受的载体。
[0065]
第七方面，本发明还保护前文所述的索非布韦衍生物或其药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物或前文所述的组合物，在制备抗肝炎病毒药物中的应用。
[0066]
在一些具体的实施方案中，所述肝炎为丙型肝炎。
[0067]
本发明中，所述：
[0068]
edci是指：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(cas：25952-53-8)
[0069]
dmap是指：4-二甲氨基吡啶(cas：1122-58-3)
[0070]
dcc是指：二环己基碳二亚胺(cas：538-75-0)
[0071]
hatu是指：2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(cas：148893-10-1)
[0072]
hbtu是指：o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐(cas：94790-37-1)
[0073]
dbu是指：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(cas：6674-22-2)
[0074]
定义
[0075]
除非另有说明，本技术中所用的下列术语具有下列含义。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
[0076]
本文中的c
1-3
，是该部分具有给定范围中的1-3个碳原子。具体是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子或3个碳原子。
[0077]
术语“烷基”是指通式为cnh 2n+1
的烃基。该烷基可以是直链或支链的。例如，术语“c
1-3
烷基”指含有1至3个碳原子的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基)。
[0078]
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0079]
作为药学上可接受的盐，例如，可以提及金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。
[0080]
术语“药物组合物”是指一种或多种本技术的化合物或其盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本技术的化合物。
[0081]
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
[0082]
本技术还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本技术化合物。可结合到本技术化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2h、3h、11c、13c、14c、13n、15n、15o、17o、18o、31p、32p、35s、18f、123i、125i和36cl等。
[0083]
本技术的药物组合物可通过将本技术的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
[0084]
给予本技术化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
[0085]
本技术的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
[0086]
在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本技术的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。
[0087]
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。
[0088]
药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。
[0089]
本技术的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本技术的实施例。
[0090]
本技术具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本技术的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本技术的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
[0091]
有益效果
[0092]
与现有技术相比，本发明创造性地提供了一类全新结构的手性磷酰胺中间体，制备过程方便，纯化方式简捷，全程无需柱层析，且产物具有很好的非对映选择性，这为进一步新药候选分子的发现提供技术保证。
[0093]
与现有技术相比，本发明的索非布韦衍生物前药具有理想的体外抗hcv病毒活性；在血浆中稳定性良好、且在含过氧化氢的缓冲液及肝s9中能够高效代谢；在氧化应激升高的细胞内，具有更出的三磷酸活性代谢物水平。
附图说明
[0094]
图1为化合物
ⅵ‑
1的x-单晶衍射图。
[0095]
图2为化合物
ⅵ‑
2及消旋后的磷谱对比图。
[0096]
图3为化合物2的氢谱与磷谱。
[0097]
图4为三磷酸活性代谢物在细胞内的累积量。
具体实施方式
[0098]
下面通过实施例具体说明本发明的内容。在本发明中，以下所述的实施例是为了更好的阐述本发明，并不是用来限制本发明的范围。在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。
[0099]
实施例1化合物
ⅵ‑
1的合成
[0100][0101]
将2-噁唑烷酮ii-1(9.6g，110mmol)、化合物iii(18.9g，100mmol)、氯化锂(8.5g，200mmol)置于干燥的1000ml双颈瓶中，在氩气保护条件下加入500ml无水四氢呋喃，反应液常温搅拌60min并冷却至-20℃，随后缓慢滴加特戊酰氯(31ml，250mmol)和三乙胺(36ml，260mmol)，在-20℃下保温反应1h。反应结束后，将反应液继续在室温下搅拌30min。用饱和氯化铵溶液100ml淬灭反应，反应液经乙酸乙酯萃取(100ml
×
3)，依次用10％碳酸钠溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。真空浓缩后得到化合物iv-1为白固体(24.5g，95mmol)，产率94.9％。1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ5.39(m,1h),5.15(s,1h),4.47(t,j＝8.0hz,2h),4.17
–
3.95(m,2h),1.45(s,9h),1.41(d,j＝7.0hz,3h).
[0102]
在250ml单颈瓶中，将上述化合物iv-1混悬于乙酸乙酯(30ml)，缓慢滴加4nhcl-乙酸乙酯溶液(110ml，470mmol)，室温搅拌过夜。经tlc监测反应完毕，将反应液真空浓缩，得到化合物v-1白固体产物(18.4g，94mmol)，产率99％。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.61(s,3h),4.77(m,1h),4.46(m,2h),3.93(t,j＝8.0hz,2h),1.43(d,j＝6.9hz,3h).
[0103]
将化合物v-1(9.75g，50mmol)置于500ml双颈瓶中，在氩气保护条件下加入二氯甲烷150ml，冷却至-30℃，依次缓慢滴加化合物vi(7.5ml，50mmol)和三乙胺(14ml，100mmol)。反应液在-30℃下保温搅拌反应30min，升温至0℃继续反应3h至tlc监测反应完全。在0℃下，向反应液中加入五氟苯酚(9.2g，50mmol)的二氯甲烷溶液和三乙胺(14ml，100mmol)，在10℃下搅拌反应过夜。经tlc监测反应完毕，抽滤，滤饼用冷却的乙酸乙酯洗涤，真空浓缩后得到化合物
ⅵ‑
1白固体(17g，38.5mmol)，产率77％，三步总收率72％。1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ7.38(t,j＝7.7hz,2h),7.32
–
7.12(m,3h),5.49
–
5.23(m,1h),4.47(t,j＝7.9hz,2h),4.24(t,j＝11.9hz,1h),3.98(t,j＝8.1hz,2h),1.51(d,j＝6.8hz,3h).
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ0.04.
[0104]
实施例2化合物
ⅵ‑
2的合成
[0105]
[0106]
将2-噻唑烷酮ii-2(2.83g，27.5mmol)、化合物iii(4.73g，25mmol)、氯化锂(2.12g，100mmol)置于干燥的250ml双颈瓶中，在氩气保护条件下加入125ml无水甲基四氢呋喃，冷却至-10℃搅拌30min，随后缓慢滴加特戊酰氯(6.2ml，50mmol)和n-甲基吗啉(7.3ml，65mmol)，移至室温(25℃)下反应2小时。用饱和氯化铵溶液35ml淬灭反应，反应液经乙酸乙酯萃取(40ml
×
3)，依次用饱和碳酸钠溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。有机相浓缩得到iv-2半固体(6.07g，22mmol)，产率88％。1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ5.35
–
5.22(m,1h),5.18(s,1h),4.31
–
4.07(m,2h),3.43
–
3.25(m,2h),1.45(s,9h),1.37(d,j＝6.8hz,3h).
[0107]
在100ml单颈瓶中，将上述化合物iv-2溶解于乙酸乙酯(15ml)，缓慢滴加4nhcl-乙酸乙酯溶液(25ml，100mmol)，室温搅拌过夜。经tlc监测反应完毕，将反应液真空浓缩，得到化合物v-2白固体产物(1.0g，4.74mmol)，产率95％。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.54(s,3h),4.69(s,1h),4.11(m,2h),3.46(m,2h),1.39(d,j＝6.4hz,3h).
[0108]
将化合物v-2(2.1g，10mmol)置于100ml双颈瓶中，在氩气保护条件下加入无水二氯甲烷(33ml)，冷却至-80℃，滴加化合物二氯化磷酸苯酯(1.5ml，10mmol)和三乙胺(7ml，50mmol)。反应液在-80℃下保温搅拌反应30min后，升温至0℃继续反应3h。在0℃下，向反应液中加入五氟苯酚(1.84g，10mmol)的二氯甲烷溶液和三乙胺(2.94ml，21mmol)，反应5小时后降温至-10℃搅拌过夜。抽滤，滤饼用乙酸乙酯溶解，水洗并干燥后真空浓缩，异丙醚打浆得到白固体(3.1g，6.1mmol)，产率62％，三步收率52％。1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ7.36((t,j＝7.4,7.0hz,2h),7.31
–
7.18(m,3h),5.26(m,1h),4.38
–
4.22(m,1h),4.11(t,j＝7.2hz,2h),3.31(m,2h),1.46(d,j＝6.8hz,3h).
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ0.05.
[0109]
实施例3化合物v-2的ee值测定
[0110][0111]
在10ml双颈瓶中，加入v-2(21mg，0.1mmol)、三乙胺(20μl)及无水dcm(2ml)，氮气保护后冷却至-15℃下搅拌。向反应液中缓慢滴加mtpa-cl(25mg，0.1mmol，98％ee)的dcm溶液(2ml)后自然升至室温反应1h。反应完毕后，用水淬灭反应，乙醚萃取(5ml
×
2)，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，真空浓缩溶剂，制备型tlc纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得到白固体vii(31mg)。
19
f nmr(376mhz,cdcl3)δ-69.09(95％),-69.12(5％).
[0112]
应用
19
f-nmr mosher法，可确定化合物vii的非对映异构体过量值为95％，进而推测化合物v-2的ee值大于90％。
[0113]
实施例4化合物
ⅵ‑‑
2在制备protide前药中的应用
[0114]
[0115]
在50ml双颈瓶中，加入5-氟脱氧尿苷viii(246mg，1mmol)及无水thf(15ml)，氮气保护后冷却至-15℃下搅拌。向反应液中缓慢滴加叔丁基氯化镁(1.7m，1.5ml，2.5mmol)后继续保温反应1h。随后分批加入化合物i-2(500mg，1mmol)的四氢呋喃悬浊液(10ml)，加毕后室温反应24小时。反应完毕后，用饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取(40ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，真空浓缩溶剂，硅胶柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝100:1-20:1)得到白玻璃样固体ix(227mg，0.41mmol)，产率41％。[m+h]
+
：559.1067。
[0116]
该实施例说明，本发明中间体能够有效的制备新型protide前药。反应产物viii在现有技术cn 110840907中具有较好的抗肿瘤活性。
[0117]
对比例
ⅵ‑
2磷原子消旋化处理
[0118]
在10ml封管中，加入化合物
ⅵ‑
2(50mg，0.1mmol)、苯酚(5mg)、三乙胺(20μl)及四氢呋喃(2ml)；加毕后鼓吹氮气并将封管旋紧。40℃加热反应8小时后，向反应液内加入乙酸乙酯(5ml)及水(5ml)，搅拌30min后静置分液，上清液浓缩并经
31
p nmr确定手性磷原子的变化情况。
31
pnmr(162mhz,dmso-d6)δ0.05,-0.10.
[0119]
结果显示，经上述处理后，化合物
ⅵ‑
2的磷谱中存在明显的两个单峰(说明书附图2)。这说明化合物
ⅵ‑
2处理过程中手性磷原子发生消旋化，得到s及r两种构型的产物。将该磷谱与实施例2磷谱对比可知，按照实施例2获得的化合物
ⅵ‑
2其磷原子具有单一构型，同时说明本发明能够很好的提供一种制备手性磷酰胺中间体的方法。
[0120]
实施例5化合物i-1的合成
[0121]
合成路线：
[0122][0123]
具体步骤：
[0124]
将化合物ii-1(1.9g，10mmol)、iii-1(1.13g，11mmol)、licl(848mg，20mmol)置于干燥的250ml双颈瓶中，氩气保护条件下加入100ml无水四氢呋喃，并冷却至-15℃；依次缓慢滴加特戊酰氯(pivcl，3.08ml，25mmol)和三乙胺(3.61ml，26mmol)，保温反应1h；随后将反应液继续在室温下搅拌30min。用冷却的饱和氯化铵溶液50ml淬灭反应，乙酸乙酯萃取反应液(40ml
×
3)，合并有机相。分别用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。
真空浓缩除去溶剂，硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-1:1)，得到白固体iv-1(2.49g，9.06mmol)，产率90.6％。1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ5.28(p,j＝7.2hz,1h),5.17(s,1h),4.32
–
4.05(m,2h),3.34(td,j＝7.1,4.0hz,2h),1.45(s,9h),1.37(d,j＝6.8hz,3h)。
[0125]
将上述化合物iv-1(2.49g，9mmol)置于50ml单颈瓶中，用6ml乙酸乙酯溶解；在0℃下缓慢滴加4n盐酸-乙酸乙酯溶液(11ml，4.5mmol)并搅拌过夜。反应液抽滤，滤饼真空干燥得到白固体产物v-1(1.80g，8.55mmol)，产率95％。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.58(s,3h),4.69(d,j＝8.9hz,1h),4.12(q,j＝9.0,7.9hz,2h),3.46(d,j＝7.2hz,2h),1.40(d,j＝6.7hz,3h)。
[0126]
将化合物v-1(1.80g，8.55mmol)置于100ml双颈瓶中，氩气保护条件后加入无水二氯甲烷(30ml)，溶液冷却至-50℃；缓慢滴加二氯化磷酸苯酯(1.5ml，10mmol)和三乙胺(2.8ml，20mmol)，反应液低温反应30min后升温至0℃继续反应4h。将反应液温度再次降至-50℃，向其中依次加入五氟苯酚(1.84g，10mmol)的二氯甲烷溶液和三乙胺(2.94ml，21mmol)，保温搅拌过夜。反应液抽滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，得到白固体vi-1(2.00g，4mmol)，产率40％。1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ7.38(t,j＝7.7hz,2h),7.32
–
7.17(m,3h),5.38
–
5.18(m,1h),4.26(t,j＝12.2hz,1h),4.11(t,j＝7.1hz,2h),3.32(t,j＝7.4,3.6hz,2h),1.46(d,j＝6.7hz,3h)。
[0127]
将化合物vi-1(0.240g，0.48mmol)和核苷vii(0.104g，0.40mmol)置于50ml双颈瓶中，加入无水四氢呋喃20ml，混合液冷却至0℃。缓慢滴加甲基溴化镁(334μl，1mmol)后，反应24h。饱和氯化铵溶液(10ml)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(40ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，真空浓缩溶剂，硅胶柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝100:1-20:1)得到白固体i-1(64mg，0.11mmol)，产率28％。1h nmr(300mhz,methanol-d4)δ7.54(d,j＝8.1hz,1h),7.41(q,j＝7.3,6.7hz,2h),7.35
–
7.15(m,3h),6.20(d,j＝19.3hz,1h),5.69(d,j＝8.1hz,1h),5.12
–
4.93(m,1h),4.51(ddd,j＝11.7,4.8,2.2hz,1h),4.32(ddd,j＝11.7,4.1,2.4hz,1h),4.24
–
4.00(m,3h),3.83(dd,j＝23.5,9.7hz,1h),3.52
–
3.19(m,3h),1.27(d,j＝6.3hz,6h)；
31
p nmr(121mhz,methanol-d4)δ3.13；hrms[m+na]
+
:calcd for c
22h26
fn4nao9ps，595.1034；found，595.1031。
[0128]
实施例6化合物i-2的合成
[0129]
合成路线：
[0130][0131]
具体步骤：
[0132]
参照实施例5的方法，将实施例5中的iii-1替换成iii-2，依次制得化合物iv-2：1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ5.38
–
5.21(m,1h),5.21
–
5.08(m,1h),4.37
–
3.99(m,2h),3.52
–
3.16(m,2h),1.45(s,9h),1.37(d,j＝6.8hz,3h)、化合物v-2：1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.54(s,3h),4.69(s,1h),4.12(t,2h),3.47(t,2h),1.39(d,j＝6.5hz,3h)、化合物vi-2：1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ7.49
–
7.30(m,2h),7.33
–
7.17(m,3h),5.45
–
5.12(m,1h),4.29(t,j＝13.7,10.6hz,1h),4.11(t,j＝7.2hz,2h),3.50
–
3.20(m,2h),1.46(d,j＝6.8hz,3h).
[0133]
参照实施例5的方法，vi-2与核苷vii反应制得化合物i-2：1h nmr(300mhz,methanol-d4)δ7.63(d,j＝8.1hz,1h),7.40(t,j＝7.9hz,2h),7.24(dd,j＝16.4,7.9hz,3h),6.15(d,j＝19.4hz,1h),5.62(d,j＝8.0hz,1h),5.11(dq,j＝9.6,6.9hz,1h),4.53(ddd,j＝12.0,5.9,2.0hz,1h),4.34(ddd,j＝11.9,6.1,3.5hz,1h),4.12(tq,j＝8.2,4.6hz,3h),3.91(dt,j＝23.5,12.6hz,1h),3.55
–
3.15(m,3h),1.55
–
1.12(m,6h)；
31
p nmr(121mhz,methanol-d4)δ3.62；hrms[m+na]
+
:calcd for c
22h26
fn4nao9ps，595.1034；found，595.1033。
[0134]
实施例7化合物i-3的合成
[0135]
合成路线：
[0136][0137]
具体步骤：
[0138]
将化合物ii-1(1.9g，10mmol)、iii-3(1.02g，11mmol)置于250ml双颈瓶中，氩气保护条件下加入100ml二氯甲烷；室温搅拌下加入dmap(0.37g，3mmol)与三乙胺(2ml，15mmol)。随后分多次加入edci(2.9g，15mmol)，加毕后反应液室温下搅拌过夜。用冷却的饱和氯化铵溶液50ml淬灭反应，乙酸乙酯萃取反应液(40ml
×
3)，合并有机相。分别用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。真空浓缩除去溶剂，硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-1:1)，得到白固体iv-3(1.07g，4.1mmol)，产率41％。1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ5.14(s,1h),4.43(s,2h),4.19(t,j＝7.3hz,2h),3.36(t,j＝7.3hz,2h),1.47(s,9h)；
[0139]
参照实施例5的方法，将实施例5中的iv-1替换成iv-3，制得化合物v-3：1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.53(s,3h),4.34
–
3.86(m,4h),3.46(t,j＝7.3hz,2h)；
[0140]
参照实施例5的方法，将实施例5中的v-1替换成v-3，反应温度调整为0℃，制得化合物vi-3：1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ7.48
–
7.34(m,2h),7.35
–
7.19(m,3h),4.67
–
4.37(m,2h),4.39
–
4.24(m,2h),4.21(t,j＝7.4hz,2h),3.40(t,j＝7.3hz,2h)；
[0141]
参照实施例5的方法，vi-3与核苷vii反应制得化合物i-3，其中反应温度为40℃：1h nmr(300mhz,methanol-d4)δ7.67(dd,1h),7.48
–
7.31(m,2h),7.24(dd,j＝18.8,7.9hz,3h),6.17(d,j＝19.4hz,1h),5.69(dd,j＝8.9hz,1h),4.72
–
4.50(m,1h),4.53
–
4.36(m,1h),4.34
–
4.22(m,2h),4.21
–
4.04(m,3h),4.00
–
3.82(m,1h),3.47
–
3.33(m,2h),1.36(dd,j＝22.4,9.4hz,3h)；
31
p nmr(121mhz,methanol-d4)δ5.34,4.80；hrms[m+na]
+
:calcd for c
21h24
fn4nao9ps，581.0878；found，581.0876。
[0142]
实施例8化合物i-4的合成
[0143]
合成路线：
[0144][0145]
具体步骤：
[0146]
参照实施例5的方法，将实施例5中的ii-1替换成ii-2、iii-1替换成iii-2，依次制得化合物iv-4：1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ5.57
–
5.25(m,1h),5.14(s,1h),4.47(t,j＝8.0hz,2h),4.24
–
3.77(m,2h),1.45(s,9h),1.41(d,j＝7.1hz,4h)；化合物v-4：1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.61(s,3h),4.77(q,j＝7.0hz,1h),4.59
–
4.33(m,2h),3.93(t,j＝8.0hz,2h),1.43(d,j＝6.9hz,3h)；化合物vi-4：1h nmr(300mhz,chloroform-d)δ7.38(t,j＝7.9hz,2h),7.32
–
7.16(m,3h),5.51
–
5.27(m,1h),4.47(t,j＝8.5hz,2h),4.23(t,j＝12.0hz,1h),3.98(t,j＝8.1hz,2h),1.51(d,j＝6.8hz,3h)；
[0147]
参照实施例5的方法，vi-4与核苷vii反应制得化合物i-4：1h nmr(300mhz,methanol-d4)δ7.62(d,j＝8.1hz,1h),7.40(t,j＝7.9hz,2h),7.34
–
7.17(m,3h),6.15(d,j＝19.4hz,1h),5.59(d,j＝8.1hz,1h),5.35
–
5.11(m,1h),4.63
–
4.48(m,1h),4.44(t,j＝8.1hz,2h),4.37
–
4.25(m,1h),4.19
–
4.05(m,1h),4.06
–
3.80(m,3h),1.39
–
1.26(m,6h)；
31
p nmr(121mhz,methanol-d4)δ3.52；hrms[m+na]
+
:calcd for c
22h26
fn4nao
10
p，579.1263；found，579.1253。
[0148]
实施例9化合物的体外稳定性
[0149]
生物基质的制备：
[0150]
sd大鼠肝s9、肠s9的制备：大鼠提前12h禁食，脱颈椎处死后立即取出肝脏和小肠段于4℃pbs缓冲液清洗，切碎置于pbs缓冲液中匀浆。匀浆后，9000g离心20min(4℃)，弃去上层脂肪层及下层沉淀，收集中间液体并分装于50ml离心管中，-40℃保存备用。使用bca法测定蛋白浓度。
[0151]
sd大鼠血浆的制备：大鼠眼底静脉丛取血，全血于提前用edta2k
+
处理过的离心管中保存，8000rpm离心5min，取上层淡黄澄清液体即为血浆，-40℃保存待用。
[0152]
模拟生物基质的制备：
[0153]
人工胃液(sgf)、人工肠液(sif)为usp无菌(浙江联硕生物科技有限公司)；
[0154]
h2o2反应体系的制备：将30％过氧化氢(南京化学试剂股份有限公司，分析纯)用
pbs稀释至13.2m。
[0155]
工作样品的制备：
[0156]
化合物i-1、i-2、i-3、i-4(400μg/ml，终浓度200μg/ml)分别和h2o2(13.2mm，终浓度6.6mm)按1/1(v/v)混合，37℃水浴0min,5min,10min,15min,30min,1h,2h和4h；
[0157]
化合物
ⅰ‑
1、
ⅰ‑
2、
ⅰ‑
3、
ⅰ‑
4储备液(10mg/ml，终浓度200μg/ml)分别和pbs、人工胃肠液、肝肠s9(蛋白终浓度200μg/ml)和血浆按1/50(v/v)混合37℃水浴0min,5min,10min,15min,30min,1h,2h和4h；
[0158]
样品的处理：
[0159]
取100μl样品，添加100μl meoh(含内标zl-01100μg/ml)终止反应，涡旋5min，12000rpm两次离心5min，取上清液70μl进样；平行试验3份(n＝3)。
[0160]
数据处理：
[0161]
用已建立的hplc分析方法，绘制标准曲线，检测温孵体系中药物的剩余浓度，并绘制浓度-时间曲线。以时间(x，min)为横坐标，所得化合物剩余浓度(y，μm)为纵坐标进行非线性回归，两边积分得指数衰减方程，计算半衰期。结果如下表所示：
[0162]
表1.化合物体外稳定性
[0163][0164]
以上实验结果表明：sof可在肝s9中代谢，且在血浆中快速降解；而本发明中化合物i-1、i-2、i-4在肝s9中代谢速率与sof相当；令人意想不到的是，化合物i-1、i-2、i-4在血浆中的稳定性均远高于sof，这提示化合物在肝门静脉内具有更好的稳定性，更有利于前药不经降解进入靶组织肝脏。另一方面，在过氧化氢溶液中，化合物i-1、i-2、i-3、i-4均可快速代谢释放出目标代谢物，这提示本发明化合物可在氧化应激升高的组织内较好的释放；综述，体外稳定性数据提示本发明化合物可能具有更优的药代动力学性质。
[0165]
实施例10抗hcv体外药效学试验
[0166]
药品：受试化合物(上述实施例制备)、对照药sof。
[0167]
细胞模型：采用gt 1b丙肝病毒复制子细胞系统测定化合物的体外活性。将gt1b hcv基因组重新构建，剪切掉一部分片段，并增加了新的片段，这其中包括抗生素耐受基因和荧光素酶基因。将新构建的重组基因转染入人肝癌细胞系huh-7中。通过在含有硫酸新霉素(g418)的培养基中培养后，可以获得g418耐受的细胞克隆，这些细胞克隆可以持续的表达hcv复制子rna，从而建立有效复制的hcv细胞培养系统。通过检测荧光素酶基因的表达高低可以确定丙肝病毒的复制水平。
[0168]
实验步骤：
[0169]
1.化合物与细胞共孵育：种gt 1b复制子细胞到96孔板，每孔8000个细胞；每个化合物浓度进行复孔检测，3倍系列稀释10个点，dmso终浓度为0.5﹪；二氧化碳培养箱培养细胞72小时；
[0170]
2.向每孔细胞中加入细胞活力检测试剂，检测细胞活力。随后向细胞中加入荧光素酶发光底物，等5分钟用化学发光检测系统检测。分析数据并计算化合物细胞毒性和抗丙肝病毒gt 1b基因型复制子的活性。
[0171]
3.对数据进行非线性拟合，计算化合物的cc
50
或ec
50
。
[0172]
结果：通过化学发光检测系统检测受试化合物对hcv抑制活性，部分实验结果如表2所示。结果表明，受试化合物显示了不同程度的抗hcv活性，同时均表现出较低的细胞毒性。与sof活性相比，部分化合物对hcv具有更好的抗病毒效果。
[0173]
表2.化合物的抗hcv活性
[0174][0175]
实施例11化合物代谢活化研究
[0176]
1.lc-ms/ms条件
[0177]
①
谱条件
[0178]
谱柱采用xselect hss t3柱(150mm
×
4.6mm，3.5μm)，流动相由含有5mmol醋酸铵+80μl氨水(a)和甲醇：乙腈＝1:1(v/v)(b)组成，柱温40℃，流速为0.6ml/min，梯度洗脱程序为：0-0.5min，1％ b；0.5-0.6min，1-12.5％ b；0.6-2.5min，12.5％ b；2.5-3.5min，12.5-90％ b；3.5-6.5min，90％ b；6.5-7min，90-1％ b；7-10min，1％ b。进样体积为5μl。
[0179]
②
质谱条件
[0180]
质谱选择电喷雾离子源(esi)，源参数设定为：气帘气(curtain gas/cur)30arb，碰撞气(collision gas/cad，n2)medium，喷雾电压(ionspray voltage/is)5500v，辅助气加热温度(temperature/tem)550℃，辅助气1(ion source gas 1，n2)50arb，辅助气2(ion source gas 2，n2)50arb。正离子模式(positive)对分析物进行扫描。多重反应检测方式(multiple reaction monitoring，mrm)对样品进行检测。设定q0入口电压(entrance potential/ep)为15v，q2出口电压(collision cell exit potential/cxp)为10v。三磷酸活性代谢物am及内标tfv(替诺福韦)的质谱参数见表3。
[0181]
表3.mrm模式定量参数
[0182][0183]
2.细胞代谢实验
[0184]
hepg2细胞以5
×
105/孔的密度接种于12孔细胞培养板中，在细胞培养箱内进行培养，待细胞贴壁后，弃培养基，pbs润洗2次。一共设三个组(空白组、h2o2组和apap组)，每个组设4个复孔，空白组中每个孔添加1ml含sof、i-1或i-2的培养基(终浓度50μm)，h2o2组中每个孔添加1ml终浓度为500μm的h2o2和终浓度为50μm的sof、i-1或i-2，apap组中每个孔添加1ml终浓度为1mm的apap和终浓度为50μm的sof、i-1或i-2。共孵育6h、12h和24h后撤去含药培养基，用pbs润洗2次，加入300μl超纯水，吹打细胞并转移至1.5ml离心管中，反复冻融3次，使细胞破裂，反复吹打。一部分细胞样品以bca法测定蛋白浓度，另一部分定量取细胞样品50μl，用250μl含有83.6nm内标的乙腈沉淀，振荡5min，在4℃下，两次18000rpm
×
5min离心，取上清液50μl，5μl进样。
[0185]
3.实验结果
[0186]
药物与细胞共孵，并分别在6h、12h和24h测定细胞内三磷酸活性代谢物am的含量(经蛋白定量数据校正)，结果如说明书附图2a所示。受试化合物sof、i-1或i-2均可在细胞内代谢出活性代谢物am，且随共孵时间延长，am在胞内逐步积累；值得注意的是，化合物i-1在胞内的am累积量远高于sof，这提示化合物具有更好的抗病毒活性。
[0187]
sof、i-1或i-2与细胞共孵，同时通过h2o2或对乙酰氨基酚(apap)干预以提升细胞氧化应激水平，测定24h后细胞内三磷酸活性代谢物am的含量(经蛋白定量数据校正)，结果如说明书附图2b所示。i-1及i-2均可在氧化应激提升的细胞内表现出更理想的代谢活化，活性代谢物am累积量增加明显；而sof组的细胞中，am在干预前后am的累积量变化并不明显。这一结果说明，在氧化应激提升条件下，本专利所述化合物能更加有效的提升代谢活化效率；这也提示在慢性丙肝炎症状态下，化合物有可能具有更高的活性代谢物暴露水平，进而抗病毒活性更优。
[0188]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，这些改进和变换应属于本发明所附权利要求的保护范围。

技术特征：

1.一种手性磷酰胺中间体，其结构式如式(ⅵ)所示：其中，r1选自：h或c
1-3
烷基；r2选自：h或c
1-3
烷基；x选自：s或o；ar选自：苯基、1-萘基或2-萘基；优选的，所述手性磷酰胺中间体，其结构式如式(
ⅵ‑
1)所示：其中，x选自：o或s；磷原子为s构型。2.权利要求1所述的手性磷酰胺中间体的制备方法，其合成路线如下所示：所述方法包括以下步骤：步骤a：将化合物ii、化合物iii与溶剂、碱混合，随后加入缩合剂，经酰化反应得到化合物iv；步骤b：化合物iv经脱保护得到化合物v；步骤c：将化合物v、二氯化磷酸苯酯与溶剂混合，随后依次加入碱与五氟苯酚，经磷酰化反应后，得到化合物ⅵ。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤a中，所述缩合剂为新戊酰氯、氯甲酸异丁酯、dcc、edci、hatu或hbtu；优选为新戊酰氯；优选的，在步骤a中，还可以加入添加剂，所述添加剂为氯化锂、氯化镁、溴化镁或氯化铜；优选为氯化锂；更优选的，所述缩合剂与添加剂的比例为1:0.5～5，优选为1:0.5～2。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤a中，所述碱为三乙胺、二异丙基乙基胺、n-甲基吗啉、dmap或dbu；优选为三乙胺；
在步骤c中，所述碱为三乙胺、二异丙基乙基胺、dmap或dbu；优选为三乙胺。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤a中，所述溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或者用这些溶剂任选组成的混合溶剂，优选为四氢呋喃；在步骤c中，所述溶剂为乙醚、甲基叔丁基醚、异丙醚、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、四氢呋喃、丙酮、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种的组合，优选为二氯甲烷。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤a中，反应温度为-50℃至80℃，优选的，所述反应温度为-20℃至30℃；在步骤c中，反应温度为-80℃至50℃，优选的，所述反应温度为-50℃至0℃。7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤c中，化合物二氯化磷酸苯酯与碱的比例为1:1～1:10；优选为1:2～1:5。8.权利要求1所述的手性磷酰胺中间体在制备索非布韦衍生物，或其药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物中的应用；优选的，所述索非布韦衍生物如式(i)所示：其中，r1选自：h或c
1-3
烷基；r2选自：h或c
1-3
烷基；x选自：s或o；ar选自：苯基、1-萘基或2-萘基。9.式(i)所示的索非布韦衍生物或其药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物，其中，r1选自：h或c
1-3
烷基；r2选自：h或c
1-3
烷基；x选自：s或o；ar选自：苯基、1-萘基或2-萘基；优选的，r1选自：h或甲基；r2选自：h或甲基；x选自：s或o；ar选自：苯基、1-萘基或2-萘基；更优选的，ar选自：苯基。10.如下任一所述的索非布韦衍生物或其药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物：
11.一种权利要求9所述的索非布韦衍生物的制备方法，其特征在于，其合成路线如下：
在上述合成路线中，r1、r2、x和ar的定义与所述式(i)衍生物中的定义一致，所述制备方法包括如下步骤：步骤a：将化合物ii、化合物iii与溶剂、碱混合，随后加入缩合剂，经酰化反应得到化合物iv；步骤b：化合物iv脱保护生成化合物v；步骤c：将化合物v、二氯化磷酸苯酯与溶剂混合，随后依次加入碱与五氟苯酚，经磷酰化反应后，得到化合物ⅵ；步骤d：化合物vi与化合物vii发生取代反应，得到化合物i。12.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求9或10所述的索非布韦衍生物或其药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物，以及药学上可接受的载体。13.权利要求9或10所述的索非布韦衍生物或其药学上可接受的盐、互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体或溶剂化物或权利要求12所述的组合物，在制备抗肝炎病毒药物中的应用；优选的，所述肝炎为丙型肝炎。