(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610547261.4
(22)申请日 2016.07.08
(71)申请人 杭州华缔集团生物科技有限公司
地址 311121 浙江省杭州市余杭区仓前街
道绿汀路1号1幢302室
(72)发明人 张治国 周天琼 倪燕红 傅诗丽
黄嘉华 高留根
(74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限
公司 11227
代理人 赵青朵
(51)Int.Cl.
A61K 35/30(2015.01)
A61P 25/28(2006.01)
A23L 33/00(2016.01)
A23L 33/10(2016.01)
A23L 33/175(2016.01)A23L 33/115(2016.01)
(54)发明名称
物及其应用
(57)摘要
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一
种猪脑提取物、含有该猪脑提取物的组合物及其
应用。本发明提供了一种猪脑提取物、含有该猪
脑提取物的组合物及其应用。本发明提供的猪脑
提取物的分子量不超过10kDa，也不低于200Da，
主要成分为小分子多肽或游离氨基酸、脑磷脂、
卵磷脂、肽类神经生长因子等。本发明将猪脑提
组合物经试验表明，
能够具有健脑益智的作用。权利要求书1页 说明书9页CN 105998072 A 2016.10.12 C N 105998072
A
1.一种猪脑提取物的制备方法，其特征在于，将猪脑依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解，然后经过滤、超滤、浓缩、冻干，制得猪脑提取物；
所述胃蛋白酶与猪脑的质量比为(0.1～0.5)：
100；酶解温度为38℃～42℃，pH值为1.6～2.0；时间为5h～7h；
所述胰蛋白酶与猪脑的质量比为(0.1～0.5)：100；酶解温度为38℃～42℃，pH值为7.3～7.7；时间为5h～7h。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述过滤的孔径为300目；所述超滤的孔径为10kDa。
3.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述浓缩采用纳滤，纳滤膜截留分子量不低于200Da，压力为0.8MPa。
4.根据权利要求1所述的制备方法，
其特征在于，所述冻干的程序为：-50℃～-35℃常压冷冻2h～4h后，
使真空度低于20Pa，
然后-20℃冷冻3～8小时、0℃保持6～10小时，再15℃～25℃保持2h～4h。
5.权利要求1～4任一项所述制备方法制备的猪脑提取物。
6.根据权利要求5所述的猪脑提取物，其特征在于，其分子量不大于10kDa ，不小于200Da。
7.一种组合物，其特征在于，包括权利要求5或6所述的猪脑提取物、γ-氨基丁酸和亚麻籽油粉；所述猪
脑提取物、γ-氨基丁酸和亚麻籽油粉的质量比为(2～10)：(5～15)：(5～
15)。
8.权利要求7所述的组合物在制备健脑益智的产品中的应用。
9.一种保健品，其特征在于，包括权利要求7所述的组合物和保健品中可接受的辅料。
10.根据权利要求9所述的保健品，其特征在于，权利要求7所述组合物的质量分数为1％～80％。
权 利 要 求 书1/1页CN 105998072 A
一种猪脑提取物、含有该猪脑提取物的组合物及其应用
技术领域
[0001]本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种猪脑提取物、含有该猪脑提取物的组合物及其应用。
背景技术
[0002]我国第一部老龄事业发展蓝皮书——《中国老龄事业发展报告(2013)》2013年初出版。根据蓝皮书，2012年我国老年人口数量达到1.94亿，老龄化水平达到14.3％，预计2013年老年人口数量突破2亿大关，达到2.02亿，老龄化水平达到14.8％。中国老年人口基数大，人口老龄化进程快，老年人慢性病患病率高，且患病率有每5年增长1倍的趋势该病已经成为不容忽视的一种疾病该病已经成为继心脏病、肿瘤、中风后的第四大死亡病因。老年痴呆轻症患者可有健忘、少言寡语、神志淡漠等人格行为改变，重症患者则神情淡漠、缄默不语、或哭笑无常、举动不经。给病人、家庭和社会发展都带来了巨大的挑战，然而其病因及发病机制尚不明确，加之起病隐匿、病情多样，为和预防带来了极大的困难。因此痴呆已成为我国乃至世界面临的一个日渐严重的问题。
[0003]老年期痴呆是老年期常见的一组慢性进行性精神衰退性疾病，在老年人的疾病谱和死亡谱中占有重要的位置。目前认为，老年期痴呆是由于慢性或进行性大脑结构的器质性损害引起的高级大脑功能障碍的一组症候，是患者在意识清醒的状态下出现的持久的全面的智能减退，表现为记忆力、计算力、判断力、注意力、抽象思维能力、语言功能减退，情感和行为障碍，独立生活和工作能力丧失。老年期痴呆包括老年性痴呆(AD)、血管性痴呆(VD)及混合性痴呆等。
[0004]猪脑，性寒、味甘，入心、肝、肾经，含有丰富的卵磷脂、胆固醇，能补脑益髓、镇惊安神、益虚劳，是猪科动物猪的脑髓。中药医学认为，动物脏器气味醇厚，为血肉有情之品，较草本药物更易被人体吸收，因而能迅速起效，尤其在调养、补益方面效果明显，即“同气相求”之理。而动物脏器与人体
相应内脏在形态、生化特征、组织成分构成与生理功能等方面具有诸多相似性，故古人某一脏器的疾病会以相应的脏器治之，即“以脏补脏”和“以形补形”学说。而猪脑在补脑益智这方面的作用尤为突出。
[0005]目前AD疾病的药物多为化学药物，其副作用明显，效果也较为有限，故而，以猪脑为材料研制具有健脑益智作用的产品具有重要意义。
发明内容
[0006]有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种猪脑提取物、含有该猪脑提取物的组合物及其应用，本发明提供的猪脑提取物能够具有良好的生物活性。将其与γ-氨基丁酸与亚麻籽油复配，能够起到补脑益智的作用。
[0007]本发明提供了一种猪脑提取物的制备方法，其将猪脑依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解，然后经过滤、超滤、浓缩、冻干，制得猪脑提取物；
[0008]胃蛋白酶与猪脑的质量比为(0.1～0.5)：100；酶解温度为38℃～42℃，pH值为1.6
～2.0；时间为5h～7h；
[0009]胰蛋白酶与猪脑的质量比为(0.1～0.5)：100；酶解温度为38℃～42℃，pH值为7.3～7.7；时间为5h～7h。
[0010]在本发明的实施例中，胃蛋白酶与猪脑的质量比为0.2:100；酶解温度为40℃，pH 值为1.8；时间为6h。
[0011]本发明中，胰蛋白酶与猪脑的质量比为0.2:100；酶解温度为40℃，pH值为7.5；时间为6h。
[0012]胃蛋白酶能够将蛋白质分解，其主要作用部位是芳香族氨基酸(如苯丙氨酸、氨酸或酪氨酸)或酸性氨基酸(如亮氨酸)所组成的肽键。本发明采用的胃蛋白酶的酶活力为1:3000。
[0013]胰蛋白酶示肽链内切酶，能够把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其他酶的前体，起活化作用。本发明采用的胰蛋白酶的酶活力为1:12000。
[0014]本发明中，酶解前的猪脑经过清洗，并去除结缔组织，然后低温匀浆破碎。所述低温匀浆破碎的温度为0℃～8℃。
[0015]过滤的孔径为300目；所述超滤的孔径为10kDa。
[0016]过滤采用无纺布，其孔径为300目，过滤后取滤液，弃除残渣。
[0017]超滤采用超滤膜，孔径为10kDa，过滤后取滤液，弃除残渣。
[0018]经过过滤和超滤后，所得滤液经过浓缩，以方便进行冻干。所述浓缩采用纳滤，纳滤膜截留分子量不低于200Da，压力为0.8MPa。
[0019]纳滤不仅能够将提取物体积浓缩，并且能够去除其中的小分子物质，如无机盐、葡萄糖、蔗糖等。通常，被去除的物质分子量不超过200Da。本发明中，纳滤的次数为3次。[0020]猪脑提取物的分子量不超过10kDa，也不低于200Da，主要成分为小分子多肽或游离氨基酸、脑磷脂、卵磷脂、肽类神经生长因子等。
[0021]将浓缩所得的物质再经过过滤，然后进行冻干。
[0022]此次过滤的目的是除去细菌及潜在的衣原体、支原体等小分子病毒，孔径为0.22μm。
[0023]冻干的程序为：
[0024]-50℃～-35℃常压冷冻2h～4h后，
[0025]使真空度低于20Pa，
[0026]然后-20℃冷冻3～8小时、0℃保持6～10小时，再15℃～25℃保持2h～4h。[0027]冻干之后，将所得产物粉碎，即为猪脑提取物。
[0028]写一些实施例中，冻干的程序为：
[0029]-40℃常压冷冻3h后，
[0030]使真空度低于20Pa，
[0031]然后-20℃冷冻5小时、0℃保持8小时，再20℃保持3h。
[0032]冻干之后，将所得产物粉碎，即为猪脑提取物。
[0033]所述粉碎至粒径为80目～100目。
[0034]本发明提供的制备方法制备的猪脑提取物。
[0035]本发明提供的猪脑提取方法采用低温匀浆，工具酶提取，低分子量超滤相结合的方法，提取小分子多肽类活性物质，方法简便，不涉及过多化学试剂，安全有效，且保证了产品有效成分不被破坏。
[0036]本发明还提供了一种组合物，包括本发明提供方法制备的猪脑提取物、γ-氨基丁酸和亚麻籽油粉；其中，猪脑提取物、γ-氨基丁酸和亚麻籽油粉的质量比为(2～10)：(5～15)：(5～15)。
[0037]一些实施例中，猪脑提取物、γ-氨基丁酸和亚麻籽油粉的质量比为2:5:5。[0038]一些实施例中，
猪脑提取物、γ-氨基丁酸和亚麻籽油粉的质量比为5:2:2。[0039]一些实施例中，猪脑提取物、γ-氨基丁酸和亚麻籽油粉的质量比为2:3:3。[0040]猪脑提取物能刺激神经元的能量代谢，改善大脑的血液供应，促进有氧代谢，并使葡萄糖更容易通过血-脑脊液屏障，还能降低脑内乳酸浓度，提高警觉程度、注意力、记忆力等，主要用于脑血管疾病引起的脑细胞及功能损伤。
[0041]γ-氨基丁酸(GABA)又名4-氨基丁酸(4-aminobutyricaeid,4-AB，γ-氨酪酸，白或近白结晶性粉末，分子式为C4H9N02，相对分子量103.2，熔点(mp)203℃-205℃(分解)。GABA能够降低血压，调节脑血管，促进乙酞胆碱合成，使脑细胞活动旺盛，促进脑组织新陈代谢和恢复脑细胞功能；调节心律失常、癫痫，改善脂质代谢、防止动脉硬化、防止皮肤老化、调节激素分泌等功能；减轻慢性疾病如关节炎疼痛；另外其具有类似于谷氨酸甜味，能够增强食品风味，以及在胃酸分泌的中枢调节中起重要作用。γ-氨基丁酸通常由以L-谷氨酸钠为原料经希氏乳杆菌(Lactobacillus hilgardii)发酵、加热杀菌、冷却、活性炭处理、过滤、加入调配辅料(淀粉)、喷雾干燥等步骤生产而成。本发明对γ-氨基丁酸的获取方式不做限定，凡以γ-氨基丁酸为原料制备本发明所述组合物的实施皆在本发明的保护范围之内。本发明使用的γ-氨基丁酸购自浙江益万生物技术有限公司。
[0042]亚麻籽油粉是以亚麻籽油为原料，经微囊包埋技术制成的亚麻籽油微囊粉，富含W-3系多不饱和脂肪酸——“α-亚麻酸”。ω-3系多不饱和脂肪酸是生命的核心物质，是维持人体进化、保持身体健康的人体必需脂肪酸，人体自身无法合成，只能从食物中摄取来满足身体需要。α-亚麻酸是ω-3系不饱和脂肪
酸家族的“家长”，其在人体肝脏内、在去饱和酶和延长酶的作用下，能够转化成为人体必需的生命活性因子——EPA(二十碳五烯酸，俗称血管清道夫)和DHA(二十二碳六烯酸，俗称脑黄金)。亚麻籽油富含ω-3系多不饱和脂肪酸——“α-亚麻酸”。世界科学家对α-亚麻酸历经50余年的研究发现，α-亚麻酸对提高大脑细胞功能、提高记忆力、预防老年痴呆症、预防心脑血管疾病、癌症、糖尿病等具有显著效果。本发明对亚麻籽油粉的获取方式不做限定，凡以亚麻籽油粉为原料制备本发明所述组合物的实施皆在本发明的保护范围之内。本发明使用的亚麻籽油粉购自淳安天龙生物科技有限公司。
[0043]本发明将猪脑提取物、γ-氨基丁酸和亚麻籽油粉进行复配，所得组合物经试验表明，能够具有健脑益智的作用。
[0044]实验表明，以本发明提供的组合物能够显著减少跳台小鼠的错误次数。[0045]本发明提供的组合物在制备健脑益智的产品中的应用。
[0046]一种保健品，其包括本发明提供的组合物和保健品中可接受的辅料。
[0047]本发明提供的保健品中，所述组合物的质量分数为1％～80％。
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