包含葡萄糖寡糖的组合物及其制备方法和用途与流程

包含葡萄糖寡糖的组合物及其制备方法和用途
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2020年5月29日提交且名称为“glucose-oligosaccharide compositions and uses thereof”的欧洲申请20177583.0的权益，其以引用的方式全文并入本文。
技术领域
3.本发明涉及一种包含葡萄糖寡糖的组合物以及制备此类组合物的方法。本发明还涉及包含本发明的组合物的动物饲料。本发明还涉及根据本发明的组合物用于动物的预防性的用途，例如用于改善抗病性和/或免疫系统调节。本发明还涉及根据本发明的组合物用于提高动物的生长性能的用途，特别是在极具挑战性的条件下。

背景技术：

4.目前对营养补充剂的需求是改善农场动物(包括养殖鱼类和海鲜)和宠物的整体健康，特别是免疫系统。
5.随着世界人口的增加，对供人食用的动物蛋白的需求不断增长。动物生产工业面临着饲养更多动物的挑战，并且这是通过增加动物体以及通过增加动物生长性能和改善动物整体健康来完成的。动物健康和动物生长性能是动物养殖成功的关键因素。
6.具体地，当涉及动物生长性能时，特别是在极具挑战性的条件下，免疫系统的调节是重要因素，并且使用饲料添加剂来实现这一点。另一个主要问题是细菌污染，特别是在家禽和猪中。更强的免疫系统可以帮助抵抗此类细菌感染，而不是借助于抗生素的使用，这会导致细菌随时间推移而产生抗生素耐药性。
7.已知一些寡糖组合物会改善总体健康，特别是肠道健康，例如一些存在益生元的甘露寡糖(或甘露糖寡糖或甘露聚糖寡糖或mos)和果糖寡糖(fos)和半乳糖寡糖(gos)。然而，这些尚未显示出对免疫系统的调节具有任何直接的有益影响。
8.此外，它们都存在难以从自然界分离的缺点，例如从酵母细胞壁分离甘露寡糖，或者需要大量化学合成和纯化，例如通过酶促地或化学地降解菊粉而产生fos或通过曲霉菌(aspergillus)的β-果糖苷酶对蔗糖的转果糖作用而产生fos。因此，当在商业上用于饲料组合物中时，这些产品过于昂贵，产生许多废物流和不可忽略的环境影响。
9.因此，显然仍需要提供可调节免疫系统的寡糖，优选使用多于一种免疫系统机制。因此，还显然仍需要提供更有效的生产膳食纤维(诸如寡糖)的方法。此外，需要提供以更经济的环境友好方式生产的寡糖。本发明试图解决这些需求。

技术实现要素：

10.在第一方面，本发明涉及一种包含葡萄糖寡糖的组合物(“本发明的葡萄糖寡糖组合物”)，该组合物能够通过如下方法获得，该方法包括在浓度为0.01m至0.25m、优选0.10m至0.2m、更优选0.10m至0.15m的盐酸催化剂的存在下，在50℃至120℃、优选50℃至99℃的
温度下，对浓度为50％至95％、优选70％至90％(干物质)的葡萄糖进行水性聚合。
11.在另一方面，本发明涉及一种动物饲料或宠物食物产品，其包含本发明的葡萄糖寡糖组合物和进一步的动物饲料或宠物食品成分。
12.在另一方面，本发明涉及一种用于制备包含葡萄糖寡糖的组合物的方法，其特征在于其包括以下步骤：
13.a)制备浓度为50％至95％、优选70％至90％(干物质)的葡萄糖水溶液；
14.b)向葡萄糖水溶液中加入盐酸催化剂以达到0.01m至0.25m、优选0.10m至0.2m、更优选0.10m至0.15m盐酸的浓度；
15.c)使溶液的温度达到50℃至120℃、优选50℃至99℃以使葡萄糖聚合，从而获得葡萄糖寡糖组合物；以及
16.d)任选地，将葡萄糖寡糖组合物的ph调节至4至7的ph。
17.在另一方面，本发明涉及本发明的葡萄糖寡糖组合物用于改善动物或宠物的生长性能的用途，特别是在极具挑战性的条件下。
18.在另一方面，本发明涉及本发明的葡萄糖寡糖组合物用于改善动物或宠物的免疫系统调节的用途。
19.最后，本发明还涉及本发明的葡萄糖寡糖组合物用于动物或宠物的预防性以预防或降低疾病，特别是感染性疾病的严重程度的用途。
附图说明
20.图1示出了根据本发明的葡萄糖寡糖的hplc分析。
21.图2示出了一氧化氮(no)产生测定结果。
22.图3示出了吞噬作用测定结果。
23.图4示出了卵内试验结果。
24.图5示出了实验期间家禽代谢设施中的设定和测量温度。
25.图6示出了用含有根据本发明的组合物的饮食喂养的鸡的肠道乳杆菌体的增加。
具体实施方式
26.使用“一种”描述本文的各种元件或组分仅仅是为了方便并且给出的是本发明的一般意义。本说明书应被理解为包含一种或至少一种，并且单数也包括复数意义，除非明显另有说明。
27.除非另有说明，本文公开的所有重量百分比均以干基(db)计。
28.葡萄糖寡糖
29.在本说明书中，术语葡萄糖寡糖和葡糖寡糖可互换地用于描述相同的寡糖。葡萄糖寡糖定义为dp为3或更高的葡萄糖的低聚糖。dp是指聚合度，即低聚糖中存在的单体的数量。在葡萄糖寡糖中，单体是葡萄糖。本发明的葡萄糖寡糖组合物包含dp为3或更高的葡萄糖寡糖，并且其还可以包含葡萄糖单糖和二糖。可进行hplc分析(iso 10504:1998-10)以确定存在于葡萄糖寡糖组合物中的各种糖类的量和类型，诸如dp1、dp2、dp3和更高。
30.本发明在所包括的条款和所附权利要求书中限定。本发明的至少一个方面基于以
下发现：与现有的寡糖组合物相比，根据本发明的包含葡萄糖寡糖的组合物(“本发明的组合物”或“本发明的葡萄糖寡糖组合物”)在动物中具有改善的效果。本发明的葡萄糖寡糖组合物的改善效果在其他方面改善效果中尤其是对动物的生长性能的改善效果(特别是在极具挑战性的条件下)，特别与动物的免疫系统的改善调节相关。
31.此外，该葡萄糖寡糖组合物的特征在于它不是直接从酵母或植物分离或衍生的。然而，用于制备根据本发明的葡萄糖寡糖组合物的葡萄糖可来源于从植物(诸如玉米或小麦)获得的淀粉。
32.本发明的葡萄糖寡糖组合物可以具有以下组合的特征中的一个或多个特征：
33.i.本发明的葡萄糖寡糖组合物的葡萄糖寡糖可以具有dp为至少3的按干基(db)计30重量％(wt％)或更高，优选40wt％db或更高的含量。更优选地，dp为至少3的葡萄糖寡糖的含量可以是组合物的40wt％db至55wt％db、最优选40wt％db至50wt％db。本发明的葡萄糖寡糖组合物可以具有dp为至少3的约45wt％db的葡萄糖寡糖的含量。
34.ii.此外，葡萄糖寡糖组合物可以包含10wt％db至60wt％db、优选15wt％db至55wt％db、更优选20wt％db至50wt％db、最优选30wt％db至48wt％db的量的葡萄糖。葡萄糖的含量可以为约30wt％db至47wt％db。葡萄糖的含量可以为约40wt％db至47wt％db。葡萄糖的含量可以为约42wt％db至47wt％db。葡萄糖的含量可以为约44wt％db至47wt％db。葡萄糖的含量可以为约45wt％db。
35.iii.本发明的葡萄糖寡糖组合物还优选地包含葡萄糖二糖(dp2)。因此，本发明的葡萄糖寡糖组合物可以具有5wt％db至15wt％db、优选6wt％db至12wt％db、更优选7wt％db至10wt％db、最优选约8wt％db至9wt％db的葡萄糖二糖含量。葡萄糖二糖的含量可以为约8.5wt％db。
36.iv.此外，葡萄糖寡糖组合物可以包含5wt％db至30wt％db、优选8wt％db至25wt％db、更优选10wt％db至20wt％db、最优选12wt％db至18wt％db的量的葡萄糖三糖(dp3)。dp3的含量可以为约12wt％db至15wt％db。具有dp3的葡萄糖寡糖的含量可以为约13wt％db至15wt％db。具有dp3的葡萄糖寡糖的含量可以为约14wt％db。
37.v.此外，葡萄糖寡糖组合物可以包含5wt％db至20wt％db、优选6wt％db至18wt％db、更优选7wt％db至15wt％db、最优选8wt％db至12wt％db的量的葡萄糖四糖(dp4)。dp4的含量可以为约9wt％db至10wt％db。具有dp4的葡萄糖寡糖的含量可以为约9.5wt％db。
38.vi.此外，葡萄糖寡糖组合物可以包含3wt％db至20wt％db、优选4wt％db至18wt％db、更优选5wt％db至15wt％db、最优选6wt％db至12wt％db的量的葡萄糖五糖(dp5)。具有dp5的葡萄糖寡糖的含量可以为约6wt％db至10wt％db。具有dp5的葡萄糖寡糖的含量可以为约6wt％db至8wt％db。具有dp5的葡萄糖寡糖的含量可以为约6wt％db至7wt％db。具有dp5的葡萄糖寡糖的含量可以为约6.5wt％db。
39.vii.此外，葡萄糖寡糖组合物可以包含2wt％db至15wt％db、优选3wt％db至12wt％db、更优选3wt％db至10wt％db、最优选4wt％db至8wt％db的量的具有dp6的葡萄糖寡糖。具有dp6的葡萄糖寡糖的含量可以为约4wt％db至6wt％db。具有dp6的葡萄糖寡糖的含量可以为约4wt％db至5wt％db。具有dp6的葡萄糖寡糖的含量可以为约4.5wt％db。
40.viii.此外，葡萄糖寡糖组合物可以包含2wt％db至15wt％db、优选3wt％db至12wt％db、更优选3wt％db至10wt％db、最优选4wt％db至8wt％db的量的具有dp7的葡萄糖
寡糖。dp7的含量可以为约4wt％db至6wt％db。具有dp7的葡萄糖寡糖的含量可以为约4wt％db至5wt％db。具有dp7的葡萄糖寡糖的含量可以为约4.5wt％db。
41.ix.此外，葡萄糖寡糖组合物可以包含1wt％db至10wt％db、优选1.5wt％db至8wt％db、更优选2wt％db至6wt％db、最优选2wt％db至4wt％db的量的具有dp8的葡萄糖寡糖。具有dp8的葡萄糖寡糖的含量可以为约2wt％db。
42.x.此外，葡萄糖寡糖组合物可以包含0.5wt％db至5.0wt％db、优选0.8wt％db至4.0wt％db、更优选1.0wt％db至3.0wt％db、最优选1.0wt％db至2.0wt％db的量的具有dp9的葡萄糖寡糖。具有dp9的葡萄糖寡糖的含量可以为约1.5wt％db。
43.xi.此外，葡萄糖寡糖组合物可以包含1wt％db至10wt％db、优选2wt％db至8wt％db、更优选3wt％db至5wt％db、最优选3wt％db至4wt％db的量的dp大于9的葡萄糖寡糖。具有dp9的葡萄糖寡糖的含量可以为约3.5wt％db。
44.xii.葡萄糖寡糖组合物的干物质可以为至少70wt％、优选至少75wt％、更优选至少80wt％、甚至更优选至少85wt％、最优选至少90wt％。干物质可以为例如70wt％至90wt％、或75wt％至85wt％、或80wt％至85wt％。
45.xiii.此外，葡萄糖寡糖组合物的特征可在于，葡萄糖寡糖主要包含α-1,6糖苷键和β-1,6糖苷键。优选地，糖苷键总数的至少45％、更优选至少50％、最优选约55％是α-1,6键和β-1,6键(不包括非还原末端残基中的键)。优选地，糖苷键总数的至多67％、更优选至多65％或至多60％、最优选至多55％是α-1,6键和β-1,6键(不包括非还原末端残基中的键)。
46.xiv.此外，葡萄糖寡糖组合物的特征可在于，葡萄糖寡糖包含α-1,4糖苷键和β-1,4糖苷键。优选地，糖苷键总数的至少5％、更优选至少7％、最优选约8％是α-1,4键和β-1,4键(不包括非还原末端残基中的键)。优选地，糖苷键总数的至多15％、更优选至多12％、最优选至多11％或至多10％是α-1,4键和β-1,4键(不包括非还原末端残基中的键)。
47.xv.此外，葡萄糖寡糖组合物的特征可在于，葡萄糖寡糖包含α-1,3糖苷键和β-1,3糖苷键(不包括非还原末端残基中的键)。优选地，糖苷键总数的至少5％、更优选至少7％、最优选约8％是α-1,3键和β-1,3键。优选地，糖苷键总数的至多15％、更优选至多12％、最优选至多11％或至多10％是α-1,3键和β-1,3键(不包括非还原末端残基中的键)。
48.xvi.此外，葡萄糖寡糖组合物的特征可在于，葡萄糖寡糖包含α-1,2糖苷键和β-1,2糖苷键(不包括非还原末端残基中的键)。优选地，糖苷键总数的至少8％、更优选至少10％、最优选至少12％是α-1,2键和β-1,2键。优选地，糖苷键总数的至多18％、更优选至多15％、最优选至多14％是α-1,2键和β-1,2键(不包括非还原末端残基中的键)。
49.xvii.此外，葡萄糖寡糖组合物的特征可在于，葡萄糖寡糖包含α-1,3,6糖苷键和β-1,3,6糖苷键或α-1,2,6糖苷键和β-1,2,6糖苷键。优选地，糖苷键总数的至少4％、更优选至少5％、最优选约6％是α-1,3,6键和β-1,3,6键或α-1,2,6键和β-1,2,6键(不包括非还原末端残基中的键)。优选地，糖苷键总数的至多12％、更优选至多10％、最优选至多8％是α-1,3,6键和β-1,3,6键或α-1,2,6键和β-1,2,6键(不包括非还原末端残基中的键)。
50.在上述所有情况下，术语“约”是指+/-0.5。根据本发明的葡萄糖寡糖组合物在此明确地包括上述(i)至(xvii)的特征中的一个或多个特征的任何组合。
51.根据以下pmaa方法(基于leeuwen等人carbohydrate research 343(2008)第1237
页至第1250页，以及根据ciucanu等人的carbohydrate research(1984)，131，第209页至第217页描述的全甲基化方法)确定键的数量：
[0052]-将糖浆样品溶解在0.5ml水中，然后冷冻干燥。
[0053]-键分析中的第一步是游离羟基的脱全甲基化。
[0054]-将全甲基化的化合物用6m tfa溶液水解以产生部分甲基化的单糖，随后进行还原和乙酰化。
[0055]-然后通过gc-ms分析(挥发性)部分甲基化的单糖，得到特征质谱和保留时间。所有测量均一式三份地执行。
[0056]-由于样品含有30％至40％游离葡萄糖，因此对于计算样品中每种糖苷键类型的百分比来说，不考虑葡萄糖的峰值。
[0057]
根据本发明的葡萄糖寡糖组合物通常作为糖浆以液体形式使用。然而，该葡萄糖寡糖组合物的干物质可以适应其应用的需要。因此，根据预期用途，还可以将该葡萄糖寡糖组合物干燥并以粉末形式储存。以粉末形式，本发明的葡萄糖寡糖组合物是淡黄至白、自由流动的稳定粉末。
[0058]
用于制备本发明的葡萄糖寡糖组合物的方法
[0059]
本发明还涉及一种制备葡萄糖寡糖组合物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0060]
a)制备浓度为50wt％至95wt％、优选70wt％至90wt％的葡萄糖水溶液；
[0061]
b)向葡萄糖水溶液中加入盐酸催化剂以达到0.01m至0.25m、优选0.10m至0.2m、更优选0.10m至0.15m盐酸的浓度；
[0062]
c)使溶液的温度达到50℃至120℃、优选50℃至99℃以使葡萄糖聚合，从而获得葡萄糖寡糖组合物；以及
[0063]
d)任选地，将葡萄糖寡糖组合物的ph调节至4至7的ph。
[0064]
根据本发明的方法的优选特征中的一个或多个特征的所有组合在此明确地包括在内。
[0065]
有利的是，葡萄糖水溶液包含50wt％至95wt％或50wt％至90wt％的葡萄糖、优选60wt％至89wt％、更优选70wt％至88wt％、甚至更优选80wt％至87wt％、最优选约85wt％的葡萄糖(基于干物质)。优选的方法是水溶液基本上仅由水和葡萄糖组成。这可以通过将高纯度(例如最少95wt％或99wt％)结晶葡萄糖(也称为右旋糖)溶解在水中来制备。优选的结晶葡萄糖是结晶α-d-葡萄糖(右旋糖)一水合物，例如购自cargill的c*dex
tm
02001。
[0066]
有利的是，盐酸(其用作催化剂)在来自步骤b的水溶液中的浓度为0.01m至0.25m、优选0.10m至0.2m、更优选0.10m至0.15m、最优选约0.1m。
[0067]
有利的是，步骤c)的温度为50℃至120℃、优选50℃至99℃、优选60℃至98℃、更优选70℃至95℃、甚至更优选80℃至92℃、更优选85℃至92℃、最优选约90℃。
[0068]
步骤c)中葡萄糖聚合的反应时间为2.5小时至40小时、优选5小时至30小时、优选10小时至27小时、更优选12小时至25小时、甚至更优选15小时至23小时、最优选16小时至20小时。步骤c)中葡萄糖聚合的反应时间可以为约18小时。反应时间将取决于温度和盐酸的浓度。温度越高，盐酸催化剂的浓度越高，所需的反应时间越短。
[0069]
优选地，葡萄糖寡糖组合物被中和。可中和葡萄糖寡糖组合物，直到组合物的ph值达到4至7为止。这对于增加产品的稳定性是有利的，例如随时间推移水解较少，因此产品的
组成几乎没有变化。另外，优点是产品适合与对酸或酸性条件敏感的其它成分一起使用。可用任何合适的碱进行中和。优选地，特别是当葡萄糖寡糖组合物用在饲料或宠物食品中时，碱是苛性碱和/或氢氧化钾。
[0070]
应当注意，有可能中和该葡萄糖寡糖组合物或使该葡萄糖寡糖组合物脱或进行这两种操作。
[0071]
优选地，该葡萄糖寡糖组合物是精制的。精制所产生的葡萄糖寡糖组合物可以通过使其通过一系列阴离子和阳离子树脂和/或诸如活性炭的精处理剂(polisher)和/或谱法来进行。具体地，如果需要，可通过谱法进行精制以从组合物中除去部分或全部葡萄糖。
[0072]
本发明还涉及能够通过本发明的方法获得的葡萄糖寡糖组合物。实际上，此类葡萄糖寡糖组合物具有如本文所讨论的改善效果。
[0073]
在饲料和宠物食品中的用途以及在动物中的效果
[0074]
该葡萄糖寡糖组合物可用作动物饲料和宠物食物产品中的饲料添加剂或饲料成分。
[0075]
本发明的葡萄糖寡糖组合物对动物的生长性能具有改善的效果，特别是在极具挑战性的条件下。因此，本发明的葡萄糖寡糖组合物可用于改善动物的生长性能(即与未饲喂根据本发明的组合物的动物相比)，特别是在极具挑战性的条件下。本发明还涵盖本发明的葡萄糖寡糖组合物用于改善动物的生长性能，特别是在极具挑战性的条件下。所谓“极具挑战性的条件”在本文中是指疾病状况，特别是感染性疾病，以及引起应激的条件，诸如环境应激(热、湿度等)、运输应激、行为应激、来自接种疫苗或来自操纵的应激。感染性疾病由病原体例如病毒、细菌、真菌、寄生虫等引起。
[0076]
本发明还涉及如本文所述的葡萄糖寡糖组合物作为动物的预防物的用途。本发明还涵盖如本文所述的葡萄糖寡糖组合物用作预防性动物的药物。所谓“预防性”在本文中是指针对疾病进行防护或预防，并且还指降低疾病的严重程度。具体地，本发明涉及该葡萄糖寡糖组合物作为用于动物对抗疾病，特别是感染性疾病的预防物的用途。本发明还涵盖如本文所述的葡萄糖寡糖组合物用作预防性动物抵抗疾病，特别是感染性疾病的药物。感染性疾病由病原体例如病毒、细菌、真菌、寄生虫等引起。
[0077]
已经发现，根据本发明的葡萄糖寡糖组合物能够调节免疫系统，即能够调节免疫细胞或巨噬细胞的应答。因此，本发明还涉及根据本发明的葡萄糖寡糖组合物用于调节免疫细胞或巨噬细胞的应答。本发明还涉及根据本发明的葡萄糖寡糖组合物用于调节免疫细胞或巨噬细胞的应答的用途。
[0078]
根据本发明的葡萄糖寡糖组合物通过两种不同的机制调节免疫系统，与其它已知的纤维状寡糖(例如甘露糖寡糖)相比，允许葡萄糖寡糖组合物具有双重作用和增加的性能。
[0079]
根据本发明的葡萄糖寡糖组合物能够调节巨噬细胞的no产生(如一氧化氮(no)体外测定中所示)。no产生的一定增加有助于对抗病毒、肿瘤细胞、细菌、真菌、原生动物和蠕虫的细胞毒性机制和防御机制。由此，保护宿主免受感染并启动先天免疫系统的激活。然而，太高的no产生对淋巴细胞增殖具有抑制作用，并且可能对其它正常宿主细胞造成损伤。该葡萄糖寡糖组合物能够刺激巨噬细胞产生正确量的no，即调节这种免疫应答。
[0080]
根据本发明的葡萄糖寡糖组合物能够增加巨噬细胞中的吞噬作用(如吞噬作用体外测定中所示)。在葡萄糖寡糖组合物的帮助下，巨噬细胞可以增加外部细菌的内化(吞噬作用)。不受理论的束缚，这些内化的细菌被呈递给其它免疫细胞，诸如b细胞和t细胞。这导致先天免疫系统的激活，并且随后可以通过细菌肽的呈递激活适应性免疫系统。
[0081]
本发明还涉及该葡萄糖寡糖组合物用于改善动物的肠道健康，特别是增加动物消化系统中乳杆菌菌的用途。
[0082]
本发明还涉及如本文所述的葡萄糖寡糖组合物用于改善动物的体重增加和/或增加动物的饲料摄入和/或增加动物的体重的用途。这包括其在改善体重增加和/或增加饲料摄入和/或增加动物体重中的和非用途两者。本发明包括如本文所述的葡萄糖寡糖组合物用于改善体重增加和/或增加饲料摄入和/或增加动物体重的用途。
[0083]
优选地，动物是家禽、猪、反刍动物、马、水生动物(诸如鱼，例如鲑鱼或鳟鱼和虾)或宠物。更优选地，动物是家禽或猪。家禽包括肉鸡、火鸡、鸭或鹅。已经显示，在下面的实施例部分中举例说明，令人惊讶地，根据本发明的葡萄糖寡糖组合物的摄入对动物的免疫系统是有益的，从而预防疾病并且继而增加动物的生长性能，特别是在极具挑战性的条件下。此外，在若干剂量的化合物的卵内施用中，已经表明根据本发明的葡萄糖寡糖可安全地用于动物饲料。根据本发明的组合物不引起任何死亡。
[0084]
所有上述用途还分别适用于包含根据本发明的葡萄糖寡糖组合物和其它饲料或宠物食品成分的动物饲料或宠物食物产品。
[0085]
饲料组合物
[0086]
本发明还涉及一种动物饲料或宠物食物产品，其包含本发明的葡萄糖寡糖组合物和进一步的动物饲料或宠物食物成分。
[0087]
动物饲料产品可以是设计用于喂养猪，优选仔猪或鸡的饲料产品，诸如用于肉鸡的饲料或用于产蛋鸡的饲料，或鱼饲料，诸如鲑鱼或鳟鱼。动物饲料也可以是马饲料。除了本发明的葡萄糖寡糖组合物之外，所述猪饲料、鸡饲料、鱼饲料或马饲料还包含通常或专门用于此类动物饲料的饲料成分。制备动物饲料领域的技术人员知道动物饲料的典型和特定组成。葡萄糖寡糖组合物还非常适合用作饲料添加剂。因为它是可溶的，所以例如它可以容易地加入到饮用水中。饲料产品的其它饲料成分可以是其它碳水化合物和纤维，诸如葡聚糖、阿拉伯糖基木聚糖寡糖、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质等。取决于动物物种，饲料的组成将变化；本领域技术人员理解如何配制合适的饲料组合物。
[0088]
优选地，存在于动物饲料或宠物食物产品中的葡萄糖寡糖组合物的量使得在一份或多份中每kg动物或宠物体重每天提供0.01g至20g、优选0.01g至10g的葡萄糖寡糖组合物。优选地，存在于动物饲料或宠物食物产品中的葡萄糖寡糖组合物的量使得在一份或多份中每kg动物或宠物体重每天提供0.01g至0.02g的葡萄糖寡糖组合物。具体地，基于动物饲料或宠物食物产品的重量，动物饲料或宠物食物产品可以包含0.02wt％至0.6wt％的本发明的葡萄糖寡糖组合物。
[0089]
在一个方面，基于动物饲料或宠物食物产品的重量，动物饲料或宠物食物产品(优选猪饲料)包含0.1wt％至0.5wt％、优选0.1wt％至0.4wt％、甚至更优选0.1wt％至0.3wt％、还甚至更优选0.1wt％至0.2wt％的本发明的葡萄糖寡糖组合物。
[0090]
在另一个方面，基于动物饲料或宠物食物产品的重量，动物饲料或宠物食物产品
(优选家禽饲料)包含0.01wt％至1.0wt％、优选0.01wt％至0.5wt％、甚至更优选0.01wt％至0.3wt％、还甚至更优选0.01wt％至0.2wt％、最优选0.02wt％至0.2wt％的本发明的葡萄糖寡糖组合物。
[0091]
发明条款
[0092]
本发明涵盖以下内容：
[0093]
条款1：一种葡萄糖寡糖组合物，该葡萄糖寡糖组合物能够通过如下方法获得，该方法包括在浓度为0.01m至0.25m、优选0.10m至0.20m、更优选0.10m至0.15m的盐酸催化剂的存在下，在50℃至120℃、优选50℃至99℃的温度下，对浓度为50％至95％、优选70％至90％的葡萄糖进行水性聚合。
[0094]
条款2：根据条款1所述的组合物，其特征在于其包含按干基(db)计30重量％(wt％)或更高、优选40wt％db或更高、更优选约45wt％db的聚合度(dp)为至少3的葡萄糖寡糖。
[0095]
条款3：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含10wt％db至60wt％db、优选15wt％db至55wt％db、更优选20wt％db至50wt％db、最优选30wt％db至48wt％db的量的葡萄糖。
[0096]
条款4：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含5wt％db至15wt％db、优选6wt％db至12wt％db、更优选7wt％db至10wt％db、最优选约8wt％db至9wt％db的量的葡萄糖二糖。
[0097]
条款5：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含5wt％db至30wt％db、优选8wt％db至25wt％db、更优选10wt％db至20wt％db、最优选12wt％db至18wt％db的量的dp为3的葡萄糖寡糖。
[0098]
条款6：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含5wt％db至20wt％db、优选6wt％db至18wt％db、更优选7wt％db至15wt％db、最优选8wt％db至12wt％db的量的dp为4的葡萄糖寡糖。
[0099]
条款7：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含3wt％db至20wt％db、优选4wt％db至18wt％db、更优选5wt％db至15wt％db、最优选6wt％db至12wt％db的量的dp为5的葡萄糖寡糖。
[0100]
条款8：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含2wt％db至15wt％db、优选3wt％db至12wt％db、更优选3wt％db至10wt％db、最优选4wt％db至8wt％db的量的dp为6的葡萄糖寡糖。
[0101]
条款9：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含2wt％db至15wt％db、优选3wt％db至12wt％db、更优选3wt％db至10wt％db、最优选4wt％db至8wt％db的量的dp为7的葡萄糖寡糖。
[0102]
条款10：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含1wt％db至10wt％db、优选1.5wt％db至8wt％db、更优选2wt％db至6wt％db、最优选2wt％db至4wt％db的量的dp为8的葡萄糖寡糖。
[0103]
条款11：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含0.5wt％db至5.0wt％db、优选0.8wt％db至4.0wt％db、更优选1.0wt％db至3.0wt％db、最优选1.0wt％db至2.0wt％db的量的dp为9的葡萄糖寡糖。
[0104]
条款12：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含1wt％db至10wt％db、优选2wt％db至8wt％db、更优选3wt％db至5wt％db、最优选3wt％db至4wt％db的量的dp大于9的葡萄糖寡糖。
[0105]
条款13：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于其包含至少70wt％、优选至少75wt％、更优选至少80wt％的干物质。
[0106]
条款14：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少45％、优选至少50％且至多67％、优选至多65％或至多60％是α-1,6键和β-1,6键，其中“糖苷键总数”不包括非还原末端残基中的键。
[0107]
条款15：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少5％、更优选至少7％且至多15％、优选至多12％、更优选至多11％或至多10％是α-1,4键和β-1,4键(其中“糖苷键总数”不包括非还原末端残基中的键)。
[0108]
条款16：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少5％、更优选至少7％且至多15％、优选至多12％、更优选至多11％或至多10％是α-1,3键和β-1,4键(其中“糖苷键总数”不包括非还原末端残基中的键)。
[0109]
条款17：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少8％、优选至少10％、更优选至少12％且至多18％、优选至多15％、更优选至多14％是α-1,2键和β-1,2键(其中“糖苷键总数”不包括非还原末端残基中的键)。
[0110]
条款18：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少4％、优选至少5％且至多12％、优选至多10％是α-1,3,6键和β-1,3,6键或α-1,2,6键和β-1,2,6键(其中“糖苷键总数”不包括非还原末端残基中的键)。
[0111]
条款19：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于该方法中的聚合步骤的温度为60℃至98℃、更优选70℃至95℃、更优选80℃至92℃、还更优选85℃至92℃、最优选约90℃。
[0112]
条款20：根据前述条款中任一项所述的组合物，其特征在于该方法中的聚合步骤的反应时间为2.5小时至40小时、优选5小时至30小时、优选10小时至27小时、更优选12小时至25小时、甚至更优选15小时至23小时、最优选16小时至20小时或者约18小时。
[0113]
条款21：一种动物饲料或宠物食物产品，该动物饲料或宠物食物产品包含根据条款1至20中任一项所述的组合物以及另外的动物饲料或宠物食物成分。饲料产品可以是家禽的饲料，例如鸡、火鸡、鸭、鹅。
[0114]
条款22：根据条款21所述的动物饲料或宠物食物产品，其中根据条款1至20中任一项所述的组合物以足以在一份或多份中每kg动物或宠物体重提供0.01g至0.02g的组合物(每天)的量存在。
[0115]
条款23：根据条款21或22所述的动物饲料或宠物食物产品，其中基于动物饲料或宠物食物产品的重量，根据条款1至20中任一项所述的组合物以0.01wt％至0.5wt％、优选0.01wt％至0.3wt％、更优选0.02wt％至0.2wt％的量存在。
[0116]
条款24：根据条款1至20中任一项所述的葡萄糖寡糖组合物作为动物饲料或宠物食物产品中的饲料添加剂或饲料成分的用途。饲料产品可以是家禽的饲料，例如鸡、火鸡、鸭、鹅。
[0117]
条款25：根据条款1至20中任一项所述的组合物或根据条款21至23中任一项所述
的饲料/宠物食物产品用于改善动物的生长性能的用途，特别是在极具挑战性的条件下。动物可以是家禽，例如鸡、火鸡、鸭、鹅。所谓“极具挑战性的条件”在本文中是指疾病状况，特别是感染性疾病，以及引起应激的条件，诸如环境应激(热、湿度等)、运输应激、行为应激、来自接种疫苗或来自操纵的应激。
[0118]
条款26：根据条款1至20中任一项所述的组合物或根据条款21至23中任一项所述的饲料/宠物食物产品用于改善动物的免疫系统调节的用途。动物可以是家禽，例如鸡、火鸡、鸭、鹅。
[0119]
条款27：根据条款1至20中任一项所述的组合物或根据条款21至23中任一项所述的饲料/宠物食物产品用于动物的预防性的用途。动物可以是家禽，例如鸡、火鸡、鸭、鹅。
[0120]
条款28：根据条款27所述的组合物或饲料/宠物食物产品，其中预防性预防感染性疾病，优选由病毒、细菌、真菌或寄生虫引起的疾病，或降低其严重程度。该疾病可以是影响家禽的疾病。
[0121]
条款29：一种用于制备包含葡萄糖寡糖的组合物的方法(优选根据条款1至20中的任一项)，其特征在于其包括以下步骤：
[0122]
a)制备浓度为50％至95％、优选70％至90％(干物质)的葡萄糖水溶液；
[0123]
b)向葡萄糖水溶液中加入盐酸催化剂以达到0.01m至0.25m、优选0.10m至0.20m、更优选0.10m至0.15m盐酸的浓度；
[0124]
c)使溶液的温度达到50℃至120℃、优选50℃至99℃以使葡萄糖聚合；以及
[0125]
d)任选地，将葡萄糖寡糖组合物的ph调节至4至7的ph。
[0126]
条款30：根据条款29所述的方法，其特征在于来自步骤b)的溶液的盐酸浓度为0.02m至1.5m，优选0.05m至1.0m，更优选0.08m至0.8m，最优选约0.1m。
[0127]
条款31：根据条款29或30中任一项所述的方法，其特征在于步骤c)中的聚合的温度为60℃至98℃、更优选70℃至95℃、更优选80℃至92℃、还更优选85℃至92℃、最优选约90℃。
[0128]
条款32：根据条款29至31中任一项所述的方法，其中步骤c)中的葡萄糖聚合的反应时间为2.5小时至40小时、优选5小时至30小时、优选10小时至27小时、更优选12小时至25小时、甚至更优选15小时至23小时、最优选16小时至20小时或者约18小时。
[0129]
条款33：根据条款29至32中任一项所述的方法，其中所述葡萄糖水溶液基本上由葡萄糖和水组成。
[0130]
条款33：根据条款29至32中任一项所述的方法，其中在步骤(a)之前通过将具有至少95wt％、优选至少99wt％的纯度的结晶葡萄糖溶解在水中来制备葡萄糖水溶液。
[0131]
本发明通过以下非限制性实施例说明。
[0132]
实施例
[0133]
实验1：根据本发明的葡萄糖寡糖组合物的产生(实施例1)
[0134]
1.85％干物质(ds)的糖浆的制备
[0135]
使用ir天平在105℃下测定葡萄糖一水合物粉末(cargill c*dex 02001)的干物质30分钟：91.4％ds。
[0136]
将反应器加热至90℃。
[0137]
称量达到85％ds所需量的软化水并转移到反应器中。称量达到85％ds所需量的葡萄糖一水合物，并将其缓慢地一匙一匙地加入到反应器中，同时搅拌以得到均匀的混合物。
[0138]
通过折射率测量所得葡萄糖浆的干物质：85％ds。
[0139]
2.缩合反应(dx糖浆85％ds，在0.1mhcl中于90℃下处理18小时)
[0140]
将37％的浓hcl加入到85％ds的右旋糖糖浆中，以获得反应混合物中0.1m的hcl浓度(即10ml的37％ hcl/l糖浆)。将反应温度控制在90℃并搅拌18小时。然后将反应混合物冷却至60℃。
[0141]
3.活性炭处理(在30％ds下反应，碳：糖浆比例1:7，60℃，2小时)
[0142]
称量所需的活性炭(所需量为1:7的碳：糖浆(30％ds下)比例)。将活性炭用软化水冲洗数次以除去细颗粒。倾出活性炭。在反应器中用软化水将含有葡萄糖寡糖的糖浆(即根据本发明的组合物)稀释至30％ds。测量ds并通过折射率检查。在60℃下将倾析的活性炭加入到反应器中的糖浆中。将混合物温和搅拌2小时。
[0143]
4.过滤(dicalite 478助滤剂)
[0144]
在布氏漏斗上制备助滤剂滤饼，并用软化水冲洗(对于具有30％ds的2l糖浆，使用19cm的布氏漏斗和约60g助滤剂)。弃去冲洗液。小心地将浆液倒在助滤剂上，并将滤液收集在干净的过滤烧瓶中。
[0145]
通过折射率测量滤液的干物质。
[0146]
5.糖浆精制(阳离子、阴离子、精处理剂)
[0147]
精制柱在45℃下再生。将以下柱串联连接：阳离子-》阴离子-》精处理剂。测量干物质和糖浆的电导率。
[0148]
将柱加热至60℃并以3bv/h至4bv/h的流速泵送糖浆(对于130ml的阳离子柱，应用400ml/h的流速)。当ds达到大于0.5％时，收集精制的糖浆。将全部收集物混合。测量精制糖浆的电导率和干物质。
[0149]
6.额外的过滤
[0150]
由于糖浆颜很深，因此使该糖浆通过gf/c玻璃纤维膜4x以及0.45μm和0.22μm膜。颜没有进一步变浅，但是由来自活性炭的细粒产生的黑点被除去。
[0151]
7.精制糖浆的浓缩(rotavapor)
[0152]
在rotavapor中逐步浓缩精制的糖浆。rotavapor的浴设定为60℃，冷却浴设定为10℃。缓慢降低压力以避免糖浆沸腾到冷凝物烧瓶中。最后，施加30mbar的真空。将浆液浓缩至85％ds(用折射率测量)。将样品标记为实施例1。
[0153]
8.hplc-寡糖分布的面积％(ag+柱)
[0154]
将糖浆样品实施例1用软化水稀释至约10％ds至15％ds，并在0.45μmsartorius一次性过滤器上过滤。将滤液收集在hplc小瓶中并分析寡糖(2
×
bio-rad hpx-42a柱串联结合脱灰，使用hplc水作为洗脱液，以0.6ml/min的速率注射2μl-使用折光率检测器)。相对面积％示于下表中：
[0155]
dp8+dp7dp6dp5dp4dp3dp2未知1右旋糖果糖未知25.392.644.416.439.3614.379.6612.7631.361.750.22
[0156]
图1显示了hplc分析。
[0157]
9.gpc-低mw
[0158]
将糖浆样品实施例1用软化水稀释至10％ds，并在0.45μm sartorius一次性过滤器上过滤。将滤液收集在hplc小瓶中并用gpc分析寡糖的低mw分布。进行两次注射并计算平均值。gpc结果提供在下表中。
[0159][0160]
10.键
[0161]
将糖浆实施例1的不同键的量与市售可溶性纤维(抗性糊精)和(聚葡萄糖)的量进行比较。
[0162]
根据以下pmaa方法(基于leeuwen等人carbohydrate research 343(2008)第1237页至第1250页，以及根据ciucanu等人的carbohydrate research(1984)，131，第209页至第217页描述的全甲基化方法)确定键的数量：
[0163]
1.将来自样品的糖浆溶解在0.5ml水中，然后冷冻干燥。
[0164]
2.键分析中的第一步是游离羟基的脱全甲基化。
[0165]
3.将全甲基化的化合物用6m tfa溶液水解以产生部分甲基化的单糖，随后进行还原和乙酰化
[0166]
4.通过gc-ms分析(挥发性)部分甲基化的单糖，得到特征质谱和保留时间。所有测量均一式三份地执行。
[0167]
5.由于样品含有30％至40％游离葡萄糖，因此对于计算样品中每种键类型的百分比来说，不考虑葡萄糖的峰值。
[0168]
结果示于下表中：
[0169]
[0170][0171]
从上表可以看出，根据本发明的葡萄糖寡糖组合物的α,β-1,6糖苷键的比例比市售糊精(诸如来自tate&lyle的70，经由淀粉的糊精化生产)和市售聚葡萄糖(葡萄糖在酸性催化剂和山梨糖醇存在的情况下的聚合)例如来自dupont的高得多。
[0172]
不受理论的约束，认为本发明的组合物中1,6糖苷键比例的增加可能是当该组合物包含在动物饮食中时所观察到的有益免疫学作用的原因。
[0173]
实验2：体外免疫应答试验
[0174]
在以下体外实验2a(用于测试化合物是否能够刺激鸡巨噬细胞样细胞产生一氧化氮的一氧化氮测定)和实验2b(用于测试化合物是否能够增加鸡巨噬细胞样细胞中珠子的吞噬作用/内化的吞噬作用测定)中，将糖浆实施例1的免疫应答机制与现有技术样品实施例2进行比较。
[0175]
实施例2是通过酶促方法获得的葡萄糖寡糖纤维，如ep0325872a1中所公开的。
[0176]
实验2a：一氧化氮(no)产生测定
[0177]
使用鸡巨噬细胞样细胞系hd11进行一氧化氮产生测定(也如biggelaar等人在vaccines 2020,8(2),332中所述)，以将根据实施例1的葡萄糖寡糖和根据实施例2的现有技术葡萄糖寡糖的no产生方面的免疫应答进行比较。
[0178]
为了获得标准no校准曲线，如biggelaar等人所述使用griess测定。
[0179]
脂多糖(lps)用作阳性对照(导致高no产生)，且rpmi培养基(即roswell park memorial institute(rpmi)-1640培养基)和dmso用作阴性对照(两者均导致零no产生)。
[0180]
在第1天接种hd11细胞，在第2天加入不同浓度，即10ppm、50ppm和100ppm的化合物。在第4天收集上清液并进行no测定，给出如图2所示的no浓度。每次no测定一式三份地测试化合物，即每种化合物每种浓度总共进行3个系列的no测定。
[0181]
图2示出了根据本发明的葡萄糖寡糖通过刺激鸡巨噬细胞样细胞产生一氧化氮而明显具有免疫应答。巨噬细胞产生no作为对抗病毒、肿瘤细胞、细菌、真菌、原生动物和蠕虫的细胞毒性和抗微生物防御机制。因此，正确量的no产生引发先天免疫系统的激活并保护宿主免受感染。
[0182]
(nb：负输出意味着零no产生。由于基于标准no校准曲线的计算而出现负值。负输出可视为零no产生。)
[0183]
实验2b：吞噬作用测定
[0184]
使用鸡巨噬细胞样细胞系hd11进行吞噬作用测定(也如de geus等人在journal of immunology 2012,188:4516-4526中所述)，以将根据实施例1的葡萄糖寡糖和根据实施
例2的现有技术葡萄糖寡糖纤维在其增加鸡巨噬细胞样细胞中珠子的吞噬作用/内化的能力方面的免疫应答进行比较。
[0185]
巨噬细胞可以内化外部细菌并且能够将这些内化的细菌呈递给其它免疫细胞，诸如b细胞和t细胞。因此，先天免疫系统被激活，其随后可激活适应性免疫系统。
[0186]
图3示出了显示在10ppm、50ppm和100ppm的葡萄糖寡糖(根据本发明的实施例1和根据现有技术的实施例2)浓度下的相对小珠摄取的结果。显然，在10ppm下，实施例1的葡萄糖寡糖具有更高的剂量响应效果。
[0187]
实验3：卵内试验
[0188]
进行卵内试验以确保根据本发明的葡萄糖寡糖在增加的浓度下不影响未孵化鸡的死亡率。因此进行试验以表明根据本发明的化合物在动物中的安全性。在这种情况下，与实施例3，市售共轭亚油酸(cla)进行比较。已知cla可以调节免疫系统。
[0189]
在标准条件下孵育480个鸡蛋。将它们分成8组，每组10个鸡蛋，重复6次。在孵育的第17天，给鸡蛋注射1ml浓度渐增的实施例1和实施例3的相应溶液。目的是根据(uni等人，2005,poult sci 84:764-770)所述的方法将其递送到羊水中以供发育中的胚胎口服消耗和消化。在孵化当天，对孵化的小鸡以及剩余的未孵化的鸡蛋进行计数，并且计算孵化率％，以通过不引起死亡来表明注射材料的安全性。
[0190]
结果在图4中示出。显然，即使在至多0.02mg的浓度下，施用实施例1的葡萄糖寡糖溶液的小鸡100％在孵化日正常孵化。相比之下，施用至多仅0.006mg实施例3的材料的一部分鸡蛋受到该材料的负面影响。不是所有小鸡都孵化。
[0191]
这表明根据本发明的实施例1葡萄糖寡糖在动物中使用是安全的。
[0192]
实验4：生长性能试验
[0193]
实验设计
[0194]
以0.02wt％包含水平和0.2wt％包含水平的本发明的葡萄糖寡糖的本发明饮食或不含添加的化合物的对照饮食喂养鸟。
[0195]
从0日龄至21日龄饲喂饮食。每个区块将随机分配到144个围栏中，每次重复12次，每次5只鸡。
[0196]
饮食
[0197]
配制标准的起始饮食。以磨碎的玉米为代价将本发明的测试化合物添加到饮食中(1:1重量交换)。
[0198]
将饮食制成2.5mm颗粒长度的颗粒。
[0199]
实验基础饮食的组成在表1中给出。
[0200]
表1：以wt％计的成分组成
[0201][0202][0203]
动物、环境和样品管理
[0204]
从商业孵化场购买900只ross 308一日龄雄性鸡(来自50周龄肉种鸡)，并随机分配在144个围栏中，每个围栏5只肉鸡。在孵化场对肉鸡接种马立克氏病和新城病疫苗。围栏(41cm
×
41cm/0.17m2)包含一个托盘喂食器和两个高度可调节的自动乳头式饮用器。在整个研究过程中提供自由采食的饲料和水。
[0205]
温度和通风由计算机控制。从到达日的92℉(33.3℃)开始，温度设定为每天逐渐降低1℉(约0.6℃)至21日龄时最终温度为71℉(21.7℃)。图5中示出了目标和实现的温度(实验期间家禽代谢设施中的设定和测量温度)。按照工业标准每天23小时提供光。
[0206]
数据收集
[0207]
在第0天、第7天和第21天记录每个围栏的体重。此外，在对肉鸡进行称重的同一天记录每个围栏的饲料消耗量。基于计算的体重增加和饲料消耗，以kg体重增加/kg所消耗的饲料计算增重与饲料比(g:f)，并使用去除的体重和死亡率进行校正。
[0208]
在21日龄时，每个围栏选择三只鸡(6个奇数区块)并且在采样之前单独称重，这是使用泄殖腔拭子完成的。使用2ml管将拭子在0.5ml dna/rna shield(zymo research,ca,usa)中涡旋，将排泄物内容物从拭子释放到管中。接下来，将管储存在室温下。
[0209]
0日龄至21日龄的肉鸡的生长性能和死亡率的结果如下表所示。
[0210][0211][0212]
adgc＝针对期间内动物离开、到达和调和调整所校正的平均每日增重(＝(加入的总重量/去除的总重量)/天数)
[0213]
adfic＝针对期间内动物离开、到达和调和调整所校正的平均每日饲料摄入(＝总饲料消失的重量/天数)
[0214]
g:fc＝校正的增益与进料比(＝adgc/adfic)
[0215]
生长性能和死亡率的结论
[0216]
可以看出，用实施例1的葡萄糖糖类组合物以两种不同的剂量对鸡进行是安全的。没有观察到死亡率的增加。
[0217]
与21天试验期相比，“增重与饲料比”显著改善。因此，即使在非挑战性条件下，与对照饮食相比，具有根据本发明的组合物的饮食改善了肉鸡的总体生长性能。在0.2wt％的浓度下观察到最好的结果。
[0218]
实施例5：体内饲料试验免疫学
[0219]
从第0天(孵化日)直到21日龄，通过将实施例1的葡萄糖寡糖作为饲料添加剂添加到ross 308肉鸡的饮食中(以0.2wt％的浓度)来进行回肠/盲肠中的微生物分析。
[0220]
图6示出了与对照饮食相比，当每日喂食包含实施例1的葡萄糖寡糖作为饲料添加剂的饮食时，7日龄鸡的肠道乳杆菌体增加。具体地，通过荧光原位杂交(fish)作为标准化相对荧光的函数测量，在肠道体中观察到乳杆菌3(lactobacillus 3)和罗伊氏乳杆菌1(lactobacillus reuteri 1)的显著增加：
[0221]
common_name对照实施例1罗伊氏乳杆菌22.642.69乳杆菌33.244.77罗伊氏乳杆菌13.164.64
[0222]
因此，实施例1的葡萄糖寡糖作为饲料添加剂改变了肠道中的微生物组成并促进了乳杆菌(lactobacillus)物种。

技术特征：

1.一种葡萄糖寡糖组合物，所述葡萄糖寡糖组合物能够通过如下方法获得，所述方法包括在浓度为0.01m至0.25m、优选0.10m至0.20m、更优选0.10m至0.15m的盐酸催化剂的存在下，在50℃至120℃、优选50℃至99℃的温度下，对浓度为50％至95％、优选70％至90％的葡萄糖进行水性聚合。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于其包含按干基(db)计30重量％(wt％)或更高、优选40wt％db或更高、更优选约45wt％db的聚合度(dp)为至少3的葡萄糖寡糖。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于其包含下列物质中的一者或多者：i.葡萄糖，其量为10wt％db至60wt％db、优选15wt％db至55wt％db、更优选20wt％db至50wt％db、最优选30wt％db至48wt％db；ii.葡萄糖二糖，其量为5wt％db至15wt％db、优选6wt％db至12wt％db、更优选7wt％db至10wt％db、最优选约8wt％db至9wt％db；iii.dp为3的葡萄糖寡糖，其量为5wt％db至30wt％db、优选8wt％db至25wt％db、更优选10wt％db至20wt％db、最优选12wt％db至18wt％db；iv.dp为4的葡萄糖寡糖，其量为5wt％db至20wt％db、优选6wt％db至18wt％db、更优选7wt％db至15wt％db、最优选8wt％db至12wt％db；v.dp为5的葡萄糖寡糖，其量为3wt％db至20wt％db、优选4wt％db至18wt％db、更优选5wt％db至15wt％db、最优选6wt％db至12wt％db；vi.dp为6的葡萄糖寡糖，其量为2wt％db至15wt％db、优选3wt％db至12wt％db、更优选3wt％db至10wt％db、最优选4wt％db至8wt％db；vii.dp为7的葡萄糖寡糖，其量为2wt％db至15wt％db、优选3wt％db至12wt％db、更优选3wt％db至10wt％db、最优选4wt％db至8wt％db；viii.dp为8的葡萄糖寡糖，其量为1wt％db至10wt％db、优选1.5wt％db至8wt％db、更优选2wt％db至6wt％db、最优选2wt％db至4wt％db；ix.dp为9的葡萄糖寡糖，其量为0.5wt％db至5.0wt％db、优选0.8wt％db至4.0wt％db、更优选1.0wt％db至3.0wt％db、最优选1.0wt％db至2.0wt％db；x.dp大于9的葡萄糖寡糖，其量为1wt％db至10wt％db、优选2wt％db至8wt％db、更优选3wt％db至5wt％db、最优选3wt％db至4wt％db。4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于其包含至少70wt％、优选至少75wt％、更优选至少80wt％的干物质。5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少45％、优选至少50％且至多67％、优选至多65％或至多60％是α-1,6键和β-1,6键，以及/或者其特征在于所述葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少5％、更优选至少7％且至多15％、优选至多12％、更优选至多11％或至多10％是α-1,4键和β-1,4键，以及/或者其特征在于所述葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少5％、更优选至少7％且至多15％、优选至多12％、更优选至多11％或至多10％是α-1,3键和β-1,4键，以及/或者其特征在于所述葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少8％、优选至少10％、更优选至少12％
且至多18％、优选至多15％或更优选至多14％是α-1,2键和β-1,2键，以及/或者其特征在于所述葡萄糖寡糖的糖苷键总数的至少4％、优选至少5％且至多12％、优选至多10％是α-1,3,6键和β-1,3,6键或α-1,2,6键和β-1,2,6键，其中所述“糖苷键总数”不包括非还原末端残基中的键。6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述方法中的聚合步骤的温度为60℃至98℃、更优选70℃至95℃、更优选80℃至92℃、还更优选85℃至92℃、最优选约90℃。7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于所述方法中的所述聚合步骤的反应时间为2.5小时至40小时、优选5小时至30小时、优选10小时至27小时、更优选12小时至25小时、甚至更优选15小时至23小时、最优选16小时至20小时或者约18小时。8.一种动物饲料或宠物食物产品，所述动物饲料或宠物食物产品包含根据权利要求1至7中任一项所述的组合物以及另外的动物饲料或宠物食物成分。9.根据权利要求8所述的动物饲料或宠物食物产品，其中根据权利要求1至7中任一项所述的组合物以足以在一份或多份中每kg动物或宠物体重每天提供0.01g至0.02g的所述组合物的量存在。10.根据权利要求8和9所述的动物饲料或宠物食物产品，其中基于所述动物饲料或宠物食物产品的重量，根据权利要求1至7中任一项所述的组合物以0.01wt％至0.5wt％、优选0.01wt％至0.3wt％、更优选0.02wt％至0.2wt％的量存在。11.根据权利要求1至7中任一项所述的葡萄糖寡糖组合物作为动物饲料或宠物食物产品中的饲料添加剂或饲料成分的用途。12.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物或根据权利要求8至10中任一项所述的饲料/宠物食物产品用于改善动物的生长性能的用途，特别是在极具挑战性的条件下。13.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物或根据权利要求8至10中任一项所述的饲料/宠物食物产品用于改善动物的免疫系统调节的用途。14.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物或根据权利要求8至10中任一项所述的饲料/宠物食物产品用于动物的预防性的用途。15.根据权利要求14所述的组合物或饲料/宠物食物产品，其中预防性预防感染性疾病，优选由病毒、细菌、真菌或寄生虫引起的疾病，或降低其严重程度。16.一种用于制备包含葡萄糖寡糖的组合物的方法，其特征在于其包括以下步骤：a.制备浓度为50％至95％、优选70％至90％(干物质)的葡萄糖水溶液；b.向所述葡萄糖水溶液中加入盐酸催化剂以达到0.01m至0.25m、优选0.10m至0.20m、更优选0.10m至0.15m盐酸的浓度；c.使所述溶液的温度达到50℃至120℃、优选50℃至99℃以使葡萄糖聚合；以及d.任选地，将所述葡萄糖寡糖组合物的ph调节至4至7的ph。17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于来自步骤b)的所述溶液的所述盐酸浓度为0.02m至1.5m，优选0.05m至1.0m，更优选0.08m至0.8m，最优选约0.1m。18.根据权利要求16或17中任一项所述的方法，其特征在于步骤c)中的所述聚合的温度为60℃至98℃、更优选70℃至95℃、更优选80℃至92℃、还更优选85℃至92℃、最优选约
90℃。19.根据权利要求16至18中任一项所述的方法，其中步骤c)中的所述葡萄糖聚合的反应时间为2.5小时至40小时、优选5小时至30小时、优选10小时至27小时、更优选12小时至25小时、甚至更优选15小时至23小时、最优选16小时至20小时或者约18小时。

技术总结

本发明涉及一种包含葡萄糖寡糖的组合物以及用于制备此类组合物的方法。本发明还涉及用于动物的包含葡萄糖寡糖的组合物。本发明还涉及包含葡萄糖寡糖的组合物用于改善动物的生长性能的用途。本发明还涉及包含葡萄糖寡糖的组合物用于改善动物的免疫系统调节的用途。用途。用途。

技术研发人员：

J

受保护的技术使用者：

嘉吉公司

技术研发日：

2021.05.28

技术公布日：

2023/2/28