(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610695376.8
(22)申请日 2016.08.22
(71)申请人 安徽华澳生物技术有限公司
地址 230001 安徽省合肥市双凤工业区
(72)发明人 孟庆娟 杨晓龙 张广志 胡广伟
(51)Int.Cl.
G01N 21/33(2006.01)
G01N 1/28(2006.01)
G01N 1/38(2006.01)
G01N 1/34(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种硫酸新霉素紫外分光光
度计检测方法。该方法研究了硫酸新霉素与Cu 2+
络合物形成的条件，建立了在酒石酸钾钠碱性介
质中，常温下反应10min～30min，生成蓝络合
物，其中631nm波长处有最大吸收。应用本发明对
硫酸新霉素原料和成品可溶性粉的回收率和含
量测定，结果显示，该方法通用性好、快捷，不受
制剂中其它共存物的干扰，为医药工业提供了硫
酸新霉素含量的快速检测方法。本发明专属性
强，精密度好，
操作简单。权利要求书1页 说明书2页CN 106053374 A 2016.10.26
C N 106053374
A
1.光光度计检测方法，包括以下步骤：
（1）精密称取硫酸新霉素标准品，配成20mg/mL的标准曲线制备液；
（2）精密量取标准曲线制备液于容量瓶中，加入碱性酒石酸铜试液，并用纯水稀释到刻度，制成浓度范围为1～6mg/mL的硫酸新霉素标准曲线；
（3）精密称取硫酸新霉素原粉或成品硫酸新霉素可溶性粉于容量瓶中，完全溶解后过滤；
（4）准确移取滤液于容量瓶中，加入碱性酒石酸铜试液，用纯水稀释至刻度；
（5）充分摇匀后静置10～30min，于最大吸收峰的波长下测定吸光度；
（6）以吸光度 A对浓度 C作线性回归方程，将吸光度代入公式计算硫酸新霉素的含量。
2.根据权利要求1所述的硫酸新霉素紫外分光光度计检测方法，其特征在于，步骤（1）中称取硫酸新霉素标准品0.5g。
3.根据权利要求1所述的硫酸新霉素紫外分光光度计检测方法，其特征在于，步骤（2）中分别精密量取
标准曲线制备液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、7.5mL于容量瓶中，再分别加入2～5mL碱性酒石酸铜试液，并用纯水稀释到刻度，制成浓度范围为1～6mg/mL的硫酸新霉素标准曲线。
4.根据权利要求1所述的硫酸新霉素紫外分光光度计检测方法，其特征在于，步骤（3）中精密称取硫酸新霉素原粉0.2～0.5g或成品硫酸新霉素可溶性粉1～2g于容量瓶中，完全溶解后过滤。
5.根据权利要求1所述的硫酸新霉素紫外分光光度计检测方法，其特征在于，步骤（4）中，准确移取滤液5mL于容量瓶中，加入2mL碱性酒石酸铜试液，用纯水稀释至刻度。
权 利 要 求 书1/1页CN 106053374 A
硫酸新霉素紫外分光光度计检测方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种硫酸新霉素紫外分光光度计检测方法。
背景技术
[0002]硫酸新霉素可溶性粉是一种易溶于水，性质稳定，用途较广的氨基糖苷类抗生素制剂，兽医临床
上广泛用于畜禽的葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等感染引起的胃肠道感染。目前，中国药典2010年版采用微生物检定法测定含量。其操作复杂、测定周期长、试剂价格昂贵，影响因素较多，不过随着新技术的发展，设备自动化程度的提高，此法准确性也得到进一步改善， 不过不适宜在生产过程中进行半成品的质量控制，此法也将逐步被其他方法取代。由于硫酸新霉素结构中缺乏强紫外吸收的基团，多采用衍生化处理后进行含量测定。当前检测新霉素的化学方法常用2，4 —二硝基氟苯 ( D N F B)、邻苯二甲醛 (OPA )、茚三酮-吡啶、乙酰丙酮-甲醛等为衍生试剂，因试验中使用的多为有毒试剂和有机溶剂，增加了操作过程的危险性，给人身带来不利的影响。
发明内容
[0003]本发明要解决的技术问题是提供一种安全简便的硫酸新霉素紫外分光光度计检测方法。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：硫酸新霉素紫外分光光度计检测方法，包括以下步骤：
（1）精密称取硫酸新霉素标准品，配成20mg/mL的标准曲线制备液；
（2）精密量取标准曲线制备液于容量瓶中，加入碱性酒石酸铜试液，并用纯水稀释到刻度，制成浓度范围为1～6mg/mL的硫酸新霉素标准曲线；
（3）精密称取硫酸新霉素原粉或成品硫酸新霉素可溶性粉于容量瓶中，完全溶解后过滤；
（4）准确移取滤液于容量瓶中，加入碱性酒石酸铜试液，用纯水稀释至刻度；
（5）充分摇匀后静置10～30min，于最大吸收峰的波长下测定吸光度；
（6）以吸光度 A对浓度 C作线性回归方程，将吸光度代入公式计算硫酸新霉素的含量。[0005]作为优选：
步骤（1）中称取硫酸新霉素标准品0.5g。
[0006]步骤（2）中分别精密量取标准曲线制备液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、7.5mL于容量瓶中，再分别加入2～5mL碱性酒石酸铜试液，并用纯水稀释到刻度，制成浓度范围为1～6mg/ mL的硫酸新霉素标准曲线。
[0007]步骤（3）中精密称取硫酸新霉素原粉0.2～0.5g或成品硫酸新霉素可溶性粉1～2g 于容量瓶中，完全溶解后过滤。
[0008]步骤（4）中，准确移取滤液5mL于容量瓶中，加入2mL碱性酒石酸铜试液，用纯水稀释至刻度。
[0009]本发明的有益效果是：
（1）使用碱性酒石酸铜试液作为反应试剂，使用安全方便。
[0010]（2）对待测样品进行过滤，减少了对吸光度的影响。
[0011]（3）反应温度和时间的优化。
[0012]与微生物法相比，本发明的分光光度法检测具有简便、快速、易于操作等优点，对试验环境、仪器设备要求不高，适合一般生产企业使用。
具体实施方式
[0013]由于薄层谱法、高效液相谱法、分光光度法等方法中存在反应时间较长或使用了较多的有机溶剂等问题。本实施例的目的是提供一个通用、快捷的药物中硫酸新霉素含量检测方法，满足硫酸新霉素生产控制和制剂检测的需要，以取代费时的药典方法—微生物检定法。
[0014]一种硫酸新霉素紫外分光光度计检测方法，包括以下步骤：
（1）精密称取硫酸新霉素标准品0.5g，配成20mg/mL的标准曲线制备液；
（2）分别精密量取标准曲线制备液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、7.5mL于25mL容量瓶中，分别加
入2～5mL碱性酒石酸铜试液，并用纯水稀释到刻度，制成浓度范围为1～6mg/mL的硫酸新霉素标准曲线；
（3）精密称取硫酸新霉素原粉0.2～0.5g或成品硫酸新霉素可溶性粉1～2g于50mL容量瓶中，完全溶解后过滤；
（4）准确移取滤液5mL于10mL容量瓶中，加入2mL碱性酒石酸铜试液，用纯水稀释至刻度；
（5）充分摇匀后静置10～30min，于最大吸收峰的波长下测定吸光度；
（6）以吸光度 A对浓度 C作线性回归方程，将吸光度代入公式计算硫酸新霉素的含量。[0015]本实施案例研究了硫酸新霉素与Cu2+络合物形成的条件，建立了在酒石酸钾钠碱性介质中，常温下反应10min～30min，生成蓝络合物，其中631nm 波长处有最大吸收。 应用本实施例对硫酸新霉素原料和成品硫酸新霉素可溶性粉的回收率和含量测定，结果显示，该方法通用性好、快捷，不受制剂中其它共存物的干扰，为医药工业提供了硫酸新霉素含量的快速检测方法。本方法专属性强，精密度好，操作简单。
[0016]对于成品硫酸新霉素可溶性粉来说，除了主成份外，还有赋形剂淀粉和葡萄糖等。这些共存物在水中溶解不完全，处理样品时，经过过滤可除去绝大部分，本实施例对其干扰问题作了探索，发现淀粉和低于10%的葡萄糖含量对硫酸新霉素的测定无影响。
[0017]以上所述的本发明实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的权利要求保护范围之内。
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