[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公开说明书
[11]公开号CN 1490298A [43]公开日2004年4月21日
[21]申请号03153223.3[21]申请号03153223.3
[22]申请日2003.08.08[71]申请人北京天纯维通生物技术有限公司
地址100035北京市西城区西直门南大街16号
（新技术所）
[72]发明人魏芸 张天佑 [74]专利代理机构北京正理专利代理有限公司代理人谢小延
[51]Int.CI 7C07C 66/02C07C 50/34C07B 63/00
权利要求书 1 页 说明书 6 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明涉及一种用高速逆流谱法从大黄中分
离制备高纯度芦荟大黄素及大黄酸的方法，其所用
的溶剂为石油醚，正庚烷、正己烷、正戊烷、氯仿、
二氯甲烷、四氯化碳，乙腈、甲醇、乙醇、丙酮；
乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯、
构成，适用于对各种途径获得的大黄粗提物提纯，
纯度可达到98％以上，适用于用各种型号的逆流
谱仪分离制备芦荟大黄素及大黄酸，能直接进大量
粗品或合成混合物，分离效果能达到很高的纯度。
03153223.3权 利 要 求 书第1/1页 1 一种芦荟大黄素及大黄酸的分离制备方法，其特征在于：它是采用逆流谱法从大黄粗提物中分离制备出高纯度芦荟大黄素及大黄酸，其溶剂体系由三个组分或四个组分构成，三个组分为：石油醚，或正庚烷、或正己烷、或正戊烷，或氯仿、或二氯甲烷、或四氯化碳，和乙腈、或甲醇、或乙醇、或丙酮，和水，体积比依次为：2-5∶0.5-1.5∶1-5：四个组分为：石油醚，或正庚烷、或正己烷、或正戊烷，和乙酸乙酯、或乙酸丙酯、或乙酸异丙酯、或乙酸正丁酯，和乙腈、或甲醇、或乙醇、或丙酮和水，体积比依次为：3-9∶1-7∶3-6∶2-6。
03153223.3说 明 书第1/6页
芦荟大黄素及大黄酸的分离制备方法
技术领域
本发明涉及一种采用高速逆流谱法从大黄中分离制备出高纯度单体芦荟大黄素(A l o e-e m o d i n)及大黄酸(r h e i n)的制备分离方法。 背景技术
大黄是中药的四大名药材之一，其药理用途十分广泛，主要功效为：破淤活血，攻下泻热，抗菌消炎，保肝利尿，调解免疫，延缓衰老，降脂减肥，抗肿瘤，止血止痛等。而且，还用于配制果糖、饮料、香料、酿酒和工业染料等行业。大黄性味苦寒，有攻下积滞、泻火凉血、活血化瘀、利胆退黄的功效。主要用于实热性肠胃积滞、大便燥结等症；亦适用于火热上炎而致的咽喉、牙龈肿痛；还可用于因瘀血阻滞所致的经闭疼痛、产后腹痛以及湿热黄疸等症，或作热毒疮疡的外敷药。现代医学研究分析，大黄内含有大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、番泻叶甙A等，还含有鞣质，能刺激大肠，增加肠的张力和蠕动，减少水分吸收，因而有泻下作用。并对葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌等细菌有抑制作用，能促进胆汁等消化液的分泌，降低毛细血管通透性，增加血小板，促进血液凝固，降低血压和胆固醇。现有文献报道采用柱层析及高效液相谱的方法分离，但纯度不高，回收率很低。高速逆流谱(H i g h-s p e e d C o u n t e r c u r r e n t C h r o m a t o g r a p h y，H S C C C)是近些年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的各种问题如：样品易被吸附、损耗和变性，使用其它液相谱法进行制备量分离时，其分配效率会明显降低，溶剂消耗量大，H S C C C 保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环
境缓和，节约溶剂。逆流谱仪能直接进大量粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，甚至能直接接质谱仪等仪器，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。 发明内容
本发明的目的是采用高速逆流谱的方法得到纯度98％以上的单体芦荟大黄素及单体大黄酸。本发明的方案是：首先选择溶剂的两相组合，可选用的两相体系有多个，含水溶剂体系由三个组分或四个组分构成，三个组分为：石油醚，或正庚烷、或正己烷、或正戊烷，或氯仿、或二氯甲烷、或四氯化碳，和乙腈、或甲醇、或乙醇、或丙酮，和水。四个组分为：石油醚，或正庚烷、或正己烷、或正戊烷，和乙酸乙酯、或乙酸丙酯、或乙酸异丙酯、或乙酸正丁酯，和乙腈、或甲醇、或乙醇、或丙酮和水。
采用三个组分体系，以上相为固定相，下相为流动相，在保证上下相体积比大于1前提下，根据溶解度常数，在不破坏体系平衡的情况下，调节三组分的体积比依次为：2-5∶0.5-1.5∶1-5，经过一次分离得到单体芦荟大黄素及单体大黄酸纯品。或采用四组分体系，以上相为固定相，下相为流动相，在保证上下相体积比小于1前提下，根据溶解度常数，在不破坏体系平衡的情况下，调节四组分的体积比依次为：3-9∶1-7∶3-6∶2-6，经过一次分离得到单体芦荟大黄素及单体大黄酸纯品。实验条件适合室温15-30℃，室温对分离效率影响不大。在上述温度范围内，室温较高时，出峰时间略有提前，分离效率变化不大，对芦荟大黄素及大黄酸峰形无影响。 首先按体积比将上述溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开。采用分析型或半制备型高速逆流谱仪，配有N S-1007泵，2m L或20m L进样阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为40或240m L，8823A-U V紫外检测器，Y o k o g a w a 3057便携式记录仪，F C-95自动馏份收集器。将大黄粗提物样品溶解于流动相中待用。进样品前，先用固定相存满整个柱子，调整主
机转速为500-1000rpm(半制备型仪器转速)1500-2000rpm(分
析型仪器转速)，以0.5-3.0m L/m i n的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，从进样阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分，得到固体。
用此方法提取的单体芦荟大黄素及大黄酸纯度都可达到98％以上。适用于从各种工艺途径制备的不同含量芦荟大黄素及大黄酸的大黄粗提物分离制备出高纯度(98％以上)的单体芦荟大黄素及单体大黄酸。适用于用各种型号的逆流谱仪分离制备芦荟大黄素及大黄酸，能直接进大量的粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度。
具体实施方式
实施例1：
选取正己烷-乙醇-水在半制备型逆流谱仪上来分离纯化索式抽提得大黄粗提物中的芦荟大黄素及大黄酸，首先按5∶1∶5体积比将上述溶剂组分配置于分液漏斗中，摇匀后，静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相作为固定相，下相作为流动相。采用半制备型高速逆流谱仪，配有N S-1007泵，20m L进样阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240mL，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057便携式记录仪，F C-95自动馏份收集器。称取400m g大黄粗提物样溶解于20m L流动相中待用。进样前，先用
固定相存满整个柱子，调整主机转速为800r p m，以2.0m L/m i n的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样；然后根据检测器芦荟大黄素及大黄酸的紫外谱图，分别接收芦荟大黄素及大黄酸目标成分。分别得到两种黄固体，其HPLC纯度均达到98％。
实施例2：
选取氯仿-甲醇-水在半制备型逆流谱仪上来分离纯化回流抽提大黄粗提物中芦荟大黄素及大黄酸。先按4∶3∶2体积比将上述溶剂组分配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，
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