(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010186523.5
(22)申请日 2020.03.17
(71)申请人 广西科技大学
地址 545006 广西壮族自治区柳州市东环
路268号
(72)发明人 刘纯友 黄承都 许金蓉
(74)专利代理机构 长沙正奇专利事务所有限责
任公司 43113
代理人 周晟
(51)Int.Cl.
G01N 30/02(2006.01)
G01N 30/06(2006.01)
G01N 30/86(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种快速测定角鲨烯的方法，
谱法测定，其谱条件为：谱柱：十八烷基键合
硅胶柱；流动相：甲醇-水体积百分比96-100:1-
3；检测器：二极管阵列检测器检测波长190-200
nm；流速为0.6～1.0毫升/分；检测时间：3.5-6分
钟。本发明的目的是创建一种快速测定角鲨烯的
方法，并对百香果籽油中角鲨烯进行测定，以期
为百香果籽油的营养评价以及百香果籽油产品
的研究与开发提供理论依据。权利要求书1页 说明书8页 附图2页CN 111307981 A 2020.06.19
C N 111307981
A
1.一种快速测定角鲨烯的方法，其特征在于：
采用高效液相谱法测定，其谱条件为：
谱柱：十八烷基键合硅胶柱；
流动相：甲醇-水体积百分比96-100:1-3；
检测器：二极管阵列检测器；
检测波长190-200 nm；
流速为0.6～1.0毫升/分
检测时间：3.5-6分钟。
2.如权利要求1所述的快速测定角鲨烯的方法，其特征在于：所述的高效液相测定时，柱温控制在30-40℃。
3.如权利要求1所述的快速测定角鲨烯的方法，其特征在于：所述的谱柱规格为150mm ×
4.6mm，5μm。
4.如权利要求1所述的快速测定中角鲨烯的方法，其特征在于：
所述的高效液相测定时，供试品溶液的制备包括以下步骤：
A、取百香果果籽粉，加入石油醚，然后在超声波-微波协同下进行提取，提取液冷却至室温，过滤后残渣用石油醚重复提取，合并提取液，蒸发回收溶剂制得油样；
B、取油样加入氢氧化钾溶液，然后在超声波-微波协同下进行皂化反应，反应液冷却至室温，过滤，用正己烷萃取滤液，将萃取液浓缩至少量溶液的残留物，再在氮气保护下将残留物浓缩至干，用正己烷溶解，过滤膜后，即得。
5.如权利要求4所述的快速测定角鲨烯的方法，其特征在于：
所述的高效液相测定时，供试品溶液的制备包括以下步骤：
A、取3-8重量份的百香果果籽粉，加入40-80重量份的石油醚，然后在超声波-微波协同下进行提取，提取液冷却至室温，过滤后残渣用40-80重量份的石油醚重复提取，合并提取液，蒸发回收溶剂制得油样；
B、取油样与浓度为1.0 mol/L的氢氧化钾溶液，油样与氢氧化钾溶液重量比为1-5:400，在超声波-微波协同下进行皂化反应5-30分钟，反应液冷却至室温，过滤，用正己烷萃取滤液1-3次，每次加入相当于油样重量100-400倍的正己烷，合并萃取液，萃取液用体积百分比为8-15%的乙醇水溶液洗3次，然后将萃取液回收溶剂，先将萃取液浓缩至少量溶液的残留物，再在氮气保护下将残留物浓缩至干，用2.0mL正己烷溶解，过0.45μm微孔滤膜备用。
6.如权利要求4或5所述的快速测定水百香果籽中角鲨烯的方法，其特征在于：所述的步骤A中，超声波-微波协同提取的条件为：超声功率200-300W，微波功率150-250W，温度35-45℃，提取时间为3-10分钟。
7.如权利要求4或5所述的快速测定角鲨烯的方法，其特征在于：所述的步骤B中，超声波-微波协同下皂化反应的条件为：超声功率150-250W，微波功率150-200W，温度70-80℃。
8.如权利要求1所述的快速测定角鲨烯的方法，其特征在于：
所述的高效液相测定时，标准品工作液的制备包括以下步骤：
采用梯度稀释法将角鲨烯标准品用谱级正己烷制备成浓度为1.0mg/mL的角鲨烯标准储备液，然后用谱级正己烷配制成100-1000μg/mL角鲨烯标准品工作液。
权 利 要 求 书1/1页CN 111307981 A
一种快速测定角鲨烯的方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种植物中化学成分的检测方法领域，具体涉及一种快速测定角鲨烯的方法。
背景技术
[0002]角鲨烯又名鲨烯，化学名为2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，是由六个异戊二烯首尾连接而成的三萜类化合物，具有携氧、抗辐射、抗肿瘤、调控脂质代谢等多种生物活性功能。由于角鲨烯具有多种重要生物活性功能，因此角鲨烯被广泛应用于医药产品、保健食品和化妆品的开发。百香果是一种生长在热带、亚热带地区的经济水果。百香果籽油是一种优质的植物油，含量有丰富的不饱和脂肪酸，其中亚油酸和油酸含量达85％以上，同时还含有黄酮、β-胡萝卜素、生育酚等多种
生物活性物质，具有较强的抗氧化作用。截止目前，关于百香果籽油中的角鲨烯分析一直未见相关文献报道。基于此，本发明的目的是创建一种快速测定角鲨烯的方法，并对百香果籽油中角鲨烯进行测定，以期为百香果籽油的营养评价以及百香果籽油产品的研究与开发提供理论依据。
[0003]角鲨烯又名鲨烯，化学名为2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，是由六个异戊二烯首尾连接而成的三萜类化合物，具有携氧、抗辐射、抗肿瘤、调控脂质代谢等多种生物活性功能。由于角鲨烯具有多种重要生物活性功能，因此角鲨烯被广泛应用于医药产品、保健食品和化妆品的开发。百香果是一种生长在热带、亚热带地区的经济水果。百香果籽油是一种优质的植物油，含量有丰富的不饱和脂肪酸，其中亚油酸和油酸含量达85％以上，同时还含有黄酮、β-胡萝卜素、生育酚等多种生物活性物质，具有较强的抗氧化作用。截止目前，关于百香果籽油中的角鲨烯分析一直未见相关文献报道。
发明内容
[0004]本发明的目的是创建一种快速测定角鲨烯的方法，尤其是对百香果籽油中角鲨烯进行测定，以期为百香果籽油的营养评价以及百香果籽油产品的研究与开发提供理论依据。
[0005]所述的快速测定角鲨烯的方法，采用高效液相谱法测定，其谱条件为：[0006]谱柱：十八烷基键合硅胶柱；
[0007]流动相：甲醇-水体积百分比96-100:1-3；
[0008]检测器：二极管阵列检测器；
[0009]检测波长190-200nm；
[0010]流速为0.6～1.0毫升/分
[0011]检测时间：3.5-6分钟。
[0012]所述的高效液相测定时，柱温控制在30-40℃。
[0013]所述的谱柱规格为150mm×4.6mm，5μm。
[0014]所述的高效液相测定时，供试品溶液的制备包括以下步骤：
[0015]A、取百香果果籽粉，加入石油醚，然后在超声波-微波协同下进行提取，提取液冷却至室温，过滤后残渣用石油醚重复提取，合并提取液，蒸发回收溶剂制得油样；
[0016]B、取油样加入氢氧化钾溶液，然后在超声波-微波协同下进行皂化反应，反应液冷却至室温，过滤，用正己烷萃取滤液，将萃取液浓缩至少量溶液的残留物，再在氮气保护下将残留物浓缩至干，用正
己烷溶解，过滤膜后，即得。
[0017]所述的高效液相测定时，供试品溶液的制备包括以下步骤：
[0018]A、取3-8重量份的百香果果籽粉，加入40-80重量份的石油醚，然后在超声波-微波协同下进行提取，提取液冷却至室温，过滤后残渣用40-80重量份的石油醚重复提取，合并提取液，蒸发回收溶剂制得油样；
[0019]B、取油样与浓度为1.0mol/L的氢氧化钾溶液，油样与氢氧化钾溶液重量比为1-5: 400，在超声波-微波协同下进行皂化反应5-30分钟，反应液冷却至室温，过滤，用正己烷萃取滤液1-3次，每次加入相当于油样重量100-400倍的正己烷，合并萃取液，萃取液用体积百分比为8-15％的乙醇水溶液洗3次，然后将萃取液回收溶剂，先将萃取液浓缩至少量溶液的残留物，再在氮气保护下将残留物浓缩至干，用2.0mL正己烷溶解，过0.45μm微孔滤膜备用。[0020]所述的步骤A中，超声波-微波协同提取的条件为：超声功率200-300W，微波功率150-250W，温度35-45℃，提取时间为3-10分钟。
[0021]所述的步骤B中，超声波-微波协同下皂化反应的条件为：超声功率150-250W，微波功率150-200W，温度70-80℃。
[0022]所述的高效液相测定时，标准品工作液的制备包括以下步骤：
[0023]采用梯度稀释法将角鲨烯标准品用谱级正己烷制备成浓度为1.0mg/mL的角鲨烯标准储备液，然后用谱级正己烷配制成100-1000μg/mL角鲨烯标准品工作液。[0024]本发明的有益效果如下：
[0025]本发明的快速测定角鲨烯的方法，可以大大缩短角鲨烯的制备和检测时间，提高工作效率，降低分析成本，增加检测效益。具体在于：
[0026](1)适用范围广
[0027]本发明利用超声波的空化效应和微波的热效应，在超声波和微波的协同作用下，实现对样品中角鲨烯的完全萃取，与现有专利文献报道相比，本发明的提取方法不局限于百香果籽油中的角鲨烯的测定，而且其他植物油、动物油脂、动物源食品等均可适用，其适用范围广泛。
[0028](2)快速
[0029]本发明在角鲨烯检测方法方面：出入境检验检疫行业标准SN/T 4785-2017《出口植物油中角鲨烯的测定》中的高效液相谱测定角鲨烯需要15min，本发明检测角鲨烯只需4min，检测速度提高3倍以上。
[0030]在百香果籽油制备方面：单独的超声波提取百香果籽油需要33min(程谦伟等，2010)，单独的微波提取百香果籽油需要8min(程谦伟等，2010)，但本发明利用超声波-微波协同萃取只需5min。在角鲨烯
制备方面：目前粮油行业检测标LS/T 6120-2017《粮油检验植物油脂中角鲨烯的测定气相谱法》需要皂化回流50min，本发明方法皂化反应只需10min 即可完成皂化反应，皂化反应时间缩短5倍。试样的制备时间短，工作效率大幅度提升。
附图说明
[0031]图1：本发明高效液相谱法的角鲨烯标准品谱图。
[0032]图2：本发明高效液相谱法的样品角鲨烯谱图。
[0033]图3：本发明高效液相谱法的标准曲线图。
具体实施方式
[0034]实施例1
[0035]1、供试品溶液的制备包括以下步骤：
[0036]A、取3g的百香果果籽粉置于超声波-微波联合萃取仪中，加入40g的石油醚，然后在超声波-微波协同下进行提取，提取条件为超声功率200W，微波功率150W，温度35℃，提取时间为3分钟，然后提取液冷却至室温，过滤后残渣用40g的石油醚重复提取，合并提取液，蒸发回收溶剂制得油样；
[0037]B、取油样与浓度为1.0mol/L的氢氧化钾溶液置于超声波-微波联合萃取仪中，油样与氢氧化钾溶液重量比为1:400，在超声波-微波协同下进行皂化反应5分钟，皂化反应的条件为：超声功率150W，微波功率150W，温度70℃；皂化反应液冷却至室温，过滤，用正己烷萃取滤液1次，每次加入相当于油样重量100倍的正己烷，合并萃取液，萃取液用体积百分比为8％的乙醇水溶液洗3次，然后将萃取液回收溶剂，先将萃取液浓缩至少量溶液的残留物，再在氮气保护下将残留物浓缩至干，用2.0mL正己烷溶解，过0.45μm微孔滤膜备用。[0038]2、标准品工作液的制备包括以下步骤：
[0039]采用梯度稀释法将角鲨烯标准品用谱级正己烷制备成浓度为1.0mg/mL的角鲨烯标准储备液，然后用谱级正己烷配制成100μg/mL角鲨烯标准品工作液。
[0040]3、采用高效液相谱法测定的谱条件为：
[0041]谱柱：十八烷基键合硅胶柱；
[0042]流动相：甲醇-水体积百分比96:1；
[0043]检测器：二极管阵列检测器
[0044]检测波长190nm；
[0045]流速为0.6毫升/分
[0046]检测时间：3分钟。
[0047]所述的高效液相测定时，柱温控制在30℃。
[0048]所述的谱柱规格为150mm×4.6mm，5μm。
[0049]实施例2
[0050]1、供试品溶液的制备包括以下步骤：
[0051]A、取8g的百香果果籽粉置于超声波-微波联合萃取仪中，加入80g的石油醚，然后在超声波-微波协同下进行提取，提取条件为超声功率300W，微波功率250W，温度45℃，提取时间为10分钟，然后提取液冷却至室温，过滤后残渣用80g的石油醚重复提取，合并提取液，蒸发回收溶剂制得油样；
[0052]B、取油样与浓度为1.0mol/L的氢氧化钾溶液置于超声波-微波联合萃取仪中，油样与氢氧化钾溶液重量比为5:400，在超声波-微波协同下进行皂化反应30分钟，皂化反应的条件为：超声功率250W，微波功率200W，温度80℃；皂化反应液冷却至室温，过滤，用正己
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