一种禽类用抗菌消炎药物组合物及其制备方法与流程

1.本发明涉及禽用药物技术领域，尤其涉及一种禽类用抗菌消炎药物组合物及其制备方法。

背景技术：

2.我国家禽养殖业是畜牧业的支柱产业，也是规模化集约化程度最高、养殖水平较高的产业。近些年，家禽养殖得到了快速发展壮大，综合生产能力显著增强。但每年因各类禽病引起的家禽死亡率高达20％，损失巨大，在引起家禽死亡的各类疾病中，传染病占80％。近年来，发病家禽的种类也在增多，疾病类型日趋复杂化，新的禽病不断出现，给预防和带来很大困难，对家禽业更是危害很大。
3.抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性的药物，包括各种抗生素和人工合成的化学药物制剂。长期以来，抗菌药物在动物细菌性疾病的中发挥了重要作用，有的在畜禽养殖生产中还具有保健和促生长等功效。目前应对家禽细菌性疾病的常见药物仍是抗生素类，抗生素类药物虽然价格低廉，起效迅速，但长期大量使用会产生耐药性、药物残留等问题严重。
4.因此，很多国家已经开始禁止在畜禽饲料中添加抗菌素，没有禁用的国家也立法严格限制使用，并规定停药期和休药期。因此，在家禽配合饲料中添加低剂量的抗生素作为肠道微生态调节剂已不再受欢迎，探寻新的抗生素替代品来调节家禽肠道微生物区系和维持肠道健康是后抗生素时代的紧迫任务。中药就是在这种背景下成为家禽营养学研究的一个热点，中药既可预防和疾病，促进动物生长，又不会产生危害人体健康的药物残留，在家禽、家畜病毒性疾病防治中的作用已开始受到学术界的关注，诸如板蓝根、穿心莲等，它们通过杀灭病毒、抑制病毒繁殖及/或提高家禽家畜自身的免疫力等途径对疾病发挥预防作用，因此，中医药为家禽、家畜病毒性疾病提供了崭新的防治手段。
5104873621a公开了一种抗菌消炎的中药组合物，所述中药组合物的质量份组成如下：大黄10-50份、荷叶提取物15-30份、薄荷10-50份、金银花5-20份、穿心莲2-8份、马齿苋5-30份、鱼腥草4-15份、艾叶2-10份、滑石粉3-8份、柳树皮提取物2-6份、松针粉3-8份；氯离子中和剂0.2-0.8份、重金属螯合剂0.1-0.3份。有益效果是：1、本发明中添加了荷叶提取物，与薄荷、金银花一起使用，提高了中药组合物的抗菌消炎效果，本发明中将荷叶提取物用于抗菌消炎组合物，扩大了荷叶提取物的药用范围，而且成本低廉、药效明显；2、本发明中添加了柳树皮提取物，与荷叶提取物复配使用，具有显著的抗菌消炎优势，适口性强，能增进动物的食欲，天然，无耐药性、无毒副作用。该发明的中药组合物提取方式为醇提法，存在中药有效成分溶出较少、并且药物中杂质较多，从而影响药物的药效的缺陷。

技术实现要素：

6.有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种适用于家禽、药效好的抗菌消炎的中药组合物。
100ml:5-8ml。
24.优选的，所述步骤3)中氨基接枝壳聚糖、缩水甘油基三甲基氯化铵、水、丙酮的用量比为5-7g:5-10g:150-250ml。
25.优选的，所述步骤3)中沉淀物、4-异丙基苯胺、2-二吡啶基酮、无水乙醇、柠檬醛的用量比为1-3g：2-5ml:1-2g:50-100ml:2-3g。
26.进一步优选的，所述助提剂为两亲性壳聚糖-鱼精蛋白复合物，其制备方法如下：
27.将上述两亲性壳聚糖、鱼精蛋白加入到水中，搅拌30-60min后于-25～-15℃下冷冻干燥20-24h得到两亲性壳聚糖-鱼精蛋白复合物。
28.优选的，所述两亲性壳聚糖、鱼精蛋白、水的用量比为1-5g:2-3g：20-30ml。
29.现有技术中，水提法和醇提法是制备中药提取物成本较低、操作相对简便的方法，但是传统的水提法、醇提法存在中药有效成分溶出较少、并且容易出现药物中杂质较多的问题。壳聚糖分子表面存在大量可以利用的活性基团，能对中药提取液体系进行纯化。发明人通过在提取过程中加入两亲性壳聚糖，该两亲性壳聚糖具有亲水亲油的性质，能结合中药活性成分，使得活性成分与水的亲合度更高，能更好的溶于水中，增加了活性物质的溶解度，有利于中药活性成分的溶出，提高中药有效成分的含量，进而提升原料的使用效率；鱼精蛋白分子由于由许多精氨酸组成而带正电荷，并且能够通过螯合、电荷的中和、吸附架桥等作用除去中药成分中的蛋白质、鞣酸、胶质等杂质成分，使得提取出的中药活性组分杂质含量少，提高了中药有效成分的纯度，进而提高了禽类用抗菌消炎药物组合物的抗菌消炎性能。
30.黄芪，含有蔗糖、葡萄糖醛酸、黄芪多糖a、b、c、d，黏液质，多种氨基酸、苦味素、黄芪皂苷、胆碱、叶酸、黄烷化合物，还含有硒、硅、锌、钴、铜、钼等多种微量元素。具有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。
31.当归，为伞形科植物当归angelica sinensis(oliv.)diels的干燥根。性甘、辛，温。归肝、心、脾经。补血活血，调经止痛，润肠通便。用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚寒腹痛，风湿痹痛，跌扑损伤，痈疽疮疡，肠燥便秘。酒当归活血通经。用于经闭痛经，风湿痹痛，跌扑损伤。
32.鱼腥草，三白草科植物蕺菜houttuynia cordata thunb.的新鲜全草或干燥地上部分。性辛，微寒。归肺经。清热解毒，消痈排脓，利尿通淋。用于肺痈吐脓，痰热喘咳，热痢，热淋，痈肿疮毒。具有抗菌、抗病毒、提高机体免疫力、利尿等作用。
33.金银花，为忍冬科植物忍冬lonicera japonica thunb.的干燥花蕾或带初开的花。性甘，寒。归肺、心、胃经。清热解毒，疏散风热。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热。具有抗菌、消炎、降低血胆甾醇、解痉、祛痰等作用。
34.厚朴，为木兰科植物厚朴magnolia officinalis rehd.et wils.或凹叶厚朴magnolia officinalis rehd.et wils.var.biloba rehd.et wils.的干燥干皮、根皮及枝皮。性苦、辛，温。归脾、胃、肺、大肠经。燥湿消痰，下气除满。用于湿滞伤中，脘痞吐泻，食积气滞，腹胀便秘，痰饮喘咳。
35.益母草，为唇形科植物益母草leonurus japonicus houtt.的新鲜或干燥地上部分。性苦、辛，微寒。归肝、心包、膀胱经。活血调经，利尿消肿，清热解毒。用于月经不调，痛经经闭，恶露不尽，水肿尿少，疮疡肿毒。
36.与现有技术相比，本发明具有的有益效果：采用清热解毒、抗菌消炎类药物与活血化瘀药、补益药配伍，本品用于饲养鸡、鸭等禽类，具有成活率高、生长发育快、能抗传染病的爆发；通过在对中药活性成分的提取过程中加入助提剂两亲性壳聚糖-鱼精蛋白复合物，增加了中药活性成分的溶出，提高了原料的利用率并且能吸附中药活性成分溶出过程中产生的杂质，提高活性成分的纯度，提高了其抗菌消炎性能，进而提高了其药效。
具体实施方式
37.为免赘述，以下实施例中用到的物品若无特别说明则均市售产品，用到的方法若无特别说明则均为常规方法。
38.本发明所用部分原料来源如下：
39.黄芪，拉丁学名为radix astragali，产地甘肃省定西市岷县。
40.当归，拉丁学名为angelica sinensis，产地甘肃省定西市岷县。
41.鱼腥草，拉丁学名为houttuynia cordata thunb，产地湖南省常德市桃源县。
42.金银花，拉丁学名为lonicera japonica thunb，产地山东省临沂市。
43.厚朴，拉丁学名为houpoea officinalis，产地湖北省五峰县。
44.益母草，拉丁学名为leonurus japonicus houttuyn，产地河南省南阳市社旗县。
45.壳聚糖，去乙酰化度为90％，南通绿神生物工程有限公司。
46.鱼精蛋白，含量为99.9％，货号为03251140，江苏久佳生物科技有限公司。
47.spf级实验小鼠，由成都达硕生物科技有限公司提供。
48.实施例1
49.一种禽类用抗菌消炎药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
50.s1将黄芪、当归、鱼腥草、金银花、厚朴、益母草洗净、沥干、干燥、粉碎过80目筛后分别取20g、20g、20g、20g、10g、10g混合均匀得到中药材混合物；
51.s2向中药材混合物中加入20g助提剂、400g水，加热至80℃提取3次，提取时间为每次1h；提取完毕后，过滤，分离滤液和滤渣，将滤液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏a，药渣备用；
52.s3向药渣中加入95wt％乙醇水溶液，药渣与95wt％乙醇水溶液的用量比为1:20g/ml；在温度为45℃、超声频率80khz、超声功率为50w的条件超声提取3次；每次提取时间为30min；超声提取完毕后，收集上清液，将上清液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏b；
53.s5将提取浸膏a和提取浸膏b混合后加入沸腾制粒干燥机中进行沸腾制粒，设定喷速为200转/分；然后在70℃条件下干燥30min时颗粒表面水分≤4％，过30目筛，得到禽类用抗菌消炎药物组合物。
54.所述助提剂为两亲性壳聚糖-鱼精蛋白复合物，其制备方法如下：
55.1)在50℃下，将11g壳聚糖、200ml无水甲醇、10ml丙烯酸异丁酯混合搅拌8h；冷却至室温，离心，收集沉淀物；沉淀物用无水甲醇洗涤3次后在-25℃下冷冻干燥24h得到预处理壳聚糖；
56.2)将5.6g预处理壳聚糖、200ml无水甲醇、12ml乙二胺混合后加热至50℃反应4h；冷却至室温，离心，收集沉淀物；沉淀物用无水甲醇洗涤3次后在80℃下干燥6h得到氨基接
枝壳聚糖；
57.3)将5g氨基接枝壳聚糖、8.2g缩水甘油基三甲基氯化铵、200ml水混合后加热至90℃反应12h；加入150ml丙酮，有沉淀物产生，冷却过滤，收集沉淀物；将2.6g沉淀物、5ml4-异丙基苯胺、1.5g 2-二吡啶基酮、100ml无水乙醇混合后，在50℃反应24h；加入2.5g柠檬醛继续反应12h，冷却至室温，过滤，收集滤饼，滤饼分别用水和无水乙醇洗涤3次后于50℃干燥12h后研磨过80目筛，得到两亲性壳聚糖。
58.4)将3g两亲性壳聚糖、2.5g鱼精蛋白加入到25ml水中，搅拌40min后于-25℃下冷冻干燥24h得到两亲性壳聚糖-鱼精蛋白复合物。
59.实施例2
60.一种禽类用抗菌消炎药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
61.s1将黄芪、当归、鱼腥草、金银花、厚朴、益母草洗净、沥干、干燥、粉碎过80目筛后分别取20g、20g、20g、20g、10g、10g混合均匀得到中药材混合物；
62.s2向中药材混合物中加入20g助提剂、400g水，加热至80℃提取3次，提取时间为每次1h；提取完毕后，过滤，分离滤液和滤渣，将滤液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏a，药渣备用；
63.s3向药渣中加入95wt％乙醇水溶液，药渣与95wt％乙醇水溶液的用量比为1:20g/ml；在温度为45℃、超声频率80khz、超声功率为50w的条件超声提取3次；每次提取时间为30min；超声提取完毕后，收集上清液，将上清液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏b；
64.s5将提取浸膏a和提取浸膏b混合后加入沸腾制粒干燥机中进行沸腾制粒，设定喷速为200转/分；然后在70℃条件下干燥30min时颗粒表面水分≤4％，过30目筛，得到禽类用抗菌消炎药物组合物。
65.所述助提剂为两亲性壳聚糖，其制备方法如下：
66.1)在50℃下，将11g壳聚糖、200ml无水甲醇、10ml丙烯酸异丁酯混合搅拌8h；冷却至室温，离心，收集沉淀物；沉淀物用无水甲醇洗涤3次后在-25℃下冷冻干燥24h得到预处理壳聚糖；
67.2)将5.6g预处理壳聚糖、200ml无水甲醇、12ml乙二胺混合后加热至50℃反应4h；冷却至室温，离心，收集沉淀物；沉淀物用无水甲醇洗涤3次后在80℃下干燥6h得到氨基接枝壳聚糖；
68.3)将5g氨基接枝壳聚糖、8.2g缩水甘油基三甲基氯化铵、200ml水混合后加热至90℃反应12h；加入150ml丙酮，有沉淀物产生，冷却过滤，收集沉淀物；将2.6g沉淀物、5ml 4-异丙基苯胺、1.5g 2-二吡啶基酮、100ml无水乙醇混合后，在50℃反应24h；加入2.5g柠檬醛继续反应12h，冷却至室温，过滤，收集滤饼，滤饼分别用水和无水乙醇洗涤3次后于50℃干燥12h后研磨过80目筛，得到两亲性壳聚糖。
69.对比例1
70.一种禽类用抗菌消炎药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
71.s1将黄芪、当归、鱼腥草、金银花、厚朴、益母草洗净、沥干、干燥、粉碎过80目筛后分别取20g、20g、20g、20g、10g、10g混合均匀得到中药材混合物；
72.s2向中药材混合物中加入20g助提剂、400g水，加热至80℃提取3次，提取时间为每
次1h；提取完毕后，过滤，分离滤液和滤渣，将滤液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏a，药渣备用；
73.s3向药渣中加入95wt％乙醇水溶液，药渣与95wt％乙醇水溶液的用量比为1:20g/ml；在温度为45℃、超声频率80khz、超声功率为50w的条件超声提取3次；每次提取时间为30min；超声提取完毕后，收集上清液，将上清液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏b；
74.s5将提取浸膏a和提取浸膏b混合后加入沸腾制粒干燥机中进行沸腾制粒，设定喷速为200转/分；然后在70℃条件下干燥30min时颗粒表面水分≤4％，过30目筛，得到禽类用抗菌消炎药物组合物。
75.所述助提剂为壳聚糖。
76.对比例2
77.一种禽类用抗菌消炎药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
78.s1将黄芪、当归、鱼腥草、金银花、厚朴、益母草洗净、沥干、干燥、粉碎过80目筛后分别取20g、20g、20g、20g、10g、10g混合均匀得到中药材混合物；
79.s2向中药材混合物中加入20g助提剂、400g水，加热至80℃提取3次，提取时间为每次1h；提取完毕后，过滤，分离滤液和滤渣，将滤液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏a，药渣备用；
80.s3向药渣中加入95wt％乙醇水溶液，药渣与95wt％乙醇水溶液的用量比为1:20g/ml；在温度为45℃、超声频率80khz、超声功率为50w的条件超声提取3次；每次提取时间为30min；超声提取完毕后，收集上清液，将上清液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏b；
81.s5将提取浸膏a和提取浸膏b混合后加入沸腾制粒干燥机中进行沸腾制粒，设定喷速为200转/分；然后在70℃条件下干燥30min时颗粒表面水分≤4％，过30目筛，得到禽类用抗菌消炎药物组合物。
82.所述助提剂为鱼精蛋白。
83.对比例3
84.一种禽类用抗菌消炎药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
85.s1将黄芪、当归、鱼腥草、金银花、厚朴、益母草洗净、沥干、干燥、粉碎过80目筛后分别取20g、20g、20g、20g、10g、10g混合均匀得到中药材混合物；
86.s2向中药材混合物中加入400g水，加热至80℃提取3次，提取时间为每次1h；提取完毕后，过滤，分离滤液和滤渣，将滤液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏a，药渣备用；
87.s3向药渣中加入95wt％乙醇水溶液，药渣与95wt％乙醇水溶液的用量比为1:20g/ml；在温度为45℃、超声频率80khz、超声功率为50w的条件超声提取3次；每次提取时间为30min；超声提取完毕后，收集上清液，将上清液浓缩成70℃下相对密度为1.23g/ml的浸膏，得提取浸膏b；
88.s5将浸膏a和浸膏b混合后加入沸腾制粒干燥机中进行沸腾制粒，设定喷速为200转/分；然后在70℃条件下干燥30min时颗粒表面水分≤4％，过30目筛，得到禽类用抗菌消炎药物组合物。
89.测试例1
90.抗菌性能测试：
91.培养基制备及菌种的培养：取200g去皮马铃薯，切成小块后加1l水，沸水煮30min，双层纱布过滤，滤液加20g葡萄糖、15g琼脂粉，用蒸馏水定容至1l，调整ph值到5.6-6.0。取500ml锥形瓶分装，作为马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于121℃高温湿热灭菌20min，倒平板，每皿约15ml，静置直至培养基凝固，将大肠杆菌接种，置于37℃恒温箱培养18h；菌种培养好后置于5℃冰箱内待用。
92.供试品溶液的配制：分别称取实施例1-2、对比例1-3制得的禽类用抗菌消炎药物组合物1.5g，置于小烧杯中，分别加水溶解，定容至100ml容量瓶中，得到供应品溶液；
93.抑菌片的制备：取无菌干燥滤纸片5片，每片滴加供试液20μl，然后将滤纸片平放于无菌平面皿中，置于30℃下干燥后备用；
94.对照片的制备：取无菌干燥滤纸1片，每片滴加水溶液20μl，干燥后备用；
95.抑菌试验：用无菌棉拭子蘸取菌悬液，在培养基平板表面均匀涂抹3次，盖好平面皿，置于30℃干燥5min。用无菌镊子将5片抑菌片和1片对照样片贴放在每个平板表面上，对照样片贴在平板中。测量抑菌环的直径，试验重复3次，算出抑菌环的平均直径，测试数据见表1：
96.表1抗菌性能测试结果
[0097] 抑菌圈，mm实施例116.3实施例213.5对比例111.8对比例210.6对比例37.4
[0098]
抑菌圈直径≤10mm为耐药或无抑菌作用，抑菌圈直径在11～15为中度敏感，抑菌圈直径≥16mm为高度敏感。大肠杆菌是家禽身上常见的细菌。从表1的实验数据可以看出，实施例1制得的禽类用抗菌消炎药物组合物具有最好的抗菌效果，而实施例1与其他实施例、对比例的区别在于添加了由助提剂两亲性壳聚糖鱼精蛋白复合物，造成这种现象可能的原因是该两亲性壳聚糖具有亲水亲油的性质，结合有活性成分的两亲性壳聚糖与水的亲合度更高，能更好的溶于水中，增加了活性物质的溶解度，有利于中药活性成分的溶出，提高中药有效成分的含量，进而提升原料的使用效率；鱼精蛋白分子由于由许多精氨酸组成而带正电荷，并且能够通过螯合、电荷的中和、吸附架桥等作用除去中药成分中的蛋白质、鞣酸、胶质等杂质成分，使得提取出的中药活性组分杂质含量少，提高了中药有效成分的纯度，进而提高了禽类用抗菌消炎药物组合物的抗菌性能。
[0099]
测试例2
[0100]
消炎作用测试：
[0101]
小鼠耳肿胀模型的建立
[0102]
选取70只spf级实验小鼠，雌雄各半，体重18-22g，将小鼠随机分为7组，每组10只，分别为空白对照组、阳性对照组、5组实验组；空白对照组每天按0.4ml/100g灌喂蒸馏水，阳性对照组给予灌喂醋酸地塞米松片(10mg/kg)；实验组分别按0.5g/kg分别灌喂实施例1-2、
对比例1-3制得的禽类用抗菌消炎药物组合物，每日1次，给药5d；于末次给药1h后于右耳前后两面均匀涂抹1μl/g二甲苯致炎，左耳空白对照，不做处理；30min后将小鼠颈椎脱臼处死，以直径9mm的打孔器打下小鼠左右两耳相同部位的耳片，精密称重，消炎率的计算公式如下：
[0103]
肿胀度＝致炎侧耳片重-非致炎侧耳片重
[0104]
消炎率(％)＝(模型对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/模型对照组肿胀度
×
100％
[0105]
测试结果如表2所示：
[0106]
表2消炎作用测试结果
[0107] 消炎率(％)实施例146.8实施例243.6对比例137.2对比例235.1对比例328.9
[0108]
从表2的实验数据可以看出，实施例1制得的禽类用抗菌消炎药物组合物具有最好的消炎效果，可能的原因是该两亲性壳聚糖增加了活性物质的溶解度，有利于中药活性成分的溶出，提高中药有效成分的含量；鱼精蛋白分子由于由许多精氨酸组成而带正电荷，使得提取出的中药活性组分杂质含量少，提高了中药有效成分的纯度，进而提高了禽类用抗菌消炎药物组合物的消炎性能。

技术特征：

100目筛，得到两亲性壳聚糖。9.如权利要求8所述的禽类用抗菌消炎药物组合物，其特征在于：所述步骤1)中壳聚糖、无水甲醇、丙烯酸异丁酯的用量比为5-8g:100-120ml:2-5ml。10.如权利要求8所述的禽类用抗菌消炎药物组合物，其特征在于：所述步骤2)中预处理壳聚糖、无水甲醇、乙二胺的用量比为2-3g:50-100ml:5-8ml。

技术总结

本发明公开了一种禽类用抗菌消炎药物组合物及其制备方法，所述药物组合物包括如下组分：黄芪、当归、鱼腥草、金银花、厚朴、益母草。本发明采用清热解毒、抗菌消炎类药物与活血化瘀药、补益药配伍，本品用于饲养鸡、鸭等禽类；通过在对中药活性成分的提取过程中加入助提剂两亲性壳聚糖-鱼精蛋白复合物，增加了中药活性成分的溶出，提高了原料的利用率并且能吸附中药活性成分溶出过程中产生的杂质，提高活性成分的纯度，提高了其抗菌消炎性能，进而提高了其药效。了其药效。