[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101336924A
[43]公开日2009年1月7日
[21]申请号200810137823.3[22]申请日2008.07.03
[21]申请号200810137823.3
[71]申请人中国热带农业科学院热带作物品种
资源研究所
地址571737海南省儋州市宝岛新村
共同申请人中国热带农业科学院热带生物技术
研究所
[72]发明人王祝年 戴好富 王茂媛 梅文莉 曾艳波
吴娇 王建荣 晏小霞 [51]Int.CI.A61K 31/585 (2006.01)A61P 35/00 (2006.01)A61K 36/27 (2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 4 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明涉及医药技术领域，具体为强心苷化合
物Frugoside在制备肿瘤药物中的新用途。Fru
goside可利用多种常规分离手段从牛角瓜中分离获
得或者通过合成以及半合成手段获得。
200810137823.3权 利 要 求 书第1/1页 1、牛角瓜中强心苷化合物的抗肿瘤新用途，其特征在于：利用多种常规分离手段从牛角瓜中分离获得或者通过合成以及半合成手段获得的强心苷化合物Frugoside在制备肿瘤药物中的用途。
Frugoside的结构：
Frugoside R＝6-去氧阿洛糖(6-deoxyallose)
2、如权利要求1所述的强心苷化合物Frugoside在制备肿瘤药物中的新用途，其特征在于：将化合物Frugoside与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型在制备癌症药物中的应用。
3、如权利要求1所述的强心苷化合物Frugoside在制备肿瘤药物中的用途，其特征在于：Frugoside制成的制剂，可用于制备包括口腔癌、鼻咽癌、肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、胆癌、胆道癌、胆管癌、肾癌、胰腺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、急性白血病、恶性淋巴瘤、脑瘤、骨肿瘤、黑素瘤、神经胶质瘤等多种癌症疾病的药物。
200810137823.3说 明 书第1/4页
牛角瓜中的强心苷化合物的抗肿瘤新用途
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体是牛角瓜中的强心苷化合物Frugoside在肿瘤方面的新用途。
背景技术
牛角瓜[Calotripis gigantea(L.)Dryand ex Ait.f.]为萝藦科(Asclepiadaceae)牛角瓜属(Calotropis)植物。别名：五狗卧花、羊浸树、断肠草。牛角瓜属植物全世界共有6个种，分布于东南亚。我国产牛角瓜和白花牛角瓜两种，分布于海南、云南、广东和广西等地，生长于低海拔向阳山坡、旷野和海边。牛角瓜根、茎、叶、果各部及白汁液均有大毒和强烈的刺激性，食少量能引起呕吐和下泻，食大量则会发生严重的腹痛及肠炎，以致死亡，妊娠的人畜中毒引起流产。牛角瓜入药可用作发汗剂、除痰剂、驱虫剂、驱风剂和强心剂，用于湿疹、麻疯病、梅毒、象皮病、哮喘等病症。
牛角瓜根、茎、叶的主要成分为强心苷类化合物。强心苷类化合物是心力衰竭不可缺少的重要药物，临床上用以心力衰竭及节律障碍等心脏疾病。发明人对牛角瓜中的强心苷类化合物进行了分离和抗肿瘤活性测试，发现了牛角瓜中的强心苷化合物Frugoside在抗肿瘤方面的新用途。
发明内容
本发明的目的在于公开强心苷化合物F r u g o s i d e在制备抗肿瘤药物中的新用途。 强心苷化合物Frugoside可以从牛角瓜中利用包括吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析，减压柱层析等多种常规分离手段获得，或者通过合成以及半合成手段获得。与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型。用于制备包括口腔癌、鼻咽癌、肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、胆癌、胆道癌、胆管癌、肾癌、胰腺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、急性白血病、恶性淋巴瘤、脑瘤、骨肿瘤、黑素瘤、神经胶质瘤等多种癌症疾病的药物。
强心苷化合物Frugoside的结构如下：
Frugoside R＝6-去氧阿洛糖(6-deoxyallose)
本发明对化合物进行了抗肿瘤活性测试，结果表明该化合物对多种肿瘤细胞株具有较强的抑制作用。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
实施例1：强心苷化合物Frugoside的提取分离：
牛角瓜根(26.7k g)用95％的乙醇室温浸提3次，减压回收乙醇至无醇味。将乙醇提取物分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚部分(236.1g)，剩下的水液经过滤后上大孔吸附树脂(D-101)柱层析，先后用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，经浓缩得到甲醇部分(256.1 g)。得到的甲醇部分过减压柱分成若干馏分，再经硅胶柱、反相硅胶柱和葡聚糖凝胶柱反复柱层析得到化合物Frugoside(12.46g)。
实施例2：强心苷化合物Frugoside的结构鉴定：
利用光谱技术，包括紫外、红外、核磁共振及高分辨质谱分析，鉴定了实施例1中的强心苷化合物F r u g o s i d e的结构。运用2D-N M R技术对化合物糖上的13C-N M R，1H-N M R数据首次进行了归属。(见附表1、2)
实施例3：强心苷化合物Frugoside的体外抑瘤实验：
采用M T T法测试了强心苷化合物F r u g o s i d e，对人体的胃癌细胞S G C-7901、慢性骨髓性白血病细胞K562、人口腔表皮癌细胞KB、骨纤维肉瘤HT-1080、骨肉瘤(G-292、KHOS/NP)、前列腺癌L N C a p、胃腺癌(K K L S、M K N-28、M K N-45)等细胞株的体外抑瘤活性(结果见附表3)。活性测试方法如下：实验设阴性对照组(水)、D M S O溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉
素C)和8个不同浓度(0.8，1.6，3.2，6.3，12.5，25，50，100)的待测样品，每个浓度设2个平行。
收集对数生长期细胞，血球计数板计数，按每孔4500个癌细胞量接种于96孔平底细胞培养板中，置于5％C O2、湿度90％以上、37℃温箱中培养。24h后取出加入一定量的待测样品，继续培养3d后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况，接着每孔加入5m g/m L的M T T溶液(溶于平衡盐溶液P B S)50μL，37℃反应4h后，将细胞培养液吸出，每孔加入100μL D M S O将F o r m a z a n e充分溶解，将细胞培养板置于M K3酶标仪上，用570nm波长测各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率。
以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50％时样品的浓度(IC50)，样品活性结果即以半数抑制浓度(IC50)表示。
实施例4：强心苷化合物F r u g o s i d e 8g与微晶纤维素78g及硬脂酸镁8g混合，混合物用单冲压片机打成直径5mm，重量100mg的片剂。本片剂中每片含Frugoside 10mg。结合病症，每次1-2片，每日服用2-3次。
实施例5：强心苷化合物F r u g o s i d e 20g与乳糖100g及硬脂酸镁8g混合，以每300m g填充胶囊。本胶囊剂中，每个胶囊含F r u g o s i d e 50m g。结合病症，每次1-2个，每日服用3-4次。
附表1、实施例2中强心苷化合物Frugoside的理化常数
Frugoside：白针状结晶，mp 165-169℃；IR(KBr)3435，2935，1737cm-1；FAB-MS(pos.) m/z(％)：559([M+Na]+，8)，537([M+H]+，4).
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