(10)申请公布号 (43)申请公布日 2013.11.27
C N 103404365 A
(21)申请号 201310267657.X (22)申请日 2013.07.01
A01G 1/04(2006.01)C05G 3/00(2006.01)
(71)申请人鲁东大学
地址264025 山东省烟台市红旗中路186号(72)发明人蔡德华 杨立红(54)发明名称
一种姬松茸液体菌种制作技术的改进方法，属于食用菌栽培学领域。姬松茸在真菌分类上属担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，蘑菇科，蘑菇属，原产于巴西，又巴西蘑菇。其肉质鲜美可口，子实体内含有多糖、核酸、甾醇类等多种活性成分。经常食用具有降血脂、降低胆固醇作用。姬松茸属草腐菌类，主要栽培原料为麦草、稻草和棉籽壳等农作物秸秆。而我国农作物秸秆资源丰富，全国年产量约5.3亿吨，我省年产量约4000万吨，这些农作物秸秆绝大部分被焚烧，浪费资源，污染环境。本研究着眼于把食用菌深层发酵技术与姬松茸优质高产栽培结合起来，使食用菌液体菌种培养技术在姬松茸的规模化生产上得到广泛的应用和推广，为开发姬松茸产品做出贡献。(51)Int.Cl. 权利要求书1页 说明书9页 附图2页
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
权利要求书1页 说明书9页 附图2页(10)申请公布号CN 103404365 A *CN103404365A*
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1.一种姬松茸液体菌种制作技术的改进方法，其特征在于在制作液体菌种时用专用母种代替二级摇瓶种，专用母种的制作不仅成本低于二级摇瓶种，而且用专用母种制作液体菌种时，不使用摇床等大型设备，因而不仅减化了操作过程，同时也大大降低了生产投资。
2.一种姬松茸液体菌种制作技术的改进方法，其特征在于建立姬松茸最佳液体菌种栽培工艺。
3.如权利要求2所述的建立姬松茸最佳液体菌种栽培工艺，其特征在于最佳摇瓶培养基为葡萄糖3%，小麦粉1%，花生饼1.5%，硫酸铵0.2%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.1%，VB 110mg/L 。
4.如权利要求2所述的建立姬松茸最佳液体菌种栽培工艺，其特征在于最佳发酵罐培养基为葡萄糖3%，小麦粉1%，花生饼1.5%，硫酸铵0.2%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.1%，VB 110mg/L 。
5.如权利要求2所述的建立姬松茸最佳液体菌种栽培工艺，其特征在于最佳栽培袋培养料配方为麦草28%，棉籽壳42%，牛粪20%，麦麸5%，石灰2.5%，尿素0.5%，过磷酸钙1%，石膏1%。
权 利 要 求 书
CN 103404365 A
一种姬松茸液体菌种制作技术的改进方法
技术领域
[0001] 一种姬松茸液体菌种制作技术的改进方法，属于食用菌栽培学领域。
背景技术
[0002] 姬松茸（Agaricus blazei Mussill）在真菌分类上属担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，蘑菇科，蘑菇属，原产于巴西，又巴西蘑菇。其肉质鲜美可口，子实体内含有多糖、核酸、甾醇类等多种活性成分，对肿瘤，特别是腹水瘤、痔疮、神经痛等具有一定疗效。经常食用具有降血脂、降低胆固醇作用。近年来日本东京药科大学证实，姬松茸所含多糖的抗肿瘤活性远远高于灵芝，在被研究的15种具有抗癌活性的食用菌中位居首位。具有极高的营养价值和药用价值，在日本引起日本美食、保健和医药界的极大兴趣和关注。日本人将这种菇与松茸相媲美，故而得名。我国尚未发现野生姬松茸，1992年由福建农科院从日本引种并进行驯化研究，目前国内已有一定规模栽培，但由于中国人对其独特的杏仁香味还不太习惯，对其营养和药用价值认识不够充分，同时由于栽培工艺上的繁琐，目前在国内市场没有得到更好开发，现有产品主要出口日本，干品价格在30万元/吨左右。
[0003] 姬松茸属草腐菌类，主要栽培原料为麦草、稻草和棉籽壳等农作物秸秆。而我国农作物秸秆资源丰富，全国年产量约5.3亿吨，我省年产量约4000万吨，这些农作物秸秆绝大部分被焚烧，浪费资源，污染环境。本研究着眼于把食用菌深层发酵技术与姬松茸优质高产栽培结合起来，使食用菌液体菌种培养技术在姬松茸的规模化生产上得到广泛的应用和推广，为开发姬松茸产品做出贡献。
发明内容
[0004] 一、姬松茸液体菌种制作技术的改进
应用液体菌种进行栽培袋的生产，由于液体菌种发菌点多，菌龄整齐，繁衍速度快，发菌时间短，因而降低了污染率，提高了生物学效率。栽培袋的生产所用液体菌，通常是二级摇瓶种。是通过斜面母种、一级摇瓶种得到的。本实验采用木屑母种代替二级摇瓶种，直接作为发酵罐的上罐用种，旨在简化栽培菌袋的生产工序，降低生产成本。
[0005] 材料和方法
1.1供试菌种姬松茸4号（福建）
1.2专用母种的制备：略
1.3液体菌种制作：配方为3%葡萄糖，1%小麦粉，3%花生饼，0.2%(NH
4)
2
SO
4
，
0.2% KH
2PO
4
，0.1%MgSO
4
·7H
2
O ，10mg/L VB
1
。
[0006] 在250mL三角瓶中，装入140mL 培养液，1.2kg/cm2灭菌30min，冷却后将培养12天的斜面菌丝接种于液体培养基中，25℃，190 r/min，摇床培养7天，即为一级摇瓶种。接10%的一级摇瓶种于二级摇瓶中，按上述方法培养4天，即得二级摇瓶种。
[0007] 发酵罐培养：培养基同摇瓶培养基，121℃灭菌，冷却至25℃，接种，每隔24h取样，，测其菌球大小，菌丝干重及菌球密度。测定方法同上。
[0008] 实验结果
2.1发酵周期及菌球产量
以二级摇瓶种和专用母种接种制作的液体菌种，发酵周期及菌球产量见图1
从图中可以看出，二级摇瓶种和专用母种接种制作的液体菌种生长曲线基本一致。生长周期及菌球产量均无明显变化。
[0009] 菌球大小及密度
从表1可知，二级摇瓶种和专用母种接于液体培养基中，形成的菌球大小及密度均无明显变化，
表1 接二级摇瓶种和专用母种的液体菌球生长状况
Table1 The growth station of the liquid mycelium pellet from
secondary shaking bottle seed and special-made seed
项目大小（mm）密度（个/mL）
二级摇瓶种 0.8～1.5 500～700
专用母种 0.8～1.5 500～700
3.小结实验结果表明，在制作液体菌种时用专用母种代替二级摇瓶种，虽然菌球产量和密度均没有增加，但由于专用母种的制作不仅成本低于二级摇瓶种，而且用专用母种制作液体菌种时，不使用摇床等大型设备，因而不仅减化了操作过程，同时也大大降低了生产投资。生产者更易接受。
[0010] 二、增稠剂对姬松茸深层发酵的影响
液体菌种以其产量大、生产周期短、可工业化生产等优点，已受到人们的普遍关注。但实际生产中发现液体菌种往往会出现菌丝球过大的问题（直径3mm以上），造成菌丝球中心呈现氧和营养饥饿状态，不
利于生物量的大幅度提高，减少了栽培时的发菌点，影响了菌丝在固体料中的恢复生长。本试验针对食用菌深层培养特点，在对溶解氧影响不大的前提下，研究了增稠剂对深层发酵菌丝球大小及生物量的影响。
[0011] 材料和方法
1.1供试菌种：姬松茸4号（斜面）福建
1.2发酵培养基：葡萄糖3% 小麦粉1% 花生饼2% (NH
4)
2
SO
4
0.3% KH
2
PO
4
0.2%
VB
110mg/L MgSO
4
0.1%
1.3增稠剂：明胶（M）羧甲基纤维素（Cm）琼脂（G）淀粉（S）
1.4培养条件：500ml三角瓶装液量150ml在频率190rpm的摇床上于250C下培养8天
2.结果与分析
从表1可知，随着增稠剂量的增加，直径再2mm以下的菌球比例逐渐增加，生物量增
大，但当增稠剂浓度大时，菌丝生物量又会随之下降，增稠剂对菌球大小的影响主要由于增加了培养液的粘性拉力，菌丝间易被发酵液机械性地拉开，从而使菌丝球小型化、供氧充分、营养良好，在溶解氧变化不大的情况下，生物量增加，如果增稠剂过量，发酵液溶解氧含量就受到影响，这时，即使高粘度拉力仍能使菌球小型化比例进一步提高，但菌球会明显减少，生物量也随之下降。
[0012] 小结
适当添加增稠剂，不仅可使菌丝球小型化，且所添加的增稠剂均是菌体生长所需的营养物质，还可增加生物量，有利于以获得以增加发菌点为目的液体菌种生产。
[0013] 姬松茸（Agaricus blazei Murrill）味道鲜美、营养丰富且具有多种药用价值，在国内外市场很受欢迎，供不应求，是一种具有广阔栽培前景的珍稀食药兼用菌。目前，国内栽培姬松茸产量均较低，一般在4～5 kg/m2左右，远远低于日本约9.1 kg/m2的产量。为了提高姬松茸的产量，本研究采用我国华北地区的常用栽培原料，用不同比例的棉籽壳和麦草并添加牛粪为主料，对姬松茸的生物学效率进行了桶栽试验，筛选出了高产配方，本文报道这一结果，为高产栽培这种珍稀食用菌提供基础资料。
[0014] 材料和方法
1.1 供试菌种引自福建省三明真菌研究所，编号:4号。菌种重新分离复壮。[0015] 栽培种采用罐头瓶（500mL）装麦粒种，每瓶装培养基折合干料约120g。
[0016] 材料处理牛粪晒干、粉碎、过直径0.5cm筛，麦草切成10～15cm长。用肥沃园田土制粗土粒，直径1～2cm；用黄粘土制细土粒，直径0.5～1cm。覆土前，用pH8～9的石灰水和5%甲醛溶液将土粒喷湿后，用塑料薄膜覆盖2d。
[0017] 培养料配方按表1配方称取培养料1和11各300kg，按常规方法将培养料1发酵13d，培养料11发酵7d，然后，将这两种培养料分别晒干，用不同比例将这两种培养料混合，可得到表1中11个配方。不同培养料的成分含量见表1 。
[0018] 表1不同配方培养料成分含量（%）*
培养料麦草棉籽壳牛粪麦麸石灰尿素
1700205 2.50.5
2637205 2.50.5
35614205 2.50.5
44921205 2.50.5
54028205 2.50.5
63535205 2.50.5
72842205 2.50.5
82140205 2.50.5
91456205 2.50.5
10763205 2.50.5
11070205 2.50.5
* 表1培养料各配方中均含过磷酸钙1%，石膏1%。
[0019] 栽培方法
采用桶栽法：按表1中不同配方将培养料加水拌匀后，装入17×33cm的聚丙烯塑料袋中，121℃灭菌2h。冷却后，倒入高18cm，直径18cm的塑料桶（桶底均匀打5个直径0.5cm 的小孔）中，每桶装量折合干料约 360 g。在桶底面和桶口料面上接麦粒栽培种约35 g （湿重），每个配方接20桶，用塑料薄膜封口后，25℃恒温培养。10d后去掉塑料薄膜，覆土，然后置室内菇房，22～26℃出菇培养。
[0020] 生物学效率和产量计算方法
生物学效率为20个桶的平均值，生物学效率（%）=子实体鲜重/发酵前培养料干重。产量为整个栽培期内每平方米收获的子实体鲜重。子实体鲜重为剪掉菌根（菌根约占子实体重量的10%）后的重量。
[0021] 结果与讨论
2.1不同培养料的生物学效率
（1）用棉籽壳为主料比用麦草姬松茸4号在不同培养料中生长生物学效率不同（表2）：
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