[19]
中华人民共和国专利局
[12]发明专利申请公开说明书
[11]公开号CN 1144273A [43]公开日1997年3月5日
[21]申请号95116001.X [22]申请日95.9.1
[71]申请人郑国亮
地址上海市安顺路351弄34号105号
[72]发明人郑国亮 [74]专利代理机构上海专利商标事务所代理人章鸣玉
[51]Int.CI 6C12P 21/06A61K 38/01A23J 1/06
C12S 3/22
权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页
[54]发明名称
法
[57]摘要
本发明提供用混合酶水解动物屠宰血制取多肽
及氨基酸的方法，即在pH3-5、温度30-60℃条件下 用木瓜蛋白酶和/或酸性蛋白酶水解以及在pH7-9、 温度30-60℃条件下用胰蛋白酶和/或碱性蛋白酶水
解。采用混合酶分阶段处理，使血蛋白水解完全，
所得产物为小分子多肽和氨基酸。水解产物溶解性
好、分散度佳、十分稳定，吸收率达95％以上。
95116001.X权 利 要 求 书第1/1页 1.从动物血制取多肽及氨基酸的方法，其特征在于：
1)取血抗凝，干燥成粉；
2)在pH3-5，温度30-60℃条件下，用木瓜蛋白酶和/或酸性蛋白酶水解4-6小时；
3)在pH7-9、温度30-60℃条件下，用胰蛋白酶和/或碱性蛋白酶水解4-6小时；
4)调节pH至中性，加热灭活酶，过滤。
2.按权利要求1所述的方法，其中抗凝剂为0.5-1％枸缘酸钠。
3.按权利要求1所述的方法，其中木瓜蛋白酶浓度为0.2-1.0％。
4.按权利要求1所述的方法，其中酸性蛋白酶的浓度为0.2-0.5％。
5.按权利要求1所述的方法，其中胰蛋白酶的浓度为0.1-0.3％。
6.按权利要求1所述的方法，其中碱性蛋白酶的浓度为0.1-0.3％。
7.按权利要求1所述的方法，其中酶灭活的温度为70-90℃，灭活时间为15分钟至1小时。
8.按权利要求1所述的方法，其中水解物过滤后的滤液加赋形剂后冷冻干燥或喷雾干燥成粉。
9.按权利要求1-7所述的方法，其中水解物过滤后的滤液再以3000-5000转/分离心20-30分钟，取上清液。
10.按权利要求9所述的方法，其中离心后的淀淀物冷冻干燥成粉。
95116001.X说 明 书第1/5页
通过酶法水解动物屠宰血
制取多肽及氨基酸的方法
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及用酶解法从动物屠宰血制取多肽及氨基酸的方法。
动物屠宰血是富含蛋白质和有益微量元素的天然资源，但以往除了部分作为食用外，大量屠宰血都白白浪费，同时还造成严重的环境污染。
中国专利申请C N 1080282A从屠宰血提取氨基酸，C N 1094618A从畜血中提取血红素与蛋白质粉，两
者均采用有机溶剂提取，存在回收溶剂等问题。
近年来发展了生物酶解方法，如CN 1084890A用胃蛋白酶水解动物血来制备食用血红素，欧洲专利EP 436747采用胃蛋白酶水解与超滤技术相结合的方法制备血红素。它们采用单一的胃蛋白酶，水解不完全，成本也高，形成的血红素是不溶性胶体，不易被人体吸收。 本发明的目的是提供成本较低的混合酶水解屠宰血的方法，以利于变废为宝，减少环境污染，开发利用蛋白质再生资源。本发明的另一目的是提供一种水解较彻底的混合酶水解方法，使得到的水解产物能被人体充分吸收。
本发明的方法包括以下步骤：
1.取血抗凝，干燥成粉；
2.在pH3-5、温度30°-60℃条件下，用木瓜蛋白酶和/或酸性蛋白酶水解4-6小时；
3.在pH7-9、温度30°-60℃条件下，用胰蛋白酶和/或碱性蛋白酶水解4-6小时；
4.调节pH至中性，加热灭活酶，过滤。
本发明的具体实施方案详述如下：
在即获的畜、禽类屠宰血中加入0.5-1％抗凝剂，在60°-90℃温度下干燥，使成为粉末状，备用。酶解时将蛋白粉溶于水中，调整p H至弱酸性(p H3-5)。在30°-60℃保温条件下，加入0.2-1.0％木瓜蛋白酶和/或0.2-0.5％酸性蛋白酶水解4-6小时，再调整p H至中性偏酸性(p H7-9)，加入0.1-0.3％胰蛋白酶和/或0.1-0.3％碱性蛋白酶，继续反应4-6小时。然后，将p H调至中性，升温至70°-90℃灭活15分钟至1小时。以上过程应尽量按无菌要求进行操作，水解锅最好是封闭的。
将水解物过滤，除去沉淀颗粒。在滤液中添加赋形剂后冷冻干燥或喷雾干燥成粉末。
更佳的是，在水解物过滤后，将滤液以3000-5000转/分离心20-30分钟，上清液以常规方法制成口服液或静脉注射液，沉淀物冷冻干燥后制成胶囊。
在本发明的方法中采用的抗凝剂为枸橼酸钠或草酸钠等，调节pH值的试剂为稀盐酸、稀硫酸、稀醋酸、氢氧化钠或碳酸氢钠水溶液等，赋形剂为淀粉、羧甲基纤维素(CMC)、甲基纤维素(MC)或甘露醇等。
本发明方法采用混合蛋白酶分阶段处理动物屠宰血，使粘度高、分子量大、不易吸收的血蛋白降解为小分子多肽及少量氨基酸。 图1是水解物经离心后的上清液的质谱图。
从图1可见，上清液中所含水解产物的分子量均在2000道尔顿以下，其中大部分在1000道尔顿左右，为小分子多肽和部分氨基酸。 离心后的沉淀物中多为小分子蛋白质和少量多肽。 本发明方法所得水解产物溶解性好，分散度佳，十分稳定，吸收率达95％以上。
本发明方法所得水解产物富含铁质，是十分理想的补铁营养品，经动物试验证明，具有升高白细胞和血红蛋白的作用。
本发明方法所得水解产物是极好的食品、保健品和食源物(包括静脉高营养制剂)的原料，粗制品也是极好的饲料蛋白质添加剂。
以下用实施例和实验例对本发明作更详细的说明。这些实施例和实验例仅仅是说明性的，并不构成对本发明权利要求的限制。 实施例1
在新鲜猪血中按重量加入0.8％枸橼酸钠，80℃干燥，得到粉末状物，备用。
10克猪血粉加90克蒸馏水，混匀，用稀盐酸调节pH至3，加入0.2克木瓜蛋白酶(酶活力21-40U/m g)和0.2克酸性蛋白酶(活力2000U/mg)，在无菌封闭的反应锅内连续反应6小时。
降温以停止反应，加1N N a O H调节p H至8.5，加入0.3克碱性蛋白酶(活力2000U/mg)，在56℃下连续反应6小时。
降温停止反应，用稀盐酸将p H调至中性，在80℃下保温45分钟。将反应物用纱布过滤。滤液以3000转/分离心半小时，取上清液加入1％甘露醇，冷冻干燥成粉末状。
实施例2
取新鲜鸡血按重量加0.7％枸橼酸钠。在70℃温度下干燥成粉末状备用。
10公斤鸡血粉加90公斤蒸馏水混匀，将p H调至5，加入1％木瓜蛋白酶(酶活力6000U/mg)，在无菌、封闭、恒温条件下(35℃)，连续反应4小时。
降温(停止反应)，调p H至8，加入0.1％胰蛋白酶(活力1∶250)和0.1％碱性蛋白酶(活力2000U/mg)，在35℃条件下，继续反应5小时。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议