(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011110309.8
(22)申请日 2020.10.16
(71)申请人 中国辐射防护研究院
地址 030006 山西省太原市小店区学府街
102号
(72)发明人 王若琪 李建国 高洁 刘欢
刘梦雅 秦秀军
(74)专利代理机构 北京天悦专利代理事务所
(普通合伙) 11311
代理人 任晓航 周敏毅
(51)Int.Cl.
G01N 30/02(2006.01)
(54)发明名称一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法(57)摘要本发明属于药物分析技术领域，涉及一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法。所述的检测方法采用高效液相谱法，先分别用不同已知浓度的溴化苄对照品溶液分别上样检测测定峰面积后，确定峰面积与溴化苄浓度之间的标准曲线，然后再将供试品溶液以同样的检测条件上样检测测定峰面积后，将峰面积代入所述的标准曲线以确定供试品中溴化苄的含量。利用本发明的药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法，能够样品处理简单、专属性强、灵敏度和准确度高的进行原料药及合成中间体中基因毒性杂 质溴化苄含量的检测。权利要求书1页 说明书6页 附图2页CN 112305100 A 2021.02.02
C N 112305100
A
1.一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法，其特征在于：所述的检测方法采用高效液相谱法，先分别用不同已知浓度的溴化苄对照品溶液分别上样检测测定峰面积后，确定峰面积与溴化苄浓度之间的标准曲线，然后再将供试品溶液以同样的检测条件上样检测测定峰面积后，将峰面积代入所述的标准曲线以确定供试品中溴化苄的含量，
所述的高效液相谱法的具体检测条件如下：
谱柱：Alltech Alltima Phenyl；
流动相：甲醇-水；
检测波长：226nm；
柱温：25-35℃；
流速：0.5-2.0ml/min；
进样量：10-30μl；
梯度洗脱程序：0-12分钟，甲醇体积分数保持为35％；12-15分钟，甲醇体积分数从35％线性升至90％；15-23分钟，甲醇体积分数保持为90％；23-31分钟，甲醇体积分数保持为35％。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的溴化苄对照品溶液的配制方法为：精密称取溴化苄对照品适量，置量瓶中，用乙腈定量稀释制成每1ml中含溴化苄150ng的溶液，即得溴化苄对照品溶液。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的供试品溶液的配制方法为：精密称定药物样品2
5mg，置量瓶中，加二甲基亚砜0.6ml，振摇使药物溶解，再用乙腈稀释至5ml刻度，摇匀，即得5mg/ml的供试品溶液。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的检测方法采用岛津LC -20AT型高效液相谱仪。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的谱柱的尺寸为4.6×250mm，填料颗粒平均粒度为5μm。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的柱温为30℃，所述的流速为1.0ml/min，所述的进样量为20μl。
权 利 要 求 书1/1页CN 112305100 A
一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法
技术领域
[0001]本发明属于药物分析技术领域，涉及一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法。
背景技术
[0002]溴化苄是一种重要的有机合成工业原料，分子式为C6H5CH2Br或C7H7Br，分子量171，在制药、化工等领域被广泛应用。溴化苄具有刺激性，可引起明显的呼吸道刺激，胸部紧束感。吸入高浓度溴化苄蒸汽可出现呼吸道炎症，甚至肺水肿。溴化苄有催泪作用，皮服接触可引起皮炎和荨麻疹。且溴化苄含有卤代烷烃这一基因毒性杂质警示结构，具有潜在的基因毒性。
[0003]按照ICH M7 Draft consensus guideline assessment and control of DNA reactive(Mutagenic)impurities in pharmaceuticals to limit potential carcinogenic risk要求，对于可能含有溴化苄这种基因毒性杂质的药物，质量控制应更加严格。
[0004]现有技术中对于药物中溴化苄含量的检测方法几乎空白。鉴于药物中存在大量基质且相对复杂，基因毒性杂质含量较低，因此需要建立一种专属性强、灵敏度高的分析方法，用于原料药及合成中间体中基因毒性杂质溴化苄含量的检测。
发明内容
[0005]本发明的目的是提供一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法，以能够样品处理简单、专属性强、灵敏度和准确度高的进行原料药及合成中间体中基因毒性杂质溴化苄含量的检测。
[0006]为实现此目的，在基础的实施方案中，本发明提供一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方
法，所述的检测方法采用高效液相谱法，先分别用不同已知浓度的溴化苄对照品溶液分别上样检测测定峰面积后，确定峰面积与溴化苄浓度之间的标准曲线，然后再将供试品溶液以同样的检测条件上样检测测定峰面积后，将峰面积代入所述的标准曲线以确定供试品中溴化苄的含量，
[0007]所述的高效液相谱法的具体检测条件如下：
[0008]谱柱：Alltech Alltima Phenyl；
[0009]流动相：甲醇-水；
[0010]检测波长：226nm；
[0011]柱温：25-35℃；
[0012]流速：0.5-2.0ml/min；
[0013]进样量：10-30μl；
[0014]梯度洗脱程序：0-12分钟，甲醇体积分数保持为35％；12-15分钟，甲醇体积分数从35％线性升至90％；15-23分钟，甲醇体积分数保持为90％；23-31分钟，甲醇体积分数保持
为35％。
[0015]在一种优选的实施方案中，本发明提供一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法，其中所述的溴化苄对照品溶液的配制方法为：精密称取溴化苄对照品适量，置量瓶中，用乙腈定量稀释制成每1ml中含溴化苄150ng的溶液，即得溴化苄对照品溶液。[0016]在一种优选的实施方案中，本发明提供一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法，其中所述的供试品溶液的配制方法为：精密称定药物样品25mg，置量瓶中，加二甲基亚砜0.6ml，振摇使药物溶解，再用乙腈稀释至5ml刻度，摇匀，即得5mg/ml的供试品溶液。[0017]在一种优选的实施方案中，本发明提供一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法，其中所述的检测方法采用岛津LC-20AT型高效液相谱仪。
[0018]在一种优选的实施方案中，本发明提供一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法，其中所述的谱柱的尺寸为4.6×250mm，填料颗粒平均粒度为5μm。
[0019]在一种优选的实施方案中，本发明提供一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法，其中所述的柱温为30℃，所述的流速为1.0ml/min，所述的进样量为20μl。[0020]本发明的有益效果在于，利用本发明的药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法，能够样品处理简单、专属性强、灵敏度和准确度高的进行原料药及合成中间体中基因毒性杂质溴化苄含量的检测。
[0021]本发明采用高效液相谱法对药物中溴化苄进行定性、定量分析。与现有技术相比，本发明的分
析方法专属性好，灵敏度、准确度和精密度高，适用性很广，能够可靠地对包括难气化药物在内的药物原料中的基因毒性杂质溴化苄进行检测。
附图说明
[0022]图1为实施例2的专属性试验所得空白溶剂的典型谱图。
[0023]图2为实施例2的专属性试验所得对照品溴化苄的典型谱图。
[0024]图3为实施例2的专属性试验中所得供试品的典型谱图。
[0025]图4为实施例2的专属性试验中100％加标供试品的典型谱图(其中保留时间为13.546min的峰2是溴化苄的峰)。
具体实施方式
[0026]以下结合实施例对本发明的具体实施方式作出进一步的说明。
[0027]实施例1：试验准备
[0028]1、仪器和试剂准备
[0029]仪器：
[0030]岛津LC-20AT型高效液相谱仪(含二元高压泵、柱温箱、自动进样器、紫外检测器、LabSolutions谱工作站，日本岛津公司)；赛多利斯SQP型分析天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)。
[0031]试剂：
[0032]甲醇、乙腈均为美国天地公司生产(谱纯)；二甲基亚砜(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，谱纯)；溴化苄(上海麦克林生化科技有限公司，谱纯)；试验用水为娃哈哈纯净水。
[0033]2、溶液配制
[0034](1)溴化苄对照品溶液：精密称取溴化苄对照品适量，置量瓶中，用乙腈定量稀释制成每1ml中含溴化苄150ng的溶液，即得溴化苄对照品溶液。
[0035](2)供试品溶液：精密称定药物白藜芦醇样品25mg，置量瓶中，加二甲基亚砜0.6ml，振摇使药物溶解，再用乙腈稀释至5ml刻度，摇匀，即得5mg/ml的供试品溶液。[0036]3、高效液相谱检测条件确定
[0037]谱柱：Alltech Alltima Phenyl(4.6×250mm，5μm)；
[0038]流动相：甲醇-水；
[0039]检测波长：226nm；
[0040]柱温：30℃；
[0041]流速：1.0ml/min；
[0042]进样量：20μl；
[0043]梯度洗脱程序：0-12分钟，甲醇体积分数保持为35％；12-15分钟，甲醇体积分数从35％线性升至90％；15-23分钟，甲醇体积分数保持为90％；23-31分钟，甲醇体积分数保持为35％。
[0044]实施例2：专属性试验
[0045]取空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液和加标供试品溶液各20μl，分别注入液相谱仪，记录谱图，结果见图1至图4。结果表明空白溶剂和供试品中的基质不干扰溴化苄的测定，溴化苄与相邻的谱峰之间的分离度大于1.5，表明本发明的方法的专属性良好。[0046]实施例3：系统适用性试验
[0047]精密称定药品25mg，置5ml量瓶中，加二甲基亚砜0.6ml，振摇使溶解，再精密加入溴化苄对照品
适量，置于同一容量瓶中，用乙腈定量稀释制成每1ml中含药品5mg，含溴化苄150ng的混合溶液。在如实施例1的谱条件下，连续进样6次，记录谱图，计算溴化苄保留时间、峰面积、与相邻谱峰分离度的RSD值，结果见如下表1。
[0048]表1 系统适用性试验结果
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