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一种吡喃2酮类化合物及其制备方法和应用与流程

sp.zhd001(图8)接种到500ml的烧瓶中，其中含有250ml的gause液体培养基(高氏1号液体培养基，市售)，然后在28℃的旋转摇床上(180rpm)培养10天，产生发酵。
20.(2)发酵产物过滤收集菌液，菌液用乙酸乙酯提取3次，合并提取液，减压浓缩后得到粗提物(6.8g)，粗提物经硅胶柱(50cm
×
6.0cm)层析分离，采用二氯甲烷和甲醇的混合液(二氯甲烷：甲醇体积比＝20:1)进行洗脱，收集洗脱液，减压蒸干后用制备hplc(15-100％甲醇,40min，流速为10ml/min)纯化，得到化合物(7r)-5-(甲氧基甲基)-3-甲基-6-(戊烷-2-基)-2h-吡喃-2-酮(6.2mg,tr＝30.5min)；其结构式如下所示：淡黄油状，[α]20d-78
°
(c 1.0,甲醇)；ecd(1mg/ml,甲醇)λ
max
(δε)205(+3.08),225(-0.54),300(-30.97)；hresims m/z 247.1313[m+na]
+
(计算值c
13h20
nao
3 247.1310)。
[0021]
实施例2：吡喃2酮类化合物的结构确认化合物((7r)-5-(甲氧基甲基)-3-甲基-6-(戊烷-2-基)-2h-吡喃-2-酮)的相对构型通过高分辨质谱、核磁共振确定；绝对构型通过高斯计算ecd方法予以确定。
[0022]
化合物(吡喃2酮类化合物)的hresims(高分辨率电喷雾电离质谱)见图6，显示在m/z 247.1313处有一个[m+na]
+
的离子峰，表明分子式为c
13h20
o3，有四个不饱和度。
[0023]
图11h-nmr显示有一组甲基丁基氢[δh 0.90(3h,t,j＝7.5hz,me-10)，1.20(3h,d,j＝6.6hz,me-13)，1.30(1h,m,h-9)，1.21(1h,m,h-9)，2.97(1h,m,h-7)，1.68(1h,m,h-8)，1.52(1h,m,h-8)]，一组甲氧基氢δh 3.34(3h,s)，一组芳香甲基氢(δh 2.03,s,me-12)，一组氧合亚甲基氢(δh 4.2,s,h-11)和一个芳香氢(δh 7.31,s,h-4)的典型信号。
[0024]
13
c-nmr(图2)与hsqc(图3)光谱结合显示13个碳原子，包括4个甲基、3个亚甲基、2个次甲基和4个季碳。根据δc 165.9(q,c-2)、123.2(q,c-3)、144.9(d,c-4)、114.2(q,c-5)和166.3(q,c-6)的吡喃-2-1核特征信号，化合物(吡喃2酮类化合物)应为吡喃-2-1衍生物。
[0025]1h-1
h cosy谱(图5)揭示了两个自旋体系，即h-7/h-8/h-9/me-10和h-7/me-13。根据h-8、h-9和me-13与c-6的hmbc(图4)相关性，1-甲基丁基连接在c-6上，而根据h-11与c-5、c-6、c-7和me-14与c-11的hmbc相关性，甲氧基甲基连接在c-5上。通过h-4与c-2和c-6的hmbc相关性，建立了吡喃环。最后，根据me-12与c-2、c-3和c-4的hmbc(图4)相关性推断，me-12连接在c-3。因此，化合物的平面结构被确定为5-(甲氧基甲基)-3-甲基-6-(戊烷-2-基)-2h-吡喃-2-酮。
[0026]
通过ecd计算确定了c-7的绝对构型，如图7所示。根据上述证据，将化合物的结构确定为(7r)-5-(甲氧基甲基)-3-甲基-6-(戊烷-2-基)-2h-吡喃-2-酮((7r)-5-(methoxymethyl)-3-methyl-6-(pentan-2-yl)-2h-pyran-2-one)，是吡喃-2-酮家族的新成员。
[0027]
化合物的
13
c(150mhz)和1h(600mhz)nmr数据
[0028]
实施例3：吡喃2酮类化合物的抗菌活性用营养肉汤稀释法测定化合物对金黄葡萄球菌、大肠杆菌和白念珠菌生长的抑制活性。
[0028]
将金黄葡萄球菌、大肠杆菌和白念球菌接种于含有营养琼脂培养基(na)的培养皿中，置于37℃恒温培养箱培养24h。用接种环挑取单一菌落接种于含有营养肉汤培养基(nb)的500ml锥形瓶中，置于37℃摇床中180rpm振荡培养10h，以空白营养肉汤培养基(nb)作为对照，在550nm波长下检测菌落的od值，并用空白nb培养基稀释调节od值使其控制在0.08～0.1范围内，此时病原菌的浓度达到108cfu/ml。在无菌的96孔板内先加入待测样品和mhb培养基后用移液混匀，随后每孔加入3μl菌液，保证每孔的最终液体体积为200μl。以氯霉素和两性霉素b为阳性对照，以dmso(体积浓度为5％)作为阴性对照。将96孔板置于37℃恒温培养箱中培养12小时，随时观察。若孔内没有病原菌生长，则进一步缩小样品浓度，继续测定。直到得到其最小抑菌浓度(mic)。
[0029]
化合物对大肠杆菌(革兰氏阴性)的mic值为25.0μg/ml，对金黄葡萄球菌(革兰氏阳性)的mic值为25.0μg/ml，对白念珠菌(真菌)的mic值为25.0μg/ml；化合物对典型的人类致病菌革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和真菌均具有抑菌活性，表现出了广谱抗菌特性。
[0030]
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

技术特征：

1.一种吡喃2酮类化合物，其特征在于，该化合物的具体名称为(7r)-5-(甲氧基甲基)-3-甲基-6-(戊烷-2-基)-2h-吡喃-2-酮，其结构式如下所示：。2.根据权利要求1所述的一种吡喃2酮类化合物，其特征在于，所述化合物是从海洋放线菌nocardiopsis sp.zhd001的发酵产物中分离获得。3.如权利要求1所述吡喃2酮类化合物的制备方法，其特征在于，将海洋放线菌nocardiopsis sp.zhd001接种于液体培养基中进行发酵扩大培养，过滤收集菌液，菌液用乙酸乙酯提取，减压浓缩后得到粗提物，粗提物经硅胶柱层析分离，最后用半制备hplc或制备hplc纯化。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，发酵扩大培养是在28
±
2℃下旋转摇床养10-12天。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，硅胶柱层析分离采用二氯甲烷和甲醇的混合液进行洗脱。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，二氯甲烷和甲醇的体积比为15-20：1。7.如权利要求1所述吡喃2酮类化合物在制备广谱抗菌药物中的应用。

技术总结

本发明公开了一种吡喃2酮类化合物及其制备方法和应用，该化合物的具体名称为(7R)-5-(甲氧基甲基)-3-甲基-6-(戊烷-2-基)-2H-吡喃-2-酮，该化合物为新发现的天然产物，具有独特的广谱抗菌活性，为解决抗生素过度使用导致的抗药性问题提供了新的选择。的抗药性问题提供了新的选择。的抗药性问题提供了新的选择。