(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910828658.4
(22)申请日 2019.09.03
(83)生物保藏信息
CGMCC No. 18357 2019.08.02
(71)申请人 北京量化健康科技有限公司
地址 102206 北京市昌平区科技园区超前
路37号院16号楼2层C2306
(72)发明人 李转羽 赵柏闻 马艳艳 吴城
(74)专利代理机构 北京润平知识产权代理有限
公司 11283
代理人 乔雪微 刘依云
(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)
A23L 33/135(2016.01)
A61K 35/747(2015.01)
A61P 9/10(2006.01)A61P 3/06(2006.01)A61P 1/16(2006.01)A61P 3/04(2006.01)C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及益生菌及生物医药领域，具体提
供了具有防治高血脂症功能的格氏乳杆菌以及
产品组合物及其制备方法和应用。所述格氏乳杆
菌(Lactobacillus gasseri)BDUP的保藏编号为
CGMCC No.18357。所述产品组合物含有所述格氏
品组合物的方法包括：将所述格氏乳杆菌的菌体
物质和/或代谢产物添加到产品基质中，得到所
述产品组合物。所述应用为制备用于预防和/或
高血脂症的产品。本发明提供的格氏乳杆菌
(Lactobacillus gasseri)的活菌体、灭活后的
菌体物质以及代谢产物均防治高血脂症的功效。权利要求书1页 说明书8页 附图3页CN 110628668 A 2019.12.31
C N 110628668
A
1.一种格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)，其特征在于，所述格氏乳杆菌的保藏编号为CGMCC No.18357。
2.一种产品组合物，其特征在于，该产品组合物含有权利要求1所述的格氏乳杆菌的菌体物质和/或代谢产物。
3.根据权利要求2所述的产品组合物，其中，所述格氏乳杆菌的菌体物质为格氏乳杆菌的活菌体和/或格氏乳杆菌的死菌体；
优选的，当所述产品组合物含有格氏乳杆菌的死菌体或代谢产物时，相对于100重量份的产品组合物，所述死菌体或所述代谢产物的含量为10-70重量份，优选为30-50重量份；
当所述产品组合物含有格氏乳杆菌的活菌体时，相对于每克所述产品组合物，所述活菌体的含量为105-1010CFU，优选为107-109CFU。
4.根据权利要求2或3所述的产品组合物，其中，所述产品组合物为食品组合物，所述食品组合物还含有食物；或者
所述产品组合物为药物组合物，所述药物组合物还含有药学上可接受的辅剂。
5.一种制备产品组合物的方法，其特征在于，所述方法包括：将权利要求1所述的格氏乳杆菌的菌体物质和/或代谢产物添加到产品基质中，得到所述产品组合物。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述格氏乳杆菌的菌体物质为格氏乳杆菌的活菌体和/或格氏乳杆菌的死菌体；
优选的，当所述产品组合物含有格氏乳杆菌的死菌体或代谢产物时，相对于100重量份的产品组合物，所述死菌体或所述代谢产物的添加量为10-70重量份，优选为30-50重量份；
当所述产品组合物含有格氏乳杆菌的活菌体时，相对于每克所述产品组合物，所述活菌体的添加量为105-1010CFU，优选为107-109CFU。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其中，所述产品组合物为食品组合物，所述产品基质为食物；或者
所述产品组合物为药物组合物，所述产品基质为药学上可接受的辅剂。
8.由权利要求5-7中任意一项所述的方法制备的产品组合物。
9.权利要求1所述的格氏乳杆菌或权利要求2-4和8中任意一项所述的产品组合物在制备用于预防和/或高血脂症的产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述高血脂症为动脉粥样硬化、冠心病、非酒精性脂肪肝、肥胖、高血脂、体重增加、腹后壁脂肪增加或附睾脂肪增加。
权 利 要 求 书1/1页CN 110628668 A
具有防治高血脂症功能的格氏乳杆菌以及产品组合物及其制
备方法和应用
技术领域
[0001]本发明涉及益生菌及生物医药领域。更具体地，本发明涉及一种具有防治高血脂症功能的格氏乳杆菌以及产品组合物及其制备方法和应用。
背景技术
[0002]高脂血症是指由于体内对脂类物质如胆固醇和/或甘油三酯的代谢或转运异常，进而使血浆中脂质
含量异常升高至超过正常范围的一种病症，可引起一系列危害人体健康的疾病，如动脉粥样硬化、冠心病和非酒精性脂肪肝等。随着经济的发展和生活习惯的改变，高脂血症的发病率在全世界范围内大幅攀升。据统计，我国现有血脂异常患者数量已经高达1.6亿，形成了庞大的心血管疾病和肝病高危体，极大加重了我国疾病防控的严峻形势[1]。因此，越来越多的研究专注于寻具有降血脂作用的物质并研究其降血脂机理。目前多种天然产物已经被证实具有降血脂作用。但是目前认为的具有降血脂作用的物质来源较为单一，分离纯化成本高，具有降血脂作用的药物又具有一定的副作用，从而限制了这些物质的大范围应用。益生菌安全性较高，分离纯化成本低，如果能够明确益生菌的降血脂功能，并确定其降血脂机制，将益生菌作为降血脂产品的前景将十分广阔。
[0003]格氏乳杆菌是一种栖息在人体胃肠道、口腔和阴道内的嗜酸性乳杆菌。许多研究证明，格氏乳杆菌能够降低人体的腰围、身体质量指数(BMI)和内脏脂肪，具有良好的减肥功效[2,3]。新近研究发现，格氏乳杆菌SBT2055菌株能够有效降低高甘油三酯血症患者甘油三酯(TG)和非酯化脂肪酸(NEFA)的水平，具有良好的降脂功效[4]，但BNR17菌株则没有显示出明显的降脂功效[5]，提示格氏乳杆菌的降脂功效是菌株特异的。此外，上述菌株均来源于国外，获得来源于中国本土的有功效的益生菌菌株具有重要的意义。
[0004]参考文献
[0005] 1.2018中国健康大数据:new.qq/omn/20181127/20181127A19AYP？pc.
[0006] 2.Kadooka Y,Sato M,Ogawa A,Miyoshi M,Uenishi H,Ogawa H,Ikuyama K, Kagoshima M,Tsuchida T:Effect of Lactobacillus gasseri SBT2055 in fermented milk on abdominal adiposity in adults in a randomised controlled trial.Br J Nutr2013,110(9):1696-1703.
[0007] 3.Kadooka Y,Sato M,Imaizumi K,Ogawa A,Ikuyama K,Akai Y,Okano M, Kagoshima M,Tsuchida T:Regulation of abdominal adiposity by probiotics (Lactobacillus gasseri SBT2055)in adults with obese tendencies in a randomized controlled trial.Eur J Clin Nutr 2010,64(6):636-643.
[0008] 4.Ogawa A,Kadooka Y,Kato K,Shirouchi B,Sato M:Lactobacillus gasseri SBT2055reduces postprandial and fasting serum non-esterified fatty acid levels in Japanese hypertriacylglycerolemic subjects.Lipids Health Dis 2014,
13:36.
[0009]5.K im J,Y un J M,K i m MK,K w o n O,C h o B:La c to ba c i l l us g a s s e ri BNR17Supplementation Reduces the Visceral Fat Accumulation and Waist Circumference in Obese Adults:A Randomized,Double-Blind,Placebo-Controlled Trial.J Med Food 2018,21(5):454-461.
发明内容
[0010]本发明的目的是提供一种具有防治高血脂症功能的格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)及其应用。
[0011]为了实现上述目的，一方面，本发明提供了一种格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)BDUP，其中，所述格氏乳杆菌的保藏编号为CGMCC No.18357。
[0012]第二方面，本发明提供了一种产品组合物，该产品组合物含有如上所述的格氏乳杆菌的菌体物质和/或代谢产物。
[0013]第三方面，本发明提供了一种制备产品组合物的方法，所述方法包括：将如上所述的格氏乳杆菌的菌体物质和/或代谢产物添加到产品基质中，得到所述产品组合物。[0014]第四方面，本发明提供了如上所述的方法制备的产品组合物。
[0015]第五方面，本发明提供了如上所述格氏乳杆菌或如上所述的产品组合物在制备用于预防和/或高血脂症的产品中的应用。
[0016]本发明提供的格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)的活菌体、灭活后的菌体物质以及代谢产物均防治高血脂症的功效。
[0017]本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。[0018]生物保藏
[0019]本发明的格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)，于2019年08月02日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.18357，简称BDUP。
附图说明
[0020]附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。
[0021]图1是显示格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)细菌培养物上清液对肝HepG2细胞脂质蓄积影响的Bodipy荧光显微镜下的图片。肝HepG2细胞用100μmol/L油酸孵育，同时加入10％、20％和30％体积的格氏乳杆菌细菌培养物上清液，或者加入50μmol/L辛伐他汀作为阳性对照。细胞处理24h后加入荧光染料Bodipy，室温染15min，然后用荧光显微镜进行拍照；
[0022]图2是显示格氏乳杆菌细菌培养物上清液对肝HepG2细胞脂质蓄积影响的油红O染后358nm下的吸光度。肝HepG2细胞用100μmol/L油酸孵育，同时加入10％、20％和30％体积的格氏乳杆菌细菌培养物上清液，或者加入50μmol/L辛伐他汀作为阳性对照。细胞处理24h后加入油红O染料，室温染15min，用PBS漂洗3次后用DMSO溶解，并用微孔板分光光度
计在358nm读取吸光度；
[0023]图3是显示格氏乳杆菌细菌培养物上清液对肝HepG2细胞脂质蓄积影响的细胞内甘油三酯TG的定量检测。肝HepG2细胞用100μmol/L油酸孵育，同时加入10％、20％和30％体积的格氏乳杆菌细菌培养物上清液，或者加入50μmol/L辛伐他汀作为阳性对照。细胞处理24h后用细胞微量TG定量检测试剂盒检测TG的含量；
[0024]图4是显示格氏乳杆菌细菌对高脂饲料诱导的高脂血症小鼠的降脂和防止脂肪变性功能的图片。(A)体重变化曲线。(B)4周体重增加量。(C)腹后壁脂肪和附睾脂肪重量。(D)血脂水平。(E)肝脏TC和TG含量。*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001。
具体实施方式
[0025]以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0026]一方面，本发明提供了一种格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)，其中，该格氏乳杆菌的保藏编号为CGMCC No.18357，简称BDUP。
[0027]本发明的格氏乳杆菌分离自健康成年人的粪便。
[0028]本发明提供的格氏乳杆菌经过培养能够产生大量格氏乳杆菌的活菌体，所述培养的方法没有特别
的要求，只要是能使所述格氏乳杆菌增殖即可，例如可以将107数量级的活菌体接种于格氏乳杆菌培养基中，并且在厌氧条件下，在35-37℃的温度下培养12-72小时后，得到菌体培养液。所述格氏乳杆菌培养基可以为公知的各种适合格氏乳杆菌培养的培养基，例如可以为乳汁和/或《乳酸菌——生物学基础及应用》(杨洁彬，轻工业出版社，1996年出版)中所述的乳酸菌(MRS)培养基或者YCFA/MPYG/PYG(DSMZ1611/ATCC1237/DSMZ104)。[0029]本发明可以进一步分离上述培养液中的格氏乳杆菌的活菌体，所述分离的方法没有特别的限制，只要是能从培养液中富集菌体即可，例如可以通过离心和/或过滤的方法实现，所述离心和所述过滤的条件可以为公知的条件，本发明在此不再赘述。
[0030]第二方面，本发明提供了一种产品组合物，该产品组合物含有如上所述的格氏乳杆菌的菌体物质和/或代谢产物。
[0031]本发明的发明人在研究的过程中发现，本发明提供的格氏乳杆菌CGMCC No.18357的活菌体、死菌体以及其代谢产物均有调节血脂的功效，从而实现预防和/或高血脂症的目的。
[0032]因此，所述产品组合物可以含有格氏乳杆菌CGMCC No.18357的活菌体，可以含有格氏乳杆菌CGMCC No.18357的死菌体，可以含有格氏乳杆菌CGMCC No.18357的代谢产物，可以含有格氏乳杆菌CGMCC No.18357的活菌体和死菌体，可以含有格氏乳杆菌CGMCC No.18357的死菌体和代谢产物，可以含有格氏乳杆菌CGMCC No.18357的活菌体和代谢产物，还可以含有格氏乳杆菌CGMCC No.18357的活菌体、死菌体和代谢产物。
[0033]其中，所述死菌体可以通过本领域常规的手段进行制备，例如，加热、辐射等。优选的，可以通过将活菌体在温度为65-85℃，时间为0.5-1.5h的条件下加热致死。
[0034]公知的，菌体的代谢产物一般存在于菌体的培养液中，因此，可以通过将菌体的培养液进行固液分离，获得清液的方式来获得代谢产物。其中，所述菌体的培养液可以通过在厌氧条件下，在35-37℃的温度下将本发明的格氏乳杆菌CGMCC No.18357培养12-72小时后
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